阿爾祖古麗·阿卜力米提，李敬雙，金 鑫，于 洋?

（1. 錦州醫(yī)科大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院，遼寧 錦州 121001；2. 錦州醫(yī)科大學(xué) 畜牧獸醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001）

苦瓜是葫蘆科苦瓜屬植物（Momordica charantia L.）果實，是傳統(tǒng)的藥食兩用植物，具有多種藥理活性。從苦瓜果實中提取的苦瓜多糖（Momordica charantia polysaccharide，MCP）是一類雜多糖，主要含有半乳糖醛酸、半乳糖以及葡萄糖等單糖，是苦瓜的主要有效成分，具有提高免疫力、抗腫瘤[1]、降血糖[2]、抗疲勞[3]、抗氧化損傷[4]等功效?？喙现泻卸喾N有益成分，其中多糖是目前研究的熱點(diǎn)之一，多糖廣泛應(yīng)用在臨床、農(nóng)業(yè)、食品領(lǐng)域中。目前對MCP活性作用的研究也越來越多，杜國豐等[5]對比MCP及其鐵絡(luò)合物對四氧嘧啶致高血糖小鼠模型的降血糖作用，結(jié)果表明，MCP及其鐵絡(luò)合物給藥組都能顯著降低高血糖模型小鼠的血糖水平，且MCP鐵降血糖效果更顯著。于志江等[6]研究MCP對一次性力竭運(yùn)動后小鼠疲勞緩解及氧化損傷影響。結(jié)果表明，MCP具有顯著的抗疲勞功效，可減輕大強(qiáng)度運(yùn)動后自由基造成的氧化損傷，促進(jìn)機(jī)體功能恢復(fù)。然而，目前還缺乏對MCP的功能作用及各種機(jī)制的研究，MCP的研究方向在降血糖作用和抗氧化功能方面較多，鮮有關(guān)于MCP免疫調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制方面的報道，在MCP活性研究中還存在待研究的問題。因此，本實驗從細(xì)胞增殖、巨噬細(xì)胞吞噬能力、細(xì)胞因子以及mRNA表達(dá)方面觀察 MCP對小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響，從而闡述MCP免疫調(diào)節(jié)活性及其作用機(jī)制，為MCP的開發(fā)研究及其在功能食品以及各領(lǐng)域中的廣泛利用提供有力的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

Balb/c小鼠SPF級，體重（18±22）g，6～8周齡：錦州醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)院（生產(chǎn)許可證號SCXK（遼）2014-0004）；苦瓜多糖（MCP）：晨光生物技術(shù)有限公司提供；胎牛血清，無噬菌體、內(nèi)毒素含量極低，適合于細(xì)胞株的保藏及組織器官培養(yǎng)，單抗研制：浙江天杭生物科技有限公司；甲基噻唑藍(lán)（MTT）、臺盼藍(lán)、RPMI-1640、二甲基亞砜（DMSO）、PBS和氯仿：京索萊寶科技有限公司；Trizol：碧云天生物技術(shù)；小鼠IL-4、IL-6、IFN-γ和IL-12細(xì)胞因子檢測試劑盒：上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Varioskan FlashT多功能酶標(biāo)儀：Thermo Fisher Scientific；SW-CJ-1F型超凈工作臺：蘇州凈化設(shè)備有限公司；CKX41SF倒置顯微鏡：日本OLYMPUS公司；TD5A低速離心機(jī)：湖南赫西儀器裝備有限公司；TDL80-2B 96孔或24孔板臺式離心機(jī)：上海安亭；CO2培養(yǎng)箱：美國SHELLAB；FA2004型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；實時熒光定量PCR儀：德國Eppendorf公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 苦瓜多糖制備

精選原料-原料清洗-濃縮提取-濃縮干燥-粉碎滅菌等步驟，經(jīng)純化制取，純度≥90%。

1.3.2 淋巴細(xì)胞懸液制備

小鼠用頸部斷髓法處死后取脾，無菌分離收集其淋巴細(xì)胞于離心管中離心，棄上清，裂解其中紅細(xì)胞，配置淋巴細(xì)胞懸液，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)并檢測其活力，使細(xì)胞活力達(dá)95%以上，調(diào)整細(xì)胞密度為 5×106個/mL。

1.3.3 分組及處理

實驗設(shè)空白組、左旋咪唑組、MCP處理組，每組均設(shè)5個重復(fù)，每孔加入淋巴細(xì)胞懸液?？瞻捉M每孔加入完全培養(yǎng)基，陽性對照組每孔加入含有左旋咪唑（終濃度為 5 μg/mL）和完全培養(yǎng)基；MCP處理組每孔加入含不同濃度 MCP（終濃度為終濃度為40、80、160、320 μg/mL）和完全培養(yǎng)基。

1.3.4 MTT法檢測MCP對淋巴細(xì)胞增殖的影響

按 1.3.3實驗分組及處理各濃度組后，使用96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)后，加入MTT液，用酶標(biāo)儀測定OD570值，進(jìn)一步判斷小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖率。

1.3.5 檢測小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力

小鼠斷頸處死后，腹腔注射5 mLPBS，輕柔腹部，收集腹腔液，離心后棄上清，用臺盼藍(lán)檢測細(xì)胞活力，用RPMI-1640完全培養(yǎng)基使細(xì)胞懸浮，調(diào)整細(xì)胞濃度。將調(diào)整好的細(xì)胞接種于96孔板中，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)條件下培養(yǎng)4 h，去除未貼壁的細(xì)胞，按照1.3.3加入不同濃度的MCP繼續(xù)培養(yǎng)24 h后，棄上清，每孔加入1%的中性紅溶液100 μL，繼續(xù)培養(yǎng)1 h，加細(xì)胞裂解液V（無水乙醇）∶V（冰乙酸）=1∶1后 4 ℃裂解12 h，用酶標(biāo)儀540 nm處測定吸光度。

1.3.6 ELISA法檢測 MCP對淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

按1.3.3實驗分組及處理各濃度組，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)后，按照小鼠ELISA試劑盒說明書的操作檢測上清液中細(xì)胞因子IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12的分泌量。

1.3.7 MCP對 IL-4、IFN-γ、IL-6和 IL-12mRNA表達(dá)的影響

按1.3.3實驗分組及處理各濃度組，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)后，用trizol法提取RNA，用核酸蛋白檢測儀測定OD值，OD260/OD280的比值在1.8～2.1之間，可鑒別提取的RNA純度較好，質(zhì)量較高。按試劑盒的說明操作反轉(zhuǎn)錄合成 cDNA，根據(jù)說明書進(jìn)行PCR體系和參數(shù)設(shè)置及下一步進(jìn)行擴(kuò)增程序。選用β-actin作為內(nèi)參，用相對定量的分析方法 2-ΔΔCT分析基因的相對表達(dá)量。引物序列及擴(kuò)增長度見表1。

表1 實驗中小鼠IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12和內(nèi)參ACTB引物序列Table 1 Mouse IL-4、IFN-γ、IL-6 and IL-12 and internal reference ACTB primer sequences in the experiment

1.4 數(shù)據(jù)分析

實驗數(shù)據(jù)用 SPSS 20.0軟件進(jìn)行分析，數(shù)值以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，以LSD法進(jìn)行顯著性差異分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 MCP對淋巴細(xì)胞增殖的影響

MCP對淋巴細(xì)胞增值的影響如表2所示，與空白組相比，作為陽性對照組的左旋咪唑能顯著地促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖（P＜0.05），且比MCP處理組最高濃度組的促進(jìn)作用大；與空白組相比，不同濃度的MCP淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)顯著升高（P＜0.05），說明MCP對淋巴細(xì)胞的增殖能力有不同程度的促進(jìn)作用，淋巴細(xì)胞增殖趨勢隨MCP濃度的升高而升高，兩者之間呈良好的量-效關(guān)系；MCP濃度升到一定程度，淋巴細(xì)胞增殖數(shù)反而顯著下降，呈現(xiàn)出MCP雙向調(diào)節(jié)作用，但相對于空白組仍然有顯著增加。與左旋咪唑組相比，MCP各濃度組淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)顯著下降（P＜0.05），MCP 在 80 μg/mL 濃度時無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 MCP對淋巴細(xì)胞增值的影響（±s，n=5）Table 2 Effect of MPC on lymphocyte proliferation (±s，n=5)

表2 MCP對淋巴細(xì)胞增值的影響（±s，n=5）Table 2 Effect of MPC on lymphocyte proliferation (±s，n=5)

注：用不同小寫字母表示有顯著性差異(P＜0.05)。下面的表格用同樣方法標(biāo)注。Note: Different lower-case letters showed statistical significance(P＜0.05)。The following table is marked in the same way.

組別 淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)空白組 1.00±0.00d左旋咪唑組 2.08±0.08a 40 μg/mLMCP 組 1.26±0.24c 80 μg/mLMCP 組 2.06±0.07a 160 μg/mLMCP 組 1.75±0.17b 320 μg/mLMCP 組 1.45±0.05c

2.2 檢測小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力

MCP對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響如圖1顯示，與正常對照組而言，陽性對照組和MCP處理組巨噬細(xì)胞吞噬中性紅能力顯著增加（P＜0.05），說明MCP能促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞噬能力；與陽性對照組相比，MCP各濃度處理組的小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力顯著下降（P＜0.05），且在MCP 80 μg/mL 時，差異不顯著（P＞0.05）。

圖1 MCP對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響Fig.1 Effect of MCP on phagocytosis of mice macrophages

2.3 MCP對淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

MCP對淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12分泌的影響由表3可知，與空白組相比，左旋咪唑組和 MCP處理組淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12分泌量均顯著升高（P＜0.05），說明左旋咪唑和MCP能夠誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12的分泌；淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12分泌量隨MCP濃度的升高而逐漸升高且呈雙向調(diào)節(jié)作用。與左旋咪唑組相比，MCP為 80 μg/mL 濃度組淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12的分泌量差異不顯著（P＞0.05），其余各濃度組均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

表3 MCP對淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12分泌的影響（±s，n=5）Table 3 Effect of MPC on the secretion of IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12 in lymphocytes (±s, n=5) pg/mL

表3 MCP對淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12分泌的影響（±s，n=5）Table 3 Effect of MPC on the secretion of IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12 in lymphocytes (±s, n=5) pg/mL

組別 IL-4含量 IFN-γ含量空白組 179.86±0.014e 741.37±0.03d左旋咪唑組 252.47±0.04a 861.63±0.01a 40 μg/mL MCP 組 190.62±0.01d 750.28±0.02d 80 μg/mL MCP 組 256.73±0.03a 874.83±0.04a 160 μg/mL MC 組 224.08±0.02b 844.39±0.01b 320 μg/mL MC 組 206.53±0.05c 809.83±0.02c IL-6含量 IL-12含量133.71±0.03d 124.02±0.09e 167.17±0.01a 160.51±0.07a 135.05±0.05d 132.48±0.09d 170.90±0.01a 160.43±0.05a 158.50±0.07b 152.38±0.05b 145.15±0.13c 140.86±0.03c

2.4 MCP 對淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12 mRNA的影響

由表4和圖2～5可知，左旋咪唑組和 MCP處理組淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和 IL-12 mRNA表達(dá)均高于空白組（P＜0.05），由此說明MCP促進(jìn)IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12的分泌可能是通過增加IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA表達(dá)量來調(diào)節(jié)的。淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6和 IL-12 mRNA表達(dá)量隨MCP濃度的升高而逐漸升高，當(dāng)濃度為80 μg/mL 時 IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12 mRNA 表達(dá)量最佳，同左旋咪唑組IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA表達(dá)量相當(dāng)，與左旋咪唑組相比沒有顯著性差異（P＞0.05）；當(dāng)繼續(xù)升高濃度至一定程度時淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA表達(dá)有下降的趨勢，說明 MCP對誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA表達(dá)呈雙向調(diào)節(jié)作用。

表4 MCP對淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA的影響（n=5）Table 4 Effect of MPC on the secretion of IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12 mRNA in lymphocytes (±s, n=5)

表4 MCP對淋巴細(xì)胞IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA的影響（n=5）Table 4 Effect of MPC on the secretion of IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12 mRNA in lymphocytes (±s, n=5)

組別 IL-4 mRNA相對表達(dá)量 IFN-γmRNA相對表達(dá)量 IL-6mRNA相對表達(dá)量 IL-12mRNA相對表達(dá)量空白組 1.00±0.00d 1.00±0.00d 1.00±0.00e 1.00±0.00e左旋咪唑組 8.23±0.86a 7.53±0.32a 8.84±0.43b 8.61±0.61a 40 μg/mL MCP 組 2.02±0.13d 4.35±0.29c 6.67±0.31c 6.98±0.22b 80 μg/mL MCP 組 9.18±0.39a 7.17±0.49a 9.37±0.73 a 8.95±0.18a 160 μg/mL MC 組 5.16±0.47b 5.09±0.53b 9.10±0.26a 4.49±0.30c 320 μg/mL MC 組 3.97±0.36c 2.72±0.34d 4.85±0.35d 2.30±0.27d

圖2 IL-4 mRNA電泳圖譜Fig.2 Electrophoresis results of IL-4 mRNA

圖3 IL-6 mRNA電泳圖譜Fig.3 Electrophoresis results of IL-6 mRNA

圖4 IFN-γ mRNA電泳圖譜Fig.4 Electrophoresis results of IFN-γ mRNA

圖5 IL-12 mRNA電泳圖譜Fig.5 Electrophoresis results of IL-12 mRNA

3 討論

3.1 MCP對淋巴細(xì)胞增殖的影響

細(xì)胞的增殖在生物體生長、發(fā)育、繁殖以及遺傳功能上起重要的作用。淋巴細(xì)胞的增殖對于維持器官的結(jié)構(gòu)和正常的免疫功能至關(guān)重要。細(xì)胞增殖伴隨著許多基因的轉(zhuǎn)錄和許多細(xì)胞因子的表達(dá)[7]。魯振國等[8]研究表明，玉竹多糖和板藍(lán)根多糖對環(huán)磷酰胺造模形成免疫抑制雛雞免疫系統(tǒng)具有調(diào)節(jié)功能，可增強(qiáng)外周淋巴細(xì)胞增殖。相關(guān)研究中，張逸等[9]發(fā)現(xiàn)MCP在100～500 μg/mL濃度范圍內(nèi)，能明顯的促進(jìn)小鼠淋巴細(xì)胞增殖，具有顯著的免疫增強(qiáng)和腫瘤抑制的活性。袁華等[10]體外實驗證實 MCP能夠抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞的增殖及生長以及促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡，從而實現(xiàn)抑瘤作用，并出現(xiàn)藥物濃度依賴性。同樣，本次試驗以左旋咪唑為陽性對照，觀察MCP對體外培養(yǎng)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖功能的影響，發(fā)現(xiàn)在40～320 mg/mL范圍內(nèi)，MCP能顯著提高小鼠脾淋巴細(xì)胞體外增殖，濃度為80 μg/mL時效果最為明顯，且與左旋咪唑組差異不顯著（P＞0.05），MCP與左旋咪唑均能刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖。

3.2 MCP對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力的影響

免疫系統(tǒng)的吞噬細(xì)胞主要由巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞組成。這些細(xì)胞代表了非特異性宿主防御和炎癥的主要細(xì)胞效應(yīng)。中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞通過吞噬外來物質(zhì)并釋放細(xì)胞毒性和促炎介質(zhì)的能力，保護(hù)機(jī)體免受各種病原體和外源性物質(zhì)的侵襲，并在宿主對組織損傷的反應(yīng)中發(fā)揮核心作用[11]。巨噬細(xì)胞是免疫必不可少的細(xì)胞，需要建立和調(diào)節(jié)先天反應(yīng)。參與吞噬和殺死致病微生物，清除受損和衰老[12]。大蒜素對對脂多糖誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響這個研究中報道[13]，大蒜素能提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力，能顯著抑制LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，其機(jī)制可能與抑制NF-κB信號通路激活有關(guān)。王瑩[14]等研究不同分子量枸杞多糖對RAW264.7巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用時，發(fā)現(xiàn)其對巨噬細(xì)胞的增殖、吞噬能力和mRNA等均有促進(jìn)作用。本試驗中，MCP不同處理組與陽性對照組對腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力均有促進(jìn)作用，增強(qiáng)吞噬活性來發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用。

3.3 MCP 對淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6 和 IL-12分泌細(xì)及mRNA表達(dá)的影響

細(xì)胞因子（cytokine，CK）細(xì)胞因子不僅在維持動態(tài)平衡方面很重要，而且是癌癥、自身免疫、肥胖和急慢性炎癥等一系列疾病過程中的重要介質(zhì)。體內(nèi)幾乎每一個細(xì)胞的生存和活動都受到生長因子的調(diào)節(jié)。細(xì)胞因子的產(chǎn)生是由通過細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外病原體識別受體（PRRs）感知危險信號而產(chǎn)生的上游信號驅(qū)動的。細(xì)胞因子是維持體內(nèi)平衡以及先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因素，而調(diào)節(jié)失調(diào)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生則對個體產(chǎn)生影響。因此，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的產(chǎn)生，使特定的細(xì)胞群體和機(jī)體保持平衡。按細(xì)胞因子類型和生物學(xué)功能的不同可以分成兩類：一類是促炎癥細(xì)胞因子（如 IL-2，IL-1，IFN-γ，TFN）；二類是/抗炎癥細(xì)胞因子（如IL-4，IL-6，IL-10），這兩種細(xì)胞因子的比例失衡會造成對機(jī)體的一些損害[15]。類似實驗報道，檀新珠[16]等研究不同質(zhì)量濃度的太子參莖葉多糖對小鼠脾細(xì)胞增殖及細(xì)胞因子的影響，結(jié)果太子參莖葉多糖能刺激淋巴細(xì)胞增殖，能升高細(xì)胞因子 IL-2、IL-4、IL-6和 IFN-γ的含量，且有一定的劑量依賴性，證實太子參莖葉多糖具有提高免疫的能力。崔旻等[17]對正常小鼠及糖尿病模型小鼠脾臟細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，ELISA檢測培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子時發(fā)現(xiàn) MCP可能通過調(diào)節(jié)Th1和Th2細(xì)胞亞群之間的平衡，改善糖尿病模型小鼠Th1和Th2細(xì)胞亞群之間嚴(yán)重的失衡狀態(tài)。因此，本試驗判斷 MCP對淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12均有不同程度的誘導(dǎo)分泌作用，調(diào)節(jié)失調(diào)的細(xì)胞因子，維持平衡。

IL-4由Th2細(xì)胞分泌并發(fā)揮多種功能，在免疫病理學(xué)中的作用不可小覷，IL4的一個重要特性是其在體外促進(jìn) Th2分化的能力[18]。IFN-γ是一種由Th1和NK細(xì)胞響應(yīng)白介素-12產(chǎn)生的細(xì)胞因子，可促進(jìn)Th1免疫反應(yīng)的進(jìn)行和巨噬細(xì)胞的活化，在許多細(xì)胞系統(tǒng)中具有與Th2型細(xì)胞因子拮抗的生物學(xué)功能[19]。IFN-γ具有抗病毒[20]、免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤特性[21]。IL-6是一種由多種由免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的[22]，具有多效性和冗余性，IL-6在多種細(xì)胞類型的分化中發(fā)揮重要作用，可以增強(qiáng)免疫反應(yīng)。IL-6能抑制Th1的分化，IL-6存在下分化的Th1細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-γ會減少。在免疫反應(yīng)中，IL-12作為先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)之間的紐帶發(fā)揮著核心作用[23]。因此，本試驗觀察MCP對這幾種細(xì)胞因子的分泌和mRNA表達(dá)的影響判斷免疫活性。其他研究也有證實，猴頭菇多糖研究了猴頭菇多糖對小鼠體外脾淋巴細(xì)胞分泌Th1、Th2細(xì)胞因子的量及mRNA表達(dá)量的影響，結(jié)果顯示，猴頭菇多糖在25～400 mg/L濃度范圍內(nèi)能顯著刺激 T細(xì)胞亞群 Th1細(xì)胞因子（IL-2、IFN-γ、TNF-α）和 Th2 細(xì)胞因子（IL-4、IL-6）的分泌及mRNA的表達(dá)，通過調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，發(fā)揮雙重免疫調(diào)節(jié)作用[24]。朱建飛[25]等通過MTT法檢測，菜籽多糖WPS-1對淋巴細(xì)胞具有明顯的增殖活性，并表現(xiàn)出明顯的劑量-效果關(guān)系。采用半定量RT-PCR進(jìn)一步研究WPS-1對淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子 1L-2、IL-4、IL-6、IFN-γmRNA表達(dá)的影響。結(jié)果顯示 WPS-1可以提高淋巴細(xì)胞相關(guān)因子 mRNA表達(dá)水平，這是WPS-1能提高免疫系統(tǒng)功能的作用機(jī)制之一。綜上可見，在本試驗中不同濃度的MCP處理可以在不同程度上促進(jìn)淋巴細(xì)胞 IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12的分泌和上調(diào)mRNA表達(dá)，進(jìn)一步調(diào)節(jié)免疫活性。

4 結(jié)論

MCP可提高小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫活性，其作用機(jī)制可能是通過上調(diào)IL-4、IFN-γ、IL-6和IL-12 mRNA表達(dá)，誘導(dǎo)IL-4、IL-6、IFN-γ和IL-12細(xì)胞因子的分泌，促進(jìn)細(xì)胞增殖，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性，從而發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用提高免疫功能，其作用機(jī)制待深入研究，在今后的研究中會更詳實地驗證和完善。