陳富祿 唐欷柯 彭智鵬 唐 超 粟本義 黎洪棉 韋 俊

(1 昭平縣人民醫(yī)院外科，廣西昭平縣 546800；2 南寧市第四人民醫(yī)院皮膚科，廣西南寧市 530023；3 南寧夢想整形美容醫(yī)院，廣西南寧市 530021；4 廣西壯族自治區(qū)人民醫(yī)院整形美容外科，廣西南寧市 530021；5 廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院燒傷整形外科，廣西南寧市 530021)

隨著年齡增長，人體皮膚逐漸變薄并失去彈性和張力，易出現(xiàn)皺紋、松弛及干燥等老化現(xiàn)象。補充外源性膠原蛋白或促進內(nèi)源性膠原蛋白生成是改善皮膚光老化的關(guān)鍵，在此基礎(chǔ)上增強局部血管化、改善血運可達到改善皮膚老化、促進面部年輕化的目的。改良型自體富血小板纖維蛋白(advanced platelet-rich fibrin，A-PRF)是在傳統(tǒng)富血小板纖維蛋白基礎(chǔ)上進行改良優(yōu)化的血小板濃縮物，其含有大量的血小板，激活后可釋放血管內(nèi)皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、堿性成纖維細(xì)胞生長因子等因子，這些生長因子具有促進創(chuàng)面愈合、刺激血管生成、促進細(xì)胞增殖和遷移等功能[1-3]。重組類人膠原蛋白是一種應(yīng)用基因工程技術(shù)將膠原蛋白的mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后經(jīng)酶切修飾后重組，再經(jīng)過高密度發(fā)酵、分離、純化等工藝生產(chǎn)得到的新型膠原蛋白[4-7]，含有高純度、高濃度類人膠原蛋白的面膜具有極好的屏障修復(fù)能力和保濕性能，可更有效地幫助肌膚鎖住水分，補充膠原蛋白，目前已在臨床上得到廣泛應(yīng)用。本研究探討A-PRF聯(lián)合重組類人膠原蛋白面膜對女性面部光老化皮膚的修復(fù)作用?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2022年1月在南寧市第四人民醫(yī)院皮膚科及南寧夢想整形美容醫(yī)院進行美容咨詢并確診為面部皮膚光老化的80例女性患者作為研究對象，通過抽簽法將其分為對照組和治療組，每組40例。皮膚光老化診斷標(biāo)準(zhǔn)：由于皮膚光老化的臨床表現(xiàn)呈多樣化和細(xì)微化，目前尚未形成統(tǒng)一的診斷標(biāo)準(zhǔn)，本研究主要是根據(jù)臨床表現(xiàn)進行診斷，即面部暴露部位出現(xiàn)皮膚松弛、深淺皺紋、皮膚粗糙、皮革樣外觀、色素沉著斑或色素脫失斑、紫癜、毛細(xì)血管擴張、外觀明顯改變或消失、膚色常呈灰黃等。納入標(biāo)準(zhǔn)：Fitzpatrick皮膚分型為Ⅲ～Ⅳ型；排除標(biāo)準(zhǔn)：合并感染、腫瘤、肝病、代謝及免疫等相關(guān)疾病的患者。對照組年齡24～60(38.00±8.49)歲，皮膚分型：Ⅲ型31例，Ⅳ型9例；治療組年齡24～60(38.00±9.62)歲，皮膚分型：Ⅲ型33例，Ⅳ型7例。兩組患者的年齡和皮膚分型比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)過南寧市第四人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理審查委員會批準(zhǔn)，且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器和材料 VISIA皮膚圖像分析儀由美國Can field科技公司生產(chǎn)(型號：Canfield Visia, Visia-CR, Reveal)；SOFT 5.5皮膚性質(zhì)測試儀由意大利Allegation科技公司生產(chǎn)。重組類人膠原蛋白面膜(可麗金)由西安巨子生物基因技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)。

1.2.2 自體APRF的制備[8-9]無菌條件下抽取患者靜脈血20 mL至真空負(fù)壓管中，立即以1 500 r/min離心14 min。離心后全血可分為3層，最底層為紅細(xì)胞，上層為血漿，中間層即為富血小板纖維蛋白(platelet-rich fibrin，PRF)。用無菌長鑷取出中間層半固態(tài)狀的蛋白膠，剪去其下段紅細(xì)胞部分即可獲得PRF蛋白凝膠。將獲得的PRF蛋白凝膠放入另一支10 mL離心管中，4 ℃條件下靜置5 d后，PRF蛋白凝膠會持續(xù)釋放出含多種細(xì)胞因子的液態(tài)A-PRF，用無菌注射器抽吸A-PRF，收集后備用。

1.2.3 治療方法 (1)治療組用電動微針將5 mL A-PRF原液一次性導(dǎo)入面部皮膚光老化部位的真皮內(nèi)，然后用重組類人膠原蛋白面膜(可麗金)外敷，1次/d，連續(xù)使用1周。(2)對照組單純使用重組類人膠原蛋白面膜(可麗金)外敷，1次/d，連續(xù)使用1周。

1.3 觀察指標(biāo) 分別于治療前、治療后1周及1個月，同時采用VISIA皮膚圖像分析儀和SOFT 5.5皮膚性質(zhì)測試儀對兩組患者的皮膚性質(zhì)進行定量分析和評價。定量分析和評價方法如下：治療前后均由同一名醫(yī)生和同一名護士采用同一相機、在同一光源下、以同一角度對面部區(qū)域進行攝影并存檔；測試條件為室溫24 ℃，濕度40%～50%；患者在測試前30 min進入測試環(huán)境中安靜待測。(1)SOFT 5.5皮膚性質(zhì)檢測儀主要檢測皮膚的pH值、水分、彈性和油脂分泌情況。將檢測儀的探頭垂直置于皮膚上5～10 s，待測定值穩(wěn)定后讀取數(shù)值，取5次測定的平均值計算，皮膚pH值為5.0～7.0說明不易衰老，水分和彈性的SOFT 5.5數(shù)值越大提示光老化程度越輕，油脂的SOFT 5.5數(shù)值越大提示光老化程度越嚴(yán)重。(2)VISIA皮膚圖像分析儀主要檢測皮膚色素斑、皺紋、紋理和毛孔情況。首先清潔面部，15 min后用VISIA皮膚圖像分析儀拍攝患者面部圖像，分析區(qū)域盡量避免反光區(qū)域和頭發(fā)干擾，所有皮膚檢測均由同一醫(yī)生操作。測定時VISIA皮膚圖像分析儀自動生成VISIA 絕對分值，皮膚色素斑、皺紋、紋理、毛孔的VISIA值越大，提示皮膚衰老越嚴(yán)重。(3)不良反應(yīng)：觀察治療后1周至1個月的不良反應(yīng)發(fā)生情況，包括紅腫、過敏、發(fā)熱。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，組內(nèi)治療前后比較采用配對t檢驗，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組治療后的表現(xiàn) 兩組患者治療后1周及1個月，面部皮膚狀態(tài)均獲得不同程度的改善，其中治療組患者皮膚的皺紋、紋理、毛孔、水分、彈性和油脂方面的改善明顯優(yōu)于對照組，表現(xiàn)為細(xì)膩度及光澤度明顯增加、細(xì)紋減少，主觀感受皮膚滋潤并有飽滿感和彈性等。兩組患者在觀察期間均無不良反應(yīng)發(fā)生。典型案例見圖1。

圖1 典型案例

2.2 兩組VISIA絕對分值比較 治療前，兩組患者的皮膚紋理、毛孔、色素斑、皺紋的VISIA絕對分值比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。治療組患者治療后1周及1個月的紋理VISIA絕對分值低于治療前且低于對照組，對照組患者治療后1個月的紋理VISIA絕對分值低于治療前(均P<0.05)，但治療后1周的紋理VISIA絕對分值與治療前差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；兩組治療后1周及1個月的毛孔VISIA絕對分值均低于治療前，且治療組患者治療后1個月的毛孔VISIA絕對分值低于對照組(均P<0.05)；兩組患者治療后1周及1個月的色素斑VISIA絕對分值與治療前比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)，治療組與對照組間的差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)；治療組患者治療后1周及1個月的皺紋VISIA絕對分值均低于治療前且低于對照組，對照組患者治療后1個月紋理VISIA的絕對分值低于治療前(均P<0.05)，但治療后1周的絕對分值與治療前差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者各項指標(biāo)的VISIA絕對分值比較 (x±s)

2.3 兩組SOFT 5.5數(shù)值比較 治療前，兩組患者的皮膚pH值，水分、彈性和油脂的SOFT 5.5數(shù)值比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。治療后1周及1個月，治療組患者的皮膚pH值，水分、彈性的SOFT 5.5數(shù)值均高于治療前且高于對照組，油脂的SOFT 5.5數(shù)值均低于治療前且低于對照組(均P<0.05)；而對照組患者治療后1周和1個月的皮膚pH值，水分、彈性的SOFT 5.5數(shù)值，以及治療后1周油脂的SOFT 5.5數(shù)值與治療前比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)；治療后1個月，對照組患者油脂的SOFT 5.5數(shù)值低于治療前(P<0.05)。見表2。

表2 兩組患者各項指標(biāo)的SOFT 5.5數(shù)值比較 (x±s)

3 討 論

隨著年齡增長，皮膚中的成纖維細(xì)胞合成能力降低，導(dǎo)致膠原蛋白含量減少和結(jié)構(gòu)改變，使皮膚變薄并失去彈性和張力，還可導(dǎo)致皮下脂肪減少、真皮纖維斷裂、汗腺及皮脂腺分泌減少，從而出現(xiàn)皺紋、松弛及干燥等老化現(xiàn)象。為老化的皮膚補充膠原蛋白是抗衰老的關(guān)鍵，這是因為膠原蛋白進入皮膚后可引導(dǎo)上皮細(xì)胞遷移至缺損區(qū)，使上皮細(xì)胞產(chǎn)生趨化因子如血小板生長因子、纖維連接蛋白等，促進自身成纖維細(xì)胞合成膠原和其他細(xì)胞外間質(zhì)成分，從而達到改善皮膚老化的目的[10]。類人膠原蛋白是人工合成且與天然膠原蛋白極其相似的高分子材料，其具有良好的組織相容性和易被吸收等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于抗皮膚老化中，目的是迅速補充皮膚組織流失的膠原蛋白，修復(fù)斷裂的纖維框架，改善皮膚皺紋，恢復(fù)皮膚彈性[11]。類人膠原蛋白的微針導(dǎo)入療法是目前臨床上應(yīng)用最廣泛的抗皮膚老化療法之一。類人膠原蛋白面膜雖然是一種無創(chuàng)方法且不需要專業(yè)技術(shù)人員操作，但目前關(guān)于這種大分子材料能否透過表皮吸收仍存在爭議，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為其不能透過表皮被吸收，但Pan等[12]的研究結(jié)果顯示，類人膠原蛋白的透皮吸收度較好，且加入某些促滲劑還可提高其透皮吸收率。路雪艷等[13-14]也報道類人膠原蛋白敷料有改善皮膚屏障功能、減輕皮損的作用。

PRF屬于新一代血小板濃縮物，與第一代富血小板血漿相比，其具有制備簡單等優(yōu)點[15]。PRF含有大量的血小板，可釋放堿性成纖維細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、血小板源性生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、胰島素樣生長因子、表皮生長因子、白細(xì)胞介素-6等多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子可以促進骨形成、血管生成，以及細(xì)胞遷移、增殖和分化等生物學(xué)功能[16-18]。PRF的顯微結(jié)構(gòu)與人類天然纖維蛋白的結(jié)構(gòu)相似，由纖維蛋白排列成疏松的三維立體網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，并聚集了大量血小板，多孔疏松纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)不僅有利于新生細(xì)胞的遷移和增殖，還能夠使組織再生修復(fù)所需的氧氣與相關(guān)營養(yǎng)成分更好地擴散，從而加速組織的愈合過程[19]。PRF的纖維蛋白能將血小板和生長因子以化學(xué)鍵結(jié)合起來，隨后緩慢釋放。Caterino等[20]的研究結(jié)果顯示，PRF緩慢釋放生長因子與其纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中血小板逐漸激活有關(guān)。此外，陳鐵樓等[21]通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，血小板激活后的α-顆粒性物質(zhì)釋放其實是生長因子分泌的過程，分泌后的生長因子遷移到立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中。目前，PRF在促進創(chuàng)面愈合及軟組織再生方面的療效已得到證實[22]，然而其在抗皮膚老化中的應(yīng)用研究尚少。李澤華等[23]研究發(fā)現(xiàn)，PRF與自體脂肪聯(lián)合注射可以促進局部血管化、改善血運，從而獲得良好的面部年輕化效果。PRF通過其含有的細(xì)胞因子發(fā)揮生物學(xué)作用，可以促進細(xì)胞增殖、基質(zhì)改建和血管再生，其中堿性成纖維細(xì)胞生長因子是促進成纖維細(xì)胞生成膠原的重要細(xì)胞因子，表皮生長因子則可以促進上皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞及真皮層細(xì)胞的增殖和遷移，加快新陳代謝，達到嫩膚、抗皺及滋潤皮膚的效果，這些因子在PRF析出液中進一步濃集，可發(fā)揮更好的效果。

既往研究表明，A-PRF是在傳統(tǒng)富血小板纖維蛋白基礎(chǔ)上進行優(yōu)化的血小板濃縮物，其含有大量的血小板，激活后可釋放血管內(nèi)皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、堿性成纖維細(xì)胞生長因子等，這些生長因子具有促進細(xì)胞增殖、刺激血管化等功能[24-26]。本研究結(jié)果顯示，治療組患者完成治療后的1周及1個月，面部皮膚狀態(tài)均有顯著改善，其中治療組患者皮膚的皺紋、紋理、毛孔、水分、彈性和油脂方面的改善明顯優(yōu)于對照組，表現(xiàn)為細(xì)膩度及光澤度明顯增加、細(xì)紋減少，主觀感受皮膚滋潤并有飽滿感和彈性等，提示A-PRF聯(lián)合類人膠原蛋白面膜可以顯著改善皮膚的衰老狀態(tài)，其效果優(yōu)于單純敷貼面膜。此外，國外有學(xué)者提出，促滲劑可以提高皮膚對類人膠原蛋白的吸收率[4]，而A-PRF是富含生長因子的液體，可起到類似促滲劑作用，因而可進一步提高外用類人膠原蛋白改善膚質(zhì)的效果。本研究的創(chuàng)新點在于首次嘗試采用A-PRF聯(lián)合重組類人膠原蛋白面膜對面部光老化皮膚進行修復(fù)并取得良好的效果。

綜上所述，采用A-PRF聯(lián)合重組類人膠原蛋白面膜對女性面部光老化皮膚進行修復(fù)，可提升面部皮膚的水分和彈性，同時降低油脂、減輕細(xì)紋，對女性面部光老化皮膚具有明顯的促修復(fù)作用，且該療法具有無創(chuàng)、操作相對簡單的優(yōu)點，具有較好的臨床應(yīng)用前景。