明珠，陳學(xué)國(guó)，周艷，杜瑞軒，王丹

（中國(guó)刑事警察學(xué)院刑事科學(xué)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽(yáng) 110035）

毒品是指鴉片、海洛因、甲基苯丙胺、嗎啡、大麻、可卡因以及國(guó)家規(guī)定管制的其他能夠使人形成癮癖的麻醉藥品和精神藥品[1]。與毒品相關(guān)的違法犯罪活動(dòng)嚴(yán)重影響經(jīng)濟(jì)與文化發(fā)展，給社會(huì)治安與人身安全等帶來(lái)巨大隱患。研究毒品的代謝產(chǎn)物和生物轉(zhuǎn)化過(guò)程，可以為法庭科學(xué)毒品物證鑒定方法選擇提供參考[2]。近年來(lái)，不法分子通過(guò)對(duì)現(xiàn)有毒品分子結(jié)構(gòu)的化學(xué)修飾或者全新設(shè)計(jì)，得到生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、結(jié)構(gòu)和藥理作用與毒品相似的新精神活性物質(zhì)，該類(lèi)物質(zhì)種類(lèi)繁多，更新迭代速度快，人們對(duì)其在體內(nèi)的作用模式、代謝和毒性知之甚少[3]。新精神活性物質(zhì)的濫用，給法庭科學(xué)毒品物證鑒定帶來(lái)了巨大挑戰(zhàn)。

藥物進(jìn)入機(jī)體后的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程，不僅與靶蛋白質(zhì)的作用特性密切相關(guān)，還與其在體內(nèi)的吸收（Absorption）、分布（Distribution）、代謝（Metabolism）、排泄（Excretion）和毒性作用（Toxicity）特性（簡(jiǎn)稱(chēng)ADMET）密切相關(guān)[4]。近年來(lái)，ADMET 特性的評(píng)價(jià)和篩選已經(jīng)成為新型藥物研制、藥理學(xué)和毒理學(xué)研究等的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[5]。肝臟作為藥物主要代謝器官，是藥物生物轉(zhuǎn)化的主要場(chǎng)所，也是富含參與藥物代謝細(xì)胞色素P450的氧化酶系統(tǒng)，大多數(shù)藥物的Ⅰ相和Ⅱ相代謝反應(yīng)都是在該氧化酶系統(tǒng)的參與下發(fā)生的，因此ADMET 中的代謝研究以肝臟為基礎(chǔ)[6]。與藥物代謝過(guò)程相似，毒品被濫用被吸收后，主要在肝臟中代謝，因此，毒品代謝主要以肝臟為研究對(duì)象[7]。

毒品具有一定的特殊性，其體內(nèi)代謝研究的開(kāi)展受諸多客觀不利因素影響。體外代謝技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用，為毒品代謝研究提供了新思路[8]。近年來(lái)，體外代謝技術(shù)已經(jīng)在毒品代謝物鑒定、生物轉(zhuǎn)化規(guī)律研究等方面得到了廣泛應(yīng)用[9]。

1 體外代謝技術(shù)概述

1.1 原理與優(yōu)點(diǎn)

體外代謝技術(shù)是指通過(guò)體外模型模擬藥物在生物體內(nèi)的代謝過(guò)程，鑒定藥物代謝物，研究藥物在生物體內(nèi)的代謝規(guī)律和生物轉(zhuǎn)化途徑，進(jìn)而闡明藥物作用機(jī)理的技術(shù)[10]。

與體內(nèi)代謝相比，體外代謝研究有諸多優(yōu)點(diǎn)：①體外代謝研究可以排除體內(nèi)諸多的干擾因素，直接觀察到代謝酶對(duì)底物的選擇性代謝，為體內(nèi)代謝研究提供重要的線(xiàn)索和依據(jù)；②體外代謝的代謝物含量大、代謝體系干凈，能夠解決一些藥物在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化率低且缺乏靈敏檢測(cè)手段的問(wèn)題；③體外代謝研究具有快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，適合大量化合物的藥動(dòng)學(xué)篩選；④體外代謝不需要消耗大量的樣品和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究成本相對(duì)較低[11]。

1.2 分類(lèi)與特點(diǎn)

肝臟是藥物在生物體內(nèi)代謝的主要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。目前，與肝臟相關(guān)的體外代謝研究方法主要有肝微粒體體外溫孵法、肝細(xì)胞體外溫孵法、肝勻漿體外溫孵法、肝臟離體灌流法、肝組織切片法和基因重組P450酶系等[12]。

1.2.1 肝微粒體體外溫孵法

肝微粒體體外溫孵法是利用差速離心技術(shù)從肝臟中提取肝微粒體，并加入還原型輔酶Ⅱ（NADPH）再生系統(tǒng)，在體外模擬生理環(huán)境及溫度下進(jìn)行代謝反應(yīng)。該方法具有制備技術(shù)簡(jiǎn)單、代謝過(guò)程迅速、結(jié)果重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。另外，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，利用該方法可以大量收集代謝樣品，以供代謝物結(jié)構(gòu)鑒定使用。因此，該方法被廣泛應(yīng)用在藥物體外代謝研究中[13]。

1.2.2 肝細(xì)胞體外溫孵法

肝細(xì)胞體外溫孵法是在制備的肝細(xì)胞中加入氧化還原型輔酶，模擬生理環(huán)境條件下進(jìn)行的代謝反應(yīng)。反應(yīng)中，可以靈活監(jiān)測(cè)肝細(xì)胞活性、代謝物及原型藥物濃度。該方法高度接近體內(nèi)生理狀態(tài)，能較好地保留肝細(xì)胞完整形態(tài)，維持肝細(xì)胞體外活性，是最接近體內(nèi)肝臟代謝的藥物代謝研究體系[14]。

1.2.3 肝勻漿體外溫孵法

肝勻漿體外溫孵法是直接采用肝臟勻漿，加入藥物后，再加入氧化還原型輔酶進(jìn)行孵育，考察藥物代謝的方法。與其他體外代謝方法相比，具有操作簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)周期短、成本低等特點(diǎn)[15]。

1.2.4 肝臟離體灌流法

肝臟離體灌流法是在麻醉狀態(tài)下通過(guò)外科手術(shù)使肝臟形成體外循環(huán)，動(dòng)態(tài)研究藥物代謝的方法。該方法能在一段時(shí)間內(nèi)保持離體肝臟生理活性，并在排除整體影響的條件下，具有器官水平優(yōu)勢(shì)，兼?zhèn)潴w外和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)，在藥理學(xué)、毒理學(xué)等研究領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用[16]。

1.2.5 肝組織切片法

肝組織切片法是使用切片機(jī)精確切取肝組織用于藥物代謝研究的方法。該方法不僅保留了肝臟藥酶及各種細(xì)胞器的活性，而且也保留了細(xì)胞與細(xì)胞之間的聯(lián)系，因此能更準(zhǔn)確地反映藥物在體內(nèi)生理?xiàng)l件下的代謝[17]。

1.2.6 基因重組P450 酶系

基因重組P450酶系是利用基因工程及細(xì)胞工程，將調(diào)控P450酶系表達(dá)的基因整合到大腸桿菌或昆蟲(chóng)細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)后表達(dá)出高水平的P450酶系，經(jīng)純化后可獲得純度高的單一P450同工酶[18]。該方法已經(jīng)在藥物體外代謝途徑、代謝產(chǎn)物生成及體外清除率等研究中得到應(yīng)用。

1.2.7 方法評(píng)價(jià)

肝臟體外代謝研究方法中，應(yīng)用最廣泛的是肝微粒體體外溫孵法。該方法制備技術(shù)簡(jiǎn)單、代謝過(guò)程快、結(jié)果重現(xiàn)性好、易于大批量操作，并且便于收集代謝樣品，缺點(diǎn)是可能與體內(nèi)代謝的結(jié)果出現(xiàn)偏差，需要體內(nèi)代謝的結(jié)果加以佐證。肝細(xì)胞體外溫孵法最接近人體肝臟代謝的藥物體系，能夠保持肝細(xì)胞的體外活性，高度接近體內(nèi)生理狀態(tài)，但肝細(xì)胞制備技術(shù)復(fù)雜，在體外活性維持時(shí)間短，不利于儲(chǔ)存。肝勻漿體外溫孵法的操作步驟最為簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)時(shí)間短，但肝勻漿中所含的酶種類(lèi)多，容易對(duì)后續(xù)的代謝物檢測(cè)產(chǎn)生干擾，肝勻漿在體外環(huán)境下也容易失活，在一定程度上限制了其應(yīng)用。這些研究方法中，肝臟離體灌流法具有器官水平的優(yōu)勢(shì)，能夠動(dòng)態(tài)研究藥物在肝臟的代謝規(guī)律且排除整體影響，但對(duì)于設(shè)備和操作技術(shù)要求高。肝組織切片法能夠保留所有的肝臟藥酶和細(xì)胞器活性，是非常有效的體外代謝研究體系，但受限于肝切片機(jī)的性能與價(jià)格?；蛑亟MP450酶系，主要應(yīng)用于研究特異型酶對(duì)藥物的誘導(dǎo)作用，以確定單個(gè)酶的結(jié)構(gòu)和功能，并且不會(huì)受到其他酶的干擾，有利于篩選出對(duì)藥物代謝過(guò)程貢獻(xiàn)大的酶，但也同樣具有成本高、實(shí)驗(yàn)條件與體內(nèi)環(huán)境差別大等缺點(diǎn)。

隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，體外代謝體系也在不斷完善與健全，已經(jīng)在藥物代謝途徑、藥物作用機(jī)理、代謝產(chǎn)物鑒定等研究中發(fā)揮了重要作用。不同的代謝體系各有優(yōu)缺點(diǎn)，可以根據(jù)不同的研究目標(biāo)，選擇合適的體外代謝模型。

2 體外代謝技術(shù)在法庭科學(xué)毒品物證鑒定中的應(yīng)用

2.1 鴉片類(lèi)毒品

鴉片類(lèi)毒品是一類(lèi)天然或合成的主要作用于阿片受體的中樞神經(jīng)抑制劑，包括阿片生物堿及其衍生物。該類(lèi)毒品是濫用最廣泛、依賴(lài)性最強(qiáng)、社會(huì)危害最大的一類(lèi)毒品。體外代謝技術(shù)在鴉片類(lèi)毒品分析中的應(yīng)用主要是研究代謝模式、確定代謝物結(jié)構(gòu)。Wallgren J 等[19]采用肝細(xì)胞體外溫孵法研究了芬太尼和五種芬太尼類(lèi)似物乙酰芬太尼、丙烯腈芬太尼、環(huán)丙基芬太尼、異丁酰芬太尼、4F-異丁酰芬太尼的代謝，并用液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜分析代謝物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明六種芬太尼類(lèi)物質(zhì)的代謝模式相似，主要是羥基化代謝產(chǎn)物，通過(guò)與已知尿液樣本的對(duì)比，確定了六種芬太尼類(lèi)物質(zhì)20 種代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)，該研究為尿液中芬太尼類(lèi)物質(zhì)的檢測(cè)提供了參考。Winborn J 等[20]結(jié)合液相色譜-四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法，運(yùn)用基因重組P450酶系研究了二氫脫氧嗎啡的生物轉(zhuǎn)化途徑，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)rCYP2B6、rCYP2C8、rCYP2C9、rCYP2C18、rCYP2C19、rCYP2D6 和rCYP3A4 是參與誘導(dǎo)二氫脫氧嗎啡代謝的主要P450亞型酶，并鑒定出其包括去甲嗎啡、去嗎啡-N-氧化物、去甲羥基嗎啡和5 種羥基化代謝物在內(nèi)的8 種Ⅰ相代謝物?；蛑亟MP450酶系研究毒品的體外代謝，不僅能夠確定誘導(dǎo)毒品代謝的P450酶亞型，而且能夠得到更加清晰的代謝途徑。

2.2 合成大麻素類(lèi)毒品

合成大麻素類(lèi)毒品是全球?yàn)E用最為嚴(yán)重的新精神活性物質(zhì)，可同時(shí)作用于中樞神經(jīng)的大麻受體CB1和CB2，產(chǎn)生比傳統(tǒng)毒品大麻更強(qiáng)的藥理和生理作用。合成大麻素類(lèi)毒品種類(lèi)繁多，偽裝性強(qiáng)，進(jìn)入體內(nèi)后代謝迅速，幾乎不以原型的形式排出，這導(dǎo)致對(duì)于尿液樣本中該類(lèi)毒品的司法鑒定十分困難。對(duì)這類(lèi)毒品，應(yīng)用肝微粒體溫孵法能夠簡(jiǎn)便、快速地得到其代謝產(chǎn)物，通過(guò)分析Ⅰ相代謝和Ⅱ相代謝產(chǎn)物可以推測(cè)其代謝途徑，確定其生物標(biāo)志物。黑海等[21]采用肝微粒體體外溫孵法研究了合成大麻素N-(1-氨甲?；?2-苯基乙基)-1-(5-氟戊基)吲唑-3-甲酰胺(PX-2) 的代謝過(guò)程，并利用液相色譜-四極桿質(zhì)譜技術(shù)對(duì)代謝物進(jìn)行分析，結(jié)果表明PX-2 在肝微粒體模擬的人體代謝過(guò)程中，產(chǎn)生了18 種Ⅰ相代謝物和3 種葡萄糖醛化的Ⅱ相代謝物，Ⅰ相代謝主要途徑有酰胺水解、氟代戊烷基側(cè)鏈氧化脫氟、芐基羥基化和吲唑環(huán)羥基化等。另外，通過(guò)體外代謝實(shí)驗(yàn)，推薦了PX-2 的代謝標(biāo)志物，為公安禁毒工作中PX-2 的檢驗(yàn)提供了科學(xué)依據(jù)。Erol Ozturk Y 等[22]研究了合成大麻素MDMB-4en-PINACA 的體外代謝，采用混合的人肝微粒體孵育后，采用液相色譜-高分辨質(zhì)譜法對(duì)其代謝物進(jìn)行分析，并與22 份真實(shí)尿液樣本進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MDMB-4en-PINACA 在人肝微粒體孵育后共檢測(cè)到14 種代謝物，并確定了3 種特征代謝產(chǎn)物及生物轉(zhuǎn)化規(guī)律。Andersson M 等[23]采用人肝細(xì)胞體外溫孵法和肝微粒體體外溫孵法研究了合成大麻素AMB 和5F-AMB 的代謝過(guò)程，并用高分辨質(zhì)譜儀對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，研究表明AMB 在人肝細(xì)胞孵育和肝微粒體溫孵后共檢測(cè)到19 種代謝產(chǎn)物，5F-AMB 檢測(cè)到17種代謝產(chǎn)物，AMB 和5F-AMB 的主要代謝途徑是酯水解、氧化和葡萄糖醛酸化。該研究為鑒定這兩種新精神活性物質(zhì)提供了有價(jià)值的數(shù)據(jù)。

2.3 苯丙胺類(lèi)毒品

苯丙胺類(lèi)毒品屬于中樞神經(jīng)興奮劑，主要包括苯丙胺、甲基苯丙胺、亞甲二氧基苯丙胺和亞甲二氧基甲基苯丙胺（MDMA）等。目前，體外代謝技術(shù)在該類(lèi)毒品分析中的應(yīng)用主要采用不同體外代謝模型聯(lián)用研究特定的苯丙胺類(lèi)毒品，通過(guò)交叉驗(yàn)證不同代謝結(jié)果，優(yōu)化體外代謝模型，準(zhǔn)確描述該類(lèi)毒品的代謝途徑，確定標(biāo)志性代謝物。Richter LH 等[24]研究了MDMA 等8種苯丙胺類(lèi)毒品在不同體外代謝模型中的代謝過(guò)程，分別采用HepaRG 細(xì)胞系、HepG2 細(xì)胞系和人肝微粒體體外溫孵法進(jìn)行研究，將不同的體外代謝模型進(jìn)行比較，研究發(fā)現(xiàn)HepaRG 細(xì)胞系孵育的代謝物在數(shù)量和信號(hào)豐度上優(yōu)于HepG2 細(xì)胞系和人肝微粒體溫孵法。Grafinger KE 等[25]將微生物代謝模型與體外代謝模型聯(lián)用，采用人肝微粒體模型和秀麗隱桿線(xiàn)蟲(chóng)微生物模型研究了25D-NBOMe、25E-NBOMe 和25N-NBOMe 3 種苯丙胺類(lèi)毒品的體外代謝，另采用液相色譜-高分辨質(zhì)譜儀在人肝微粒體中檢測(cè)到36 種25D-NBOMe 的Ⅰ相代謝物，26 種25E-NBOMe的Ⅰ相代謝物和24 種25N-NBOMe 的Ⅰ相代謝物，在線(xiàn)蟲(chóng)模型中檢測(cè)到14 種25D-NBOMe 的代謝物，11 種25E-NBOMe 的代謝物和9 種25N-NBOMe的代謝物。該研究發(fā)現(xiàn)，3 種目標(biāo)物的主要代謝過(guò)程是氧化脫氨、氧化N-脫烷基化、去甲基化、二醇氧化、單羥基化和二羥基化、伯醇氧化和伯醇羧基化等。

另外，借助毒品濫用者生物樣本檢測(cè)結(jié)果，將體外代謝結(jié)果與之對(duì)比，能夠驗(yàn)證體外代謝研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信度。Krotulski AJ 等[26]采用人肝微粒體體外溫孵法研究了bk-DMBDB 的代謝過(guò)程，對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行了表征，并與活體和死亡個(gè)體的真實(shí)人類(lèi)樣本（血液、尿液、口腔液、肝臟等）進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測(cè)出的5 種bk-DMBDB 代謝物都在人類(lèi)樣本中得到確認(rèn)。

2.4 卡西酮類(lèi)毒品

卡西酮類(lèi)毒品是近幾年來(lái)濫用較多的一類(lèi)興奮劑，主要包括卡西酮、甲卡西酮等。借助體外代謝技術(shù)，結(jié)合現(xiàn)代分析方法，將結(jié)構(gòu)相似的卡西酮類(lèi)毒品進(jìn)行比較研究，有利于探究該類(lèi)毒品的代謝規(guī)律，為其毒理學(xué)研究和司法鑒定提供 參 考。Roque Bravo R 等[27]選 取buphedrone、butylone 和3,4-DMMC 等3 種卡西酮類(lèi)毒品為研究對(duì)象并進(jìn)行了毒理學(xué)研究，采用大鼠肝細(xì)胞孵育以及HepaRG 和HepG2 細(xì)胞系進(jìn)行體外代謝，研究了其細(xì)胞毒性，結(jié)果表明大鼠肝細(xì)胞是最敏感的模型，3 種毒品的EC50值最低；肝臟代謝降低了buphedrone 的毒性，但是增加了butylone 和3, 4-DMMC 的毒性；3 種毒品都能增加氧化應(yīng)激、破壞線(xiàn)粒體穩(wěn)態(tài)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死。Gavrilovi? I 等[28]采用人肝微粒體體外溫孵法研究了4-MPD、2-NMC、4F-PHP 和bk-EPDP 4 種合成卡西酮類(lèi)毒品的體外代謝，采用液相色譜-高分辨率質(zhì)譜法進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒定，結(jié)果表明4 種毒品在體外溫孵后得到24 種Ⅰ和Ⅱ相代謝物，主要的代謝途徑為去甲基化、O-甲基化、羥基化和葡萄糖醛酸化等，這為法醫(yī)毒理學(xué)分析提供了依據(jù)。Camuto C 等[29]采用人肝微粒體體外溫孵和基因重組P450酶系的代謝模型，研究了合成卡西酮類(lèi)毒品Mexedrone的體外代謝過(guò)程，結(jié)果表明Mexedrone 的主要生物代謝過(guò)程是脫烷基化和羥基化。另有研究以甲卡西酮和3,4-亞甲二氧基甲卡西酮為研究對(duì)象，基于大鼠肝微粒體S9組分的體外代謝孵育體系，借助液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，鑒定得到目標(biāo)物的主要代謝產(chǎn)物分別為卡西酮和3-羥基-4-甲氧基-甲卡西酮[30]。

2.5 安眠鎮(zhèn)靜類(lèi)毒品

苯二氮?類(lèi)安眠鎮(zhèn)靜類(lèi)藥物自20 世紀(jì)60 年代出現(xiàn)以來(lái)，品種越來(lái)越多，不僅具有鎮(zhèn)靜催眠、鎮(zhèn)定抗焦慮等作用，也具有一定的成癮性和濫用性，是國(guó)家嚴(yán)格管控的二類(lèi)精神處方藥。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上出現(xiàn)的新型苯二氮?類(lèi)毒品主要有氟阿普唑侖、二氯西泮和依替唑侖等。體外代謝技術(shù)在該類(lèi)毒品中的應(yīng)用主要包括模擬體內(nèi)代謝過(guò)程、推測(cè)代謝途徑、確定標(biāo)志性代謝物等方面。李樂(lè)等[31]通過(guò)體外溫孵體系肝微粒體代謝模型對(duì)4′-氯地西泮和二氯西泮進(jìn)行代謝產(chǎn)物鑒定研究，結(jié)果表明4′-氯地西泮經(jīng)過(guò)代謝共產(chǎn)生5種Ⅰ相代謝產(chǎn)物和2 種葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代謝產(chǎn)物，二氯西泮經(jīng)過(guò)代謝共產(chǎn)生6 種Ⅰ相代謝產(chǎn)物和1 種葡萄糖醛酸化的Ⅱ相代謝產(chǎn)物，其主要代謝途徑為脫烷基化、羥基化以及與葡萄糖醛酸結(jié)合。Wagmann L 等[32]對(duì)氟普唑侖進(jìn)行了體外代謝研究，分別采用人的肝臟S9和HepaRG 細(xì)胞系進(jìn)行體外孵育后，使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析，初步確定了氟普唑侖的代謝產(chǎn)物，并在體外條件下分別確定了參與Ⅰ相和Ⅱ相代謝的酶，進(jìn)一步將研究結(jié)果與真實(shí)人體生物樣本對(duì)比，確定了氟普唑侖的7 種代謝產(chǎn)物，并找到了代謝標(biāo)志物。該實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，氟普唑侖主要代謝途徑為羥基化和葡萄糖醛酸化，其代謝模式與其他的苯二氮?類(lèi)藥物相似。Johnson E 等[33]研究了依替唑侖的代謝特征，以0.1 mg/kg 體重的劑量對(duì)馬進(jìn)行靜脈注射和口服依替唑侖，采集給藥前后的血清和尿液樣本以確定潛在的代謝物，并利用馬肝S9進(jìn)行體外代謝分析，結(jié)果表明依替唑侖在馬體內(nèi)的代謝物有23 種，其中α-羥基化的依替唑侖代謝物含量最高，可作為代謝標(biāo)記物用于反興奮劑檢測(cè)分析。

2.6 致幻劑類(lèi)毒品

色胺類(lèi)新精神活性物質(zhì)是具有致幻作用的一類(lèi)含有色胺結(jié)構(gòu)框架的化合物，在很多國(guó)家被廣泛濫用，其通過(guò)提高腦內(nèi)5-羥色胺的水平或抑制5-羥色胺的釋放而引起致幻作用[34]。色胺類(lèi)新精神活性物質(zhì)種類(lèi)更新快，數(shù)量不斷增加，給檢驗(yàn)鑒定帶來(lái)很大難度。對(duì)于新出現(xiàn)的色胺類(lèi)毒品，可以采用肝微粒體體外溫孵法進(jìn)行體外代謝分析，分析其代謝途徑與生物轉(zhuǎn)化規(guī)律，為色胺類(lèi)毒品濫用的司法鑒定提供科學(xué)依據(jù)。Grafinger KE 等[35]對(duì)5-MeO-MiPT 進(jìn)行了體外代謝分析，采用人肝微粒體對(duì)其進(jìn)行體外溫孵，在體外代謝模型中檢測(cè)到7 種Ⅰ相代謝物，其中5-MeO-NiPT、5-OHMiPT、5-MeO-MiPT-N-oxide 和OH-5-MeO-MiPT 4 種代謝物可以在人體生物樣本中檢測(cè)到，由此確定其主要代謝過(guò)程為N-去甲基化、O-去甲基化、去甲基化、羥基化、母體化合物的N-氧化物形成和羥基化。Bruni PS 等[36]研究了4-HO-MET 的體外代謝，采用肝微粒體體外溫孵法鑒定其代謝產(chǎn)物，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明體外代謝模型中共檢測(cè)到12 種4-HO-MET 的Ⅰ相代謝產(chǎn)物，主要的代謝途徑為單羥基化、雙羥基化、去甲基化、去甲基化與單羥基化結(jié)合、形成羧酸、去乙基化和氧化脫氨。

3 體外代謝技術(shù)在法庭科學(xué)領(lǐng)域的趨勢(shì)與展望

3.1 不同代謝模型的聯(lián)用

法庭科學(xué)領(lǐng)域體外代謝的研究，主要是為了模擬體內(nèi)代謝過(guò)程，確定代謝物的結(jié)構(gòu)和推測(cè)代謝途徑，通過(guò)將某類(lèi)毒品的體外代謝產(chǎn)物與該類(lèi)毒品吸食者的人體尿液樣本中的代謝產(chǎn)物進(jìn)行對(duì)比，篩選出標(biāo)志代謝物，從而為該類(lèi)毒品吸食者的認(rèn)定提供依據(jù)。但不同的體外代謝模型具有各自的優(yōu)點(diǎn)和局限性，針對(duì)某一種新型毒品的體外代謝研究，采用單一的體外代謝模型往往不能得到全部的代謝產(chǎn)物，導(dǎo)致得出的結(jié)論具有較大的局限性。因此，可以考慮將不同代謝模型聯(lián)用的方法，采用不同的體外代謝模型進(jìn)行代謝實(shí)驗(yàn)，多種體外代謝模型所產(chǎn)生的代謝物之間可以相互補(bǔ)充、交叉驗(yàn)證，然后將得到的代謝結(jié)果進(jìn)行對(duì)比篩選，在吸毒者的尿液樣本中得到驗(yàn)證，從而為法庭科學(xué)中相關(guān)案件的偵破提供參考。同時(shí)，通過(guò)不同體外代謝模型的對(duì)比研究，可以挑選出對(duì)針對(duì)于特定類(lèi)型毒品最適宜的體外模型，為同類(lèi)毒品的體外代謝研究提供參考。

3.2 代謝物數(shù)據(jù)庫(kù)的建立

隨著國(guó)際毒品形勢(shì)的發(fā)展變化，具有更高精神活性和成癮性的新精神活性物質(zhì)悄然興起。新精神活性物質(zhì)種類(lèi)繁多、更迭速度快，因而對(duì)新精神活性物質(zhì)的研究與監(jiān)管總是滯后于其出現(xiàn)。目前，我國(guó)已列管170 余種新精神活性物質(zhì)，隨著時(shí)間的推移，被列管物質(zhì)還會(huì)不斷增加，由于缺少對(duì)最新濫用新精神活性物質(zhì)代謝產(chǎn)物的相關(guān)研究，導(dǎo)致難以對(duì)此類(lèi)毒品的吸食者進(jìn)行認(rèn)定，給司法鑒定和法律監(jiān)管工作帶來(lái)了諸多困難。今后可以通過(guò)體外代謝技術(shù)在毒品檢驗(yàn)中的應(yīng)用，建立毒品及其代謝物的數(shù)據(jù)庫(kù)，不斷擴(kuò)充并完善毒品及其代謝物的特征數(shù)據(jù)庫(kù)，更好地為涉毒案件物證鑒定提供技術(shù)支持，有力打擊毒品犯罪。另外，借助現(xiàn)代分析技術(shù)手段對(duì)體外代謝過(guò)程得到的代謝物進(jìn)行鑒定、分離與提純，制備出代謝物的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，必將為毒品研究提供便利，為未來(lái)的法庭科學(xué)鑒定技術(shù)領(lǐng)域提供強(qiáng)有力的技術(shù)支撐。

3.3 體外代謝新模型的發(fā)展

體外代謝技術(shù)發(fā)展至今，顯示出操作簡(jiǎn)單、重復(fù)性好、能夠排除體內(nèi)因素干擾等特點(diǎn)，并在藥物代謝、毒理血和藥理學(xué)等研究中發(fā)揮了巨大作用。借助體外代謝方法，鑒定毒品代謝物、確定生物轉(zhuǎn)化規(guī)律，有助于了解毒品在生物體內(nèi)的代謝途徑和代謝特點(diǎn)，能夠?yàn)樯娑景讣亩酒肺镒C鑒定提供科學(xué)依據(jù)。目前，研究人員在現(xiàn)有的體外代謝的模型上不斷創(chuàng)新，建立了新的體外代謝模型，如基于肝細(xì)胞代謝發(fā)展出的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系代謝模型、培養(yǎng)肝細(xì)胞模型、永生化肝細(xì)胞模型，基于肝細(xì)胞亞組分發(fā)展出的肝胞質(zhì)溶膠模型等，這些新的體外代謝模型在將來(lái)的毒品分析中都具有較大的研究空間。相信在將來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，更加精準(zhǔn)、高效的體外代謝新模型將不斷被開(kāi)發(fā)出來(lái)，體外代謝模型也會(huì)越來(lái)越接近人體內(nèi)的真實(shí)代謝狀態(tài)，能夠更好地模擬體內(nèi)代謝過(guò)程，提高毒品分析的效率和準(zhǔn)確性。