胡蕾蕾，吳東恩，張梅芳，黃惠蘭，陳芷菲，朱珊珊

河源市婦幼保健院病理科，廣東 河源 517000

子宮內(nèi)膜炎為婦科常見(jiàn)疾病，其中急性子宮內(nèi)膜炎所致的盆腔區(qū)域疼痛、月經(jīng)過(guò)多、白帶增多、痛經(jīng)等表現(xiàn)較明顯，診治較容易。慢性子宮內(nèi)膜炎的病程較長(zhǎng)，治療不徹底易復(fù)發(fā)，從而影響患者生活質(zhì)量[1]，且慢性子宮內(nèi)膜炎缺乏典型癥狀，臨床易被忽視。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜炎癥能夠?qū)е聦m腔微環(huán)境改變，影響胚胎著床，導(dǎo)致不孕、種植失敗、流產(chǎn)等不良妊娠結(jié)局[2]。田海英等[3]研究也發(fā)現(xiàn)，不明原因的不孕不育和反復(fù)流產(chǎn)與慢性子宮內(nèi)膜炎有直接關(guān)系。免疫組織化學(xué)染色檢查是診斷此類(lèi)疾病的重要手段，子宮內(nèi)膜中有組織細(xì)胞、淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞浸潤(rùn)，其中以漿細(xì)胞的診斷價(jià)值最高[4]。CD138為漿細(xì)胞的特異性表層抗原，其免疫組織化學(xué)染色檢查能夠有效顯示漿細(xì)胞，提高慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷效能[5]。本研究通過(guò)分析CD138在慢性子宮內(nèi)膜炎合并不孕患者中的表達(dá)，推測(cè)其表達(dá)和不孕癥患者的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年7月至2020年6月在河源市婦幼保健院接受子宮內(nèi)膜活檢的85例不孕癥患者為研究對(duì)象，所有患者均接受蘇木精伊紅染色，依據(jù)蘇木精伊紅染色形態(tài)學(xué)診斷結(jié)果將所有患者分為慢性子宮內(nèi)膜炎陰性組(簡(jiǎn)稱陰性組，n=38)，慢性子宮內(nèi)膜炎疑似組(簡(jiǎn)稱疑似組，n=31)和慢性子宮內(nèi)膜炎陽(yáng)性組(簡(jiǎn)稱陽(yáng)性組，n=16)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均已婚，未避孕情況下規(guī)律性生活超過(guò)1年以上，且未懷孕；②月經(jīng)周期及性激素正常；③無(wú)輸卵管積液、卵巢腫瘤及子宮肌瘤等；④就診前2 d內(nèi)無(wú)陰道用藥史；⑤均接受蘇木精伊紅染色和免疫組化染色檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：①男方因素不孕或輸卵管因素不孕或不明原因不孕，合并盆腔器質(zhì)性病變；②其他生殖道感染。慢性子宮內(nèi)膜炎陰性組患者年齡24~39歲，平均(30.19±2.77)歲；月經(jīng)周期21~35 d，平均(28.75±2.11)d；不孕時(shí)間2~9年，平均(5.67±1.22)年。慢性子宮內(nèi)膜炎疑似組患者年齡23~39歲，平均(30.34±2.84)歲；月經(jīng)周期20~36 d，平均(28.52±2.18)d；不孕時(shí)間2~10年，平均(5.52±1.03)年。慢性子宮內(nèi)膜炎陽(yáng)性組患者年齡23~40歲，平均(30.91±2.65)歲；月經(jīng)周期21~35 d，平均(29.03±1.96)d；不孕時(shí)間2~9年，平均(5.74±1.03)年。三組患者的基線資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有患者知情并簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢查方法 采集所有患者子宮內(nèi)膜活檢組織，予以10%中性福爾馬林液固定，脫水，常規(guī)石蠟包埋和切片。(1)蘇木精伊紅染色檢查：將切片脫蠟，并浸入蘇木蘇染色，脫水后用中性樹(shù)膠封片，于顯微鏡下觀察。(2)免疫組織化學(xué)染色檢查：采用羅氏BenchMark GX全自動(dòng)免疫組化染色儀，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)設(shè)置染色程序，進(jìn)行自動(dòng)免疫組織化學(xué)檢測(cè)。染色按照要求在每張玻片上設(shè)陽(yáng)性對(duì)照。所用抗體CD138購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，蘇木精對(duì)比染色。

1.3 結(jié)果判定 (1)蘇木精伊紅染色判定：子宮內(nèi)膜間質(zhì)可見(jiàn)漿細(xì)胞為慢性子宮內(nèi)膜炎陽(yáng)性；子宮內(nèi)膜間質(zhì)中可見(jiàn)纖維化伴淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，但無(wú)漿細(xì)胞為慢性子宮內(nèi)膜炎疑似；無(wú)以上表現(xiàn)為慢性子宮內(nèi)膜炎陰性。(2)免疫組化染色判定：CD138定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，漿細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)弱陽(yáng)性，細(xì)胞膜強(qiáng)陽(yáng)性。每個(gè)400倍高倍鏡視野下子宮內(nèi)膜間質(zhì)中可見(jiàn)≥5個(gè)典型漿細(xì)胞診斷為慢性子宮內(nèi)膜炎。CD138免疫組化染色中無(wú)漿細(xì)胞或400倍高倍鏡下漿細(xì)胞<5個(gè)為非慢性子宮內(nèi)膜炎[6]。

1.4 隨訪觀察 所有慢性子宮內(nèi)膜炎疑似者和陽(yáng)性者均予以常規(guī)抗炎治療，通過(guò)門(mén)診及電話訪問(wèn)等方式隨訪至少6個(gè)月，記錄患者妊娠情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x-±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 陰性組、疑似組和陽(yáng)性組患者的CD138表達(dá)水平比較 陽(yáng)性組患者的CD138陽(yáng)性率明顯高于疑似組和陰性組，且疑似組患者的CD138陽(yáng)性率明顯高于陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1和圖1。

表1 陰性組、疑似組和陽(yáng)性組患者的CD138表達(dá)水平比較[例(%)]

圖1 CD138免疫組織化學(xué)染色檢查(均為40×10)

2.2 CD138陰性組與陽(yáng)性組患者的妊娠情況比較 經(jīng)6個(gè)月隨訪，CD138陽(yáng)性組患者的妊娠率為36.00%(9/25)，明顯高于CD138陰性組的11.67%(7/60)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.388，P<0.05)。

3 討論

慢性子宮內(nèi)膜炎為婦科常見(jiàn)疾病之一，大部分患者缺乏特異性癥狀，也無(wú)典型的宮腔鏡下表現(xiàn)，臨床診斷率較低。有研究報(bào)道[7]，近年來(lái)子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生率呈上升趨勢(shì)。最近有研究表明[8]，炎癥細(xì)胞存在細(xì)胞毒作用，能夠降低精子活動(dòng)力或引起精子死亡，減少輸卵管中精子數(shù)量，影響生育，導(dǎo)致不孕。另外，引起炎癥的病原體又可激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)，并生成抗體，刺激大量炎性細(xì)胞及細(xì)胞因子的釋放，不利于孕卵著床和胎盤(pán)植入及胚胎發(fā)育[9]。又有文獻(xiàn)報(bào)道，慢性子宮內(nèi)膜炎可影響子宮內(nèi)膜容受性，為不孕癥的危險(xiǎn)因素之一，其胚胎轉(zhuǎn)移著床率顯著低于未合并慢性子宮內(nèi)膜炎不孕者[10]。但目前臨床有關(guān)慢性子宮內(nèi)膜炎合并不孕癥缺乏統(tǒng)一認(rèn)識(shí)及有效處理。

子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中的漿細(xì)胞在慢性子宮內(nèi)膜炎的組織學(xué)診斷中有重要作用。但傳統(tǒng)蘇木精伊紅染色時(shí)漿細(xì)胞的可見(jiàn)度較低，加上漿細(xì)胞易與子宮內(nèi)膜間質(zhì)的單核細(xì)胞及纖維細(xì)胞混淆，另外分泌期提取的內(nèi)膜組織存在間質(zhì)細(xì)胞密度增加及腺上皮水腫樣變化，不利于漿細(xì)胞鑒別[11]。以上結(jié)果表明蘇木精伊紅染色在漿細(xì)胞識(shí)別上可能存在一定程度的主觀判斷偏差，影響臨床診斷準(zhǔn)確性。

近年來(lái)有研究提出CD138作為配體聚糖，是漿細(xì)胞的良好標(biāo)記物，能夠直接檢測(cè)漿細(xì)胞，并可排除形態(tài)類(lèi)似細(xì)胞的影響，為慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷提供參考依據(jù)[12]。生理狀態(tài)下成人子宮內(nèi)膜組織中的CD138僅在上皮細(xì)胞表達(dá)，間質(zhì)細(xì)胞不表達(dá)CD138，從而維持子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞。有國(guó)外文獻(xiàn)表明[13]，CD138免疫組織化學(xué)染色檢查對(duì)內(nèi)膜間質(zhì)中漿細(xì)胞的識(shí)別價(jià)值較高。CD138能夠結(jié)合趨化因子，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞在炎癥部位聚集，并抑制T細(xì)胞遷移，又可調(diào)節(jié)機(jī)體白細(xì)胞-內(nèi)皮細(xì)胞反應(yīng)，從而參與炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致滋養(yǎng)層的遷移及侵襲[14]。多種病原菌能夠?qū)е滤拗骷?xì)胞表層CD138分子從外功能區(qū)脫落，從而增強(qiáng)自身毒性作用。子宮內(nèi)膜受損時(shí)上皮細(xì)胞膜外的CD138分子發(fā)生脫落，并與細(xì)菌或成纖維細(xì)胞結(jié)合，參與機(jī)體內(nèi)膜組織修復(fù)和炎癥反應(yīng)。

本研究中85例不孕癥患者均進(jìn)行了免疫組織化學(xué)染色檢查，其中慢性子宮內(nèi)膜炎陽(yáng)性患者CD138陽(yáng)性率顯著高于可疑組及陰性組，間接提示疑似慢性子宮內(nèi)膜炎標(biāo)本經(jīng)蘇木精伊紅染色無(wú)法識(shí)別漿細(xì)胞時(shí)，CD138免疫組織化學(xué)染色檢查能夠有效顯示漿細(xì)胞，從而易于分辨漿細(xì)胞，利于慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷。建議在常規(guī)蘇木精伊紅染色基礎(chǔ)上聯(lián)合CD138免疫組織化學(xué)染色檢查，以彌補(bǔ)形態(tài)學(xué)檢查的不足，減少蘇木精伊紅染色的誤診和漏診。對(duì)于懷疑慢性子宮內(nèi)膜炎患者建議其進(jìn)行CD138免疫組織化學(xué)染色檢查，進(jìn)一步明確診斷。另外本研究觀察發(fā)現(xiàn)，CD138陽(yáng)性者妊娠率顯著高于CD138陰性者，考慮通過(guò)分析CD138免疫組織化學(xué)染色檢查能夠指導(dǎo)慢性子宮內(nèi)膜炎不孕癥患者的臨床治療，從而改善患者生殖預(yù)后。

綜上所述，臨床通過(guò)免疫組織化學(xué)染色檢查CD138的表達(dá)情況可有效識(shí)別子宮內(nèi)膜中漿細(xì)胞，為慢性子宮內(nèi)膜炎合并不孕癥的診斷提供參考依據(jù)，從而對(duì)不孕癥的治療可能有一定指導(dǎo)價(jià)值。但本研究的樣本量有限，且觀察指標(biāo)不夠全面，CD138表達(dá)在慢性子宮內(nèi)膜炎合并不孕癥中的價(jià)值仍有待更多大規(guī)模、多中心的研究進(jìn)一步論證及分析。