王天梅 王華磊 李丹丹 陳松樹 潘克琴

(1. 貴州大學(xué)農(nóng)學(xué)院，貴州 貴陽 550025；2. 貴州省藥用植物繁育與種植重點實驗室，貴州 貴陽 550025)

多花黃精(Polygonatumcyrtonema)為百合科黃精屬植物，是2020版《中國藥典》收錄的中藥材黃精基原物種之一[1]，具有健脾潤肺、滋陰益腎之效[2]，含有豐富的多糖、黃酮、皂苷和酚類等成分[3]，是傳統(tǒng)的藥食同源植物。目前多花黃精的食藥部位主要為根、莖，其研究也集中于根、莖的炮制加工、活性成分提取及藥理功效等[4]，而須根、莖、葉則作為副產(chǎn)物被丟棄。

黃申等[5-6]研究發(fā)現(xiàn)，多花黃精嫩芽和花均表現(xiàn)出極好的DPPH· 清除能力，趙海洋等[7]發(fā)現(xiàn)多花黃精根、莖、葉和花部位的抗氧化活性大小與其黃酮含量一致。此外，李悅等[8]推測總酚可能是多花黃精花部位潛在的抗氧化物，同時也有研究[9]指出酚類成分能與亞硝酸根作用從而達(dá)到清除亞硝酸鹽的作用，但尚未見利用多花黃精的非藥用部位提取物來清除亞硝酸鹽的報道。試驗擬采用同一提取方式對多花黃精非藥用部位的醇溶性成分(總酚、總皂苷和總黃酮)進(jìn)行提取，研究其對DPPH· 和· OH的清除作用，同時探究其對亞硝酸鹽的清除能力，以期為多花黃精非藥用部位天然抗氧化劑的開發(fā)以及在食品和醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

多花黃精樣本：采自貴州大學(xué)教學(xué)實驗場，分為須根、莖、葉、花、芽5個部位，經(jīng)90 ℃殺青后，于60 ℃烘箱干燥至恒重，粉碎過60目篩于-20 ℃冰箱貯藏備用；

1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(批號MFCD00007231)、鹽酸萘乙二胺(批號c11838573)：上海麥克林生化科技有限公司；

人參皂苷Rb1(MUST-20060101)：成都曼思特生物科技有限公司；

蘆丁(MUST-17111601，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%)、沒食子酸(810H022)、福林酚(1216O033)：北京索萊寶科技有限公司；

冰乙酸：分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司；

NaOH、高氯酸：分析純，成都金山化學(xué)試劑有限公司；

Al(OH3)3、水楊酸：分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；

Na2CO3、亞硝酸鈉、FeSO4：分析純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；

對氨基苯磺酸：分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

電子分析天平：AR224CN型，奧豪斯儀器(常州)有限公司；

電熱鼓風(fēng)干燥箱：101-4型，北京科偉永興儀器有限公司；

全波長酶標(biāo)儀：Multiskan型，美國Thermo公司；

超聲波清洗器：SQ8200型，上海冠特超聲儀器有限公司；

紫外可見分光光度計：UV-2600型，島津企業(yè)管理(中國)有限公司。

1.3 方法

1.3.1 醇溶性成分測定

(1) 提取液制備：參照文獻(xiàn)[6]并稍有改動。準(zhǔn)確稱取多花黃精須根、莖、葉、花、芽5個不同部位的樣品粉末各1.000 g，以80%甲醇為提取溶劑，30 ℃超聲提取30 min，抽濾即得待測液，于-4 ℃冰箱貯藏備用，每個樣本重復(fù)3次。

(2) 總黃酮含量測定：采用鋁鹽顯色法[10]。移取待測液2.5 mL，加入5% NaNO2溶液0.3 mL，搖勻后靜置6 min，再加10% Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻，靜置6 min后加入4% NaOH溶液4 mL，搖勻后用蒸餾水定容至10 mL，靜置15 min，測定500 nm處吸光度。以質(zhì)量濃度0.105 g/mL的蘆丁對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.643 3X+0.017 8，R2=0.991 2。

(3) 總皂苷含量測定：采用比色法[11]。移取待測液100 μL揮干，加入5%香草醛—冰乙酸0.2 mL(新鮮)，冰浴加入0.8 mL高氯酸，搖勻，60 ℃水浴15 min，冰浴2 min，加入冰乙酸5 mL，搖勻靜置5 min，測定550 nm處吸光度。以質(zhì)量濃度0.103 mg/mL的人參皂苷Rb1對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=19.009X+0.006 3，R2=0.998 7。

(4) 總酚含量測定：采用福林酚比色法[12]。移取待測液2.5 mL，加入福林酚顯色劑0.5 mL，充分震蕩后靜置8 min，加入15% Na2CO3溶液2 mL，搖勻，室溫下避光放置2 h，測定765 nm處吸光度。以質(zhì)量濃度0.264 mg/mL的沒食子酸對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=14.31X+0.083 9，R2=0.996。

1.3.2 抗氧化能力測定

(1) DPPH·清除活性：參照文獻(xiàn)[13]并修改。在反應(yīng)體系中加入待測液3 mL和5 mmol/L DPPH乙醇溶液5 mL，混勻，室溫靜置30 min，以5 mL無水乙醇和3 mL蒸餾水的混合液為參比，測定517 nm處吸光度，并按式(1)計算DPPH·清除率。

(1)

式中：

A——DPPH·清除率，%；

A0——只加DPPH乙醇溶液的吸光度；

A1——樣品和DPPH乙醇溶液的吸光度；

A2——樣品溶液的吸光度。

(2) ·OH清除能力：參照文獻(xiàn)[14]并修改。向試管中分別加入6 mmol/L的FeSO4溶液、6 mmol/L的H2O2溶液、6 mmol/L的水楊酸和待測液各2 mL，37 ℃反應(yīng)1 h，測定517 nm處吸光度，并按式(2)計算·OH清除率。

(2)

式中：

A——·OH清除率，%；

A0——蒸餾水代替樣品的吸光度；

A1——樣品吸光度；

A2——蒸餾水替代H2O2時的吸光度。

(3)

式中：

A——亞硝酸根離子清除率，%；

A0——水代替樣品的吸光度；

A1——不同質(zhì)量濃度樣品的吸光度。

1.4 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 活性成分分析

由表1可知，多花黃精非藥用部位中總酚含量大小順序依次為葉>嫩芽>花>莖>根，葉部總酚含量顯著高于其他部位；總皂苷以花部位含量最高(0.63 mg/g)，顯著高于其他各部位，根部含量最低，為0.33 mg/g，其他部位總皂苷含量排序為葉>嫩芽>莖；總黃酮含量大小排序為葉>嫩芽>花>莖>根，說明相較于其他部位而言，葉在生長發(fā)育進(jìn)程中更容易富集酚類成分，花則更容易富集皂苷類成分。因此，多花黃精非藥用部位在同一提取水平下，各活性成分含量差異顯著(P<0.05)。

表1 多花黃精非藥用部位活性成分含量?

2.2 抗氧化活性對比

小寫字母不同表示差異顯著(P<0.05)

2.3 抗氧化活性和清除能力與活性成分含量的相關(guān)性

方形表示相關(guān)性，顏色從淺至深表示相關(guān)系數(shù)由0.4到1.0；圓形表示顯著性，顏色深表示極顯著(P<0.01)

多花黃精各部位的抗氧化和亞硝酸鹽清除能力與活性成分含量密切相關(guān)，且各成分清除自由基機(jī)理存在差異，酚類成分共有的多羥基結(jié)構(gòu)起到抗氧化作用主要是通過電子轉(zhuǎn)移將DPPH·清除[16]，而皂苷類化合物結(jié)構(gòu)中的-OH基團(tuán)、皂苷元配基的結(jié)構(gòu)和糖殘基的數(shù)量決定其抗氧化活性[8]，對亞硝酸鹽的清除作用與提取物富含多酚有關(guān)，因酚性羥基極易發(fā)生氧化、聚合、縮合等變化，從而清除自由基。有研究[17]也證實了植物多酚清除亞硝酸鹽與體系中多酚種類及含量密切相關(guān)。綜上，黃精非藥用部位提取物的抗氧化活性和亞硝酸鹽清除作用，可能是多種活性成分之間相互作用的結(jié)果，發(fā)揮主要功能的成分種類還有待進(jìn)一步探索。

3 結(jié)論