李鹍鵬, 劉平賢, 杜新峰, 張浩

南陽(yáng)市中心醫(yī)院乳腺科(河南南陽(yáng) 473000)

乳腺癌(breast cancer，BC)是全球女性癌癥死亡的主要原因[1]。三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)是BC治療中最棘手的一種，約占所有BC的15%，具有血管增生和侵襲轉(zhuǎn)移傾向[2]。TNBC患者由于缺乏激素受體和人表皮生長(zhǎng)因子受體2，故無(wú)法從內(nèi)分泌或分子靶向治療中獲益，且高血管密度抑制了抗血管生成藥物的療效[3]。因此，了解促進(jìn)TNBC生長(zhǎng)的潛在分子機(jī)制、促進(jìn)有效治療靶點(diǎn)的確定是目前TNBC治療所迫切需要的。微小RNA(microRNA，miRNA)由19～24個(gè)核苷酸組成，在細(xì)胞增殖、分化、遷移等多個(gè)類型的生物過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近些年關(guān)于miRNA在腫瘤中的研究逐漸增多。miR-7-5p是目前來(lái)說(shuō)研究比較多的miRNA之一，屬于miR-7家族。研究表明，miR-7-5p在膠質(zhì)瘤[4]和結(jié)直腸癌[5]等腫瘤細(xì)胞中異常低表達(dá)，說(shuō)明miR-7-5p可能是腫瘤治療的一種新的分子標(biāo)志物。但是miR-7-5p在TNBC中的研究較少。而相關(guān)文獻(xiàn)[6]顯示，TNBC與磷酸肌醇3激酶-蛋白激酶B-哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(phosphoinositide 3 kinases-protein kinase B-mammalian target of rapamyein，PI3K-Akt-mTOR)信號(hào)通路密切相關(guān)。最新的研究[7]發(fā)現(xiàn)，抑制PI3K-Akt-mTOR通路的蛋白表達(dá)有助于降低TNBC細(xì)胞的遷移和侵襲能力?；诖?，本研究將檢測(cè)TNBC組織和細(xì)胞中miR-7-5p的表達(dá)情況，并探討miR-7-5p對(duì)TNBC細(xì)胞增殖、遷移及血管生成的影響，進(jìn)一步揭示miR-7-5p和PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路在TNBC發(fā)展進(jìn)程中的潛在機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 臨床樣本收集 TNBC組織和癌旁正常組織取自2019年7月至2021年6月南陽(yáng)市中心醫(yī)院乳腺科收治的TNBC患者，共56對(duì)組織樣本。本研究經(jīng)南陽(yáng)市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(2022-06-B354)?；颊呔炇饡嬷橥鈺谐臉颖居谀详?yáng)市中心醫(yī)院超低溫冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 細(xì)胞系與主要試劑、儀器 人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A和TNBC細(xì)胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-361和MDA-MB-468)購(gòu)自北納生物公司細(xì)胞庫(kù)。胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基、L-15培養(yǎng)基購(gòu)自北京索萊寶生物公司；青鏈霉素雙抗溶液購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；miR-7-5p模擬物/抑制劑及相應(yīng)對(duì)照、PIK3CD過(guò)表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-PIK3CD)及空載質(zhì)粒(pcDNA)購(gòu)自上海GENECHEM有限公司；Lipofectamine 3000、Trizol購(gòu)自上海凌儀生物科技有限公司；Bestar? one step RT qPCR kit和Bestar qPCR Master Mix購(gòu)自上海星漢生物科技有限公司；CCK-8試劑盒購(gòu)自吉滿生物科技(上海)有限公司；Matrigel購(gòu)自西安飛奔商貿(mào)集團(tuán)生物器械公司；PIK3CD、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR抗體及酶標(biāo)二抗購(gòu)自美國(guó)Abcam公司；CO2培養(yǎng)箱購(gòu)自廣州南方生化醫(yī)學(xué)儀器有限公司；Q6000UV超顯微紫外分析儀購(gòu)自上海在途生物科技有限公司；Stratagene Mx3000P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀購(gòu)自上海智巖科學(xué)儀器有限公司；Transwell小室購(gòu)自上海玉博生物科技有限公司；倒置顯微鏡購(gòu)自上海千欣儀器有限公司。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染、分組 MCF-10A和MDA-MB-231使用DMEM培養(yǎng)基，MDA-MB-453、MDA-MB-361和MDA-MB-468使用L-15培養(yǎng)基，兩種培養(yǎng)基均添加10%胎牛血清和1%青鏈霉素雙抗，在37℃的CO2培養(yǎng)箱(CO2體積分?jǐn)?shù)為5%)中培養(yǎng)。

采用Lipofectamine 3000將miR-7-5p模擬物、miR-7-5p抑制劑及相應(yīng)對(duì)照分別單獨(dú)轉(zhuǎn)染至MDA-MB-468細(xì)胞，標(biāo)記為模擬物對(duì)照組、miR-7-5p模擬物組、抑制劑對(duì)照組、miR-7-5p抑制劑組；將miR-7-5p模擬物分別與pcDNA或pcDNA-PIK3CD共轉(zhuǎn)染至MDA-MB-468細(xì)胞，標(biāo)記為miR-7-5p模擬物+pcDNA組和miR-7-5p模擬物+pcDNA-PIK3CD組，另取未轉(zhuǎn)染的MDA-MB-468細(xì)胞作為空白對(duì)照組。

1.4 qRT-PCR檢測(cè)TNBC組織和細(xì)胞中miR-7-5p表達(dá)水平 用Trizol試劑從冷凍保存的TNBC組織和體外培養(yǎng)的TNBC細(xì)胞系中提取總RNA，用Q6000UV超顯微紫外分析儀定量。利用Bestar? one step RT qPCR kit將RNA合成為cDNA。采用Stratagene Mx3000P實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和Bestar qPCR Master Mix進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR。以U6 snRNA為內(nèi)源性對(duì)照，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行miR-7-5p表達(dá)量分析。miR-7-5p和U6的引物如下：miR-7-5p F：5′-TGTTGTTTTGTGAT-3′，R：5′-GTGCAGGGTCCGAGGT-3′；U6 F：5′-CACTGGGTGCGGCAGGT-3′，R：5′-TCATCACCGATCGATACGATGA-3′。

1.5 CCK-8檢測(cè)MDA-MB-468細(xì)胞活力 各組MDA-MB-468細(xì)胞以1×105細(xì)胞/孔的密度接種到96孔板上。轉(zhuǎn)染48 h后，向細(xì)胞中加入終濃度為10%的CCK-8試劑，并在37℃下維持4 h。使用酶標(biāo)儀在450 nm下評(píng)估光密度(OD)。

1.6 Transwell檢測(cè)MDA-MB-468細(xì)胞遷移能力 將MDA-MB-468細(xì)胞置于上室，下室加入含有胎牛血清的L-15培養(yǎng)基，37℃保持48 h，然后用甲醇固定，并用結(jié)晶紫在室溫下染色5 min，最后在倒置顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野觀察MDA-MB-468細(xì)胞遷移情況，并利用ImageJ v1.52軟件進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.7 血管擬態(tài)實(shí)驗(yàn)分析MDA-MB-468細(xì)胞血管生成能力 96孔板上涂60 μL Matrigel溶液，該溶液在4℃條件下用高濃度Matrigel與不含胎牛血清、青鏈霉素的培養(yǎng)液1∶1混合稀釋而成。平板在37℃下聚合1 h。轉(zhuǎn)染后的各組MDA-MB-468細(xì)胞在不含胎牛血清的L-15培養(yǎng)基中，以1.5×104/孔的密度播種。在37℃孵育6 h后，每孔隨機(jī)選取3個(gè)區(qū)域拍照。從數(shù)字圖像中計(jì)算每個(gè)區(qū)域的導(dǎo)管分支點(diǎn)數(shù)。

1.8 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)miR-7-5p與PIK3CD的靶向關(guān)系 用Targetscan預(yù)測(cè)miR-7-5p與PIK3CD之間的關(guān)系。將含有miR-7-5p靶向位點(diǎn)的PIK3CD片段插入pGL3載體中，構(gòu)建野生型pmirGLO-WT-PIK3CD-3′UTR(WT-PIK3CD)和pmirGLO-MUT-PIK3CD-3′UTR(MUT-PIK3CD)載體。隨后，用Lipofectamine 3000與miR-7-5p模擬物和模擬物對(duì)照分別共轉(zhuǎn)染MDA-MB-468細(xì)胞。轉(zhuǎn)染48 h后，使用雙熒光素酶試劑盒測(cè)量熒光強(qiáng)度。

1.9 Western blot檢測(cè)MDA-MB-468細(xì)胞中PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá) 提取各組MDA-MB-468細(xì)胞總蛋白，并使用BCA蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定每個(gè)樣品的蛋白濃度。蛋白質(zhì)樣品(50 mg)在10%的SDS-PAGE上電泳，然后轉(zhuǎn)移緩沖液至PVDF膜上。用5%脫脂牛奶封閉膜1.5 h，在4℃下用PIK3CD、VEGF、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、β-actin抗體探針過(guò)夜，再用酶標(biāo)二抗在室溫下?lián)u膜1.5 h，最后采用化學(xué)發(fā)光和熒光成像系統(tǒng)對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件,數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。使用studentt檢驗(yàn)或單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)顯著性檢驗(yàn)，然后再進(jìn)行Tukey的事后檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-7-5p在TNBC組織和細(xì)胞系中低表達(dá) 與癌旁正常組織和人正常乳腺上皮細(xì)胞MCF-10A相比，TNBC組織和細(xì)胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-361和MDA-MB-468)中miR-7-5p表達(dá)降低(P<0.05)，見表1～2。

表1 miR-7-5p在TNBC組織中的表達(dá)水平(n=56)

表2 miR-7-5p在TNBC細(xì)胞系中的表達(dá)水平(n=6)

2.2 miR-7-5p抑制MDA-MB-468細(xì)胞增殖 與空白對(duì)照組和模擬物對(duì)照組比較，miR-7-5p模擬物組MDA-MB-468細(xì)胞中miR-7-5p表達(dá)顯著增加，miR-7-5p模擬物的轉(zhuǎn)染率為135%，另外48 h和72 h的細(xì)胞活力明顯下降(P<0.05)；與空白對(duì)照組和抑制劑對(duì)照組比較，miR-7-5p抑制劑組MDA-MB-468細(xì)胞中miR-7-5p表達(dá)顯著減小，miR-7-5p抑制劑的轉(zhuǎn)染率為62%，此外48和72 h的細(xì)胞活力明顯升高(P<0.05)，見表3。

表3 miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞增殖、遷移的影響(n=6)

2.3 miR-7-5p抑制MDA-MB-468細(xì)胞遷移和血管生成 miR-7-5p模擬物組較空白對(duì)照組和模擬物對(duì)照組遷移細(xì)胞數(shù)明顯減少，血管擬態(tài)形成指數(shù)顯著降低，蛋白VEGF表達(dá)明顯下降(P<0.05)；miR-7-5p抑制劑組較空白對(duì)照組和抑制劑對(duì)照組遷移細(xì)胞數(shù)顯著增加，血管擬態(tài)形成指數(shù)顯著升高，蛋白VEGF表達(dá)明顯增加(P<0.05)，見圖1～2和表4。

注：A：空白對(duì)照組；B：模擬物對(duì)照組；C：miR-7-5p模擬物組；D：抑制劑對(duì)照組；E：miR-7-5p抑制劑組

注：A：空白對(duì)照組；B：模擬物對(duì)照組；C：miR-7-5p模擬物組；D：抑制劑對(duì)照組；E：miR-7-5p抑制劑組

表4 miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞血管生成的影響(n=6)

2.4 miR-7-5p靶向調(diào)控PIK3CD表達(dá) 通過(guò)Targetscan軟件預(yù)測(cè)到miR-7-5p與PIK3CD的作用位點(diǎn)(圖3)。雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，miR-7-5p模擬物+WT-PIK3CD組相對(duì)熒光素酶活性顯著低于模擬物對(duì)照+WT-PIK3CD組(P<0.05)，而miR-7-5p模擬物+MUT-PIK3CD組與模擬物對(duì)照+MUT-PIK3CD組的相對(duì)熒光素酶差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表5。miR-7-5p模擬物組PIK3CD蛋白表達(dá)較模擬物對(duì)照組降低，miR-7-5p抑制劑組PIK3CD蛋白表達(dá)較抑制劑對(duì)照組升高(P<0.05)。見圖4和表6。

圖3 miR-7-5p與PIK3CD的結(jié)合位點(diǎn)

注：A：模擬物對(duì)照組；B：miR-7-5p模擬物組；C：抑制劑對(duì)照組；D：miR-7-5p抑制劑組

表5 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)(n=6)

表6 miR-7-5p靶向調(diào)控PIK3CD(n=6)

2.5 PIK3CD過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞增殖、遷移、血管生成的抑制作用 與miR-7-5p模擬物組和miR-7-5p模擬物+pcDNA組相比，miR-7-5p模擬物+pcDNA-PIK3CD組PIK3CD蛋白表達(dá)(pcDNA-PIK3CD的轉(zhuǎn)染率為113.33%)及48、72 h的細(xì)胞活力明顯升高，遷移細(xì)胞數(shù)顯著增多，血管擬態(tài)形成指數(shù)及VEGF蛋白表達(dá)明顯提高(P<0.05)，見圖5～6、表7～8。

注：A：miR-7-5p模擬物組；B：miR-7-5p模擬物+pcDNA組；C：miR-7-5p模擬物+pcDNA-PIK3CD

注：A：miR-7-5p模擬物組;B：miR-7-5p模擬物+pcDNA組;C：miR-7-5p模擬物+pcDNA-PIK3CD

表7 PIK3CD過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞增殖的抑制作用(n=6)

表8 PIK3CD過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞遷移和血管生成的抑制作用(n=6)

2.6 PIK3CD過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞中PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路蛋白的影響 與空白對(duì)照組或模擬物對(duì)照組比較，miR-7-5p模擬物組PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平明顯下調(diào)；與miR-7-5p模擬物組和miR-7-5p模擬物+pcDNA組比較，miR-7-5p模擬物+pcDNA-PIK3CD組PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平明顯升高(P<0.05)，見圖7和表9。

注：A：空白對(duì)照組；B：模擬物對(duì)照組；C：miR-7-5p模擬物組；D：miR-7-5p模擬物+pcDNA組；E：miR-7-5p模擬物+pcDNA-PIK3CD組

表9 PIK3CD過(guò)表達(dá)逆轉(zhuǎn)miR-7-5p對(duì)MDA-MB-468細(xì)胞中PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路蛋白的影響(n=6)

3 討論

TNBC是最具挑戰(zhàn)性的異質(zhì)性BC亞型，常伴有侵襲性表型、高復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后[8]。目前，傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性化療仍是TNBC治療的主要方法，但化療藥物可能也會(huì)對(duì)正常組織產(chǎn)生不良反應(yīng)和耐藥性，從而導(dǎo)致化療失敗[9]。因此，尋找安全有效的治療策略成為治療TNBC的一種有前景的途徑。

有證據(jù)[10]表明，特定的miRNA簇可能在TNBC的生物學(xué)中發(fā)揮重要作用，并可能在TNBC中具有臨床相關(guān)性，可以作為早期診斷標(biāo)志物、預(yù)后標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。雖然miR-7-5p已經(jīng)被報(bào)道為一種致癌miRNA，促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖[11]，但它也被揭示為一種腫瘤抑制因子，因?yàn)樗ㄟ^(guò)分別靶向NOVA2和KLF4抑制肺癌、結(jié)直腸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[5,12]。然而，本研究結(jié)果顯示，miR-7-5p在TNBC組織和細(xì)胞系(MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-361和MDA-MB-468)中明顯下調(diào)表達(dá)，這與Shi等[13]的研究一致，提示miR-7-5p參與TNBC的發(fā)生發(fā)展。選擇miR-7-5p表達(dá)量最低的MDA-MB-468細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-7-5p模擬物后細(xì)胞中miR-7-5p表達(dá)顯著增加，48 h和72 h的細(xì)胞活力明顯下降，遷移細(xì)胞數(shù)明顯減少，與既往研究[13]一致；而轉(zhuǎn)染miR-7-5p抑制劑后，上述指標(biāo)水平正好相反，提示過(guò)表達(dá)miR-7-5p可抑制MDA-MB-468細(xì)胞增殖和遷移，而抑制miR-7-5p表達(dá)可促進(jìn)MDA-MB-468細(xì)胞增殖和遷移。既往研究發(fā)現(xiàn)，miR-7-5p參與肺癌細(xì)胞周期調(diào)控，特別是G0/G1期[14]。miR-7-5p過(guò)表達(dá)是否會(huì)影響TNBC的凋亡和細(xì)胞周期，以及與miR-7-5p聯(lián)合處理是否會(huì)影響TNBC的細(xì)胞功能是我們未來(lái)研究的下一個(gè)目標(biāo)。

自1999年血管生成擬態(tài)首次被證明是一種高侵襲性和轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞在體外形成高度模式化的血管通道的現(xiàn)象以來(lái)，血管生成和功能引起了人們的廣泛關(guān)注[15]。血管生成擬態(tài)可在沒(méi)有內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的情況下由基底膜組成，這得到了眾多潛在分子途徑研究的支持[16]。血管生成對(duì)于許多侵襲性腫瘤如卵巢癌和肺癌的疾病進(jìn)展是重要的[17-18]。血管生成已被報(bào)道與TNBC的轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)[19]。在這些機(jī)制中可能有miRNA的參與。例如，miR-126-3p通過(guò)靶向RGS3抑制TNBC細(xì)胞的血管生成[20]。本研究通過(guò)血管擬態(tài)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-7-5p過(guò)表達(dá)可抑制血管生成，抑制miR-7-5p表達(dá)可誘導(dǎo)血管生成。血管生成被認(rèn)為是癌癥的一個(gè)標(biāo)志，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)至關(guān)重要。腫瘤細(xì)胞則會(huì)產(chǎn)生VEGF等血管生成和增殖因子來(lái)促進(jìn)新血管的生長(zhǎng)[21]。本研究結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miR-7-5p模擬物可下調(diào)VEGF蛋白表達(dá)，而轉(zhuǎn)染miR-7-5p抑制劑可上調(diào)VEGF蛋白表達(dá)(P<0.05)，進(jìn)一步揭示miR-7-5p過(guò)表達(dá)或沉默分別抑制或誘導(dǎo)MDA-MB-468細(xì)胞血管生成。

本研究通過(guò)Targetscan軟件預(yù)測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)PIK3CD可能是miR-7-5p的潛在靶點(diǎn)。PIK3CD可編碼PI3K催化亞基的p110δ亞型，P110δ主要在造血細(xì)胞中表達(dá)，并與p85α調(diào)節(jié)亞基形成異源二聚體(PI3Kδ)。研究[22]表明，PIK3CD在結(jié)腸癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)，在體內(nèi)和體外均具有促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的作用。還有研究[23]發(fā)現(xiàn)，在間變性甲狀腺癌中，PIK3CD過(guò)表達(dá)可使miR-125b的抑癌作用得到逆轉(zhuǎn)。本研究通過(guò)雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)和Western blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，miR-7-5p直接靶向負(fù)調(diào)控PIK3CD蛋白表達(dá)。此外，在miR-7-5p過(guò)表達(dá)的基礎(chǔ)上過(guò)表達(dá)PIK3CD，細(xì)胞活力明顯升高，遷移細(xì)胞數(shù)明顯增多，血管擬態(tài)形成指數(shù)及VEGF蛋白表達(dá)明顯提高(P<0.05)，進(jìn)一步說(shuō)明miR-7-5p通過(guò)直接靶向PIK3CD抑制MDA-MB-468細(xì)胞增殖、遷移和血管生成，為抗血管生成治療提供了新的靶點(diǎn)。因此，我們推斷miR-7-5p/PIK3CD有可能成為TNBC治療的一個(gè)新的生物標(biāo)志物。

PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路在細(xì)胞分化、增殖、凋亡等多種細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。PI3Kδ屬于IA類PI3K，其激活后導(dǎo)致磷脂酰肌醇3,4-二磷酸磷酸化生成磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸，后者將不活躍的Akt召集到質(zhì)膜上。然后Akt被磷酸化并介導(dǎo)mTOR復(fù)合物機(jī)制靶點(diǎn)的進(jìn)一步激活[24]。Yang等[25]表明，PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路的激活可促進(jìn)TNBC細(xì)胞的血管生成和轉(zhuǎn)移。Liu等[26]顯示，小蘗堿能夠通過(guò)下調(diào)PI3K、p-Akt和mTOR表達(dá)抑制PI3K-Akt-mTOR通路，進(jìn)而抑制TNBC的發(fā)生。本研究觀察發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-7-5p后PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平均明顯下調(diào)；而繼續(xù)過(guò)表達(dá)PIK3CD可使PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平得到恢復(fù)，提示過(guò)表達(dá)miR-7-5p可通過(guò)靶向調(diào)節(jié)PIK3CD表達(dá)抑制PI3K-Akt-mTOR通路，抑制MDA-MB-468細(xì)胞的惡性發(fā)展。

綜上所述，miR-7-5p可抑制TNBC細(xì)胞增殖、遷移和血管生成，其機(jī)制與靶向下調(diào)PIK3CD表達(dá)進(jìn)而抑制PI3K-Akt-mTOR信號(hào)通路有關(guān)，為TNBC治療提供潛在靶點(diǎn)。本研究首次利用體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了miR-7-5p和PIK3CD的靶向關(guān)系以及其對(duì)TNBC細(xì)胞發(fā)展的作用，但是也有一些不足之處，首先，用于研究的臨床樣本量不夠大；其次，并未在體內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)論證；最后，miR-7-5p是否影響TNBC細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期還不清楚，這都需要后期更加深入的研究。

利益相關(guān)聲明：本研究不存在研究者與公開研究成果有關(guān)的利益沖突。

作者貢獻(xiàn)說(shuō)明：李鹍鵬負(fù)責(zé)提出研究選題、設(shè)計(jì)研究方案、實(shí)施研究過(guò)程、采集整理和分析數(shù)據(jù)；李鹍鵬、劉平賢等負(fù)責(zé)調(diào)研整理文獻(xiàn)、設(shè)計(jì)論文框架、起草論文、修訂論文；杜新峰、張浩等負(fù)責(zé)獲取研究經(jīng)費(fèi)、技術(shù)或材料支持和指導(dǎo)性支持。