白 鵬，韓宏義，趙慧穎，鄭 靜

（遼寧省丹東農(nóng)業(yè)科學(xué)院，遼寧 丹東 118100）

軟棗獼猴桃（Actinidia arguta）別名軟棗子，有“水果之王”的美譽(yù)，維生素C 含量高達(dá)450 mg/100 g，是蘋(píng)果、梨的80～100 倍，柑橘的5～10 倍；還含有氨基酸、類胡蘿卜素及鎂、鐵、鉀、鈉等多種營(yíng)養(yǎng)成分。軟棗獼猴桃處于開(kāi)發(fā)階段，目前在東北的栽培面積較小，大部分處于野生狀態(tài)，面臨著資源枯竭等問(wèn)題。利用植物組織培養(yǎng)對(duì)其進(jìn)行快速繁殖，有利于優(yōu)秀野生資源的保存和大規(guī)模繁殖推廣，還可以進(jìn)行組培脫毒，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

本試驗(yàn)利用野生獼猴桃的嫩莖段誘導(dǎo)成芽，再由芽產(chǎn)生重生芽，進(jìn)而培育植株，以期建立野生軟棗獼猴桃的組織快繁體系，為野生軟棗獼猴桃的大規(guī)模繁殖提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間、地點(diǎn)

試驗(yàn)于2013 年在丹東農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)中心的植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)材料

選擇長(zhǎng)勢(shì)旺盛、無(wú)病蟲(chóng)害的健壯植株，采取帶嫩芽的莖段作為試驗(yàn)外植體。6-BA、赤霉素、NAA、IBA、蔗糖、瓊脂等材料由實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一提供。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 材料消毒。選擇新發(fā)無(wú)病枝條，去葉后用軟刷刷去莖段表面塵土，剪成帶有2～3 個(gè)嫩芽的小段，用飽和潔爾滅溶液浸泡10 min 后，用流水沖洗30 min，然后用75%酒精滅菌30 s，無(wú)菌水快速?zèng)_洗4～5 次，再用0.1%氯化汞滅菌6 min，無(wú)菌水沖洗3 次，最后用無(wú)菌剪刀修剪莖段兩端后放入培養(yǎng)基中[1]。

1.3.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件。以MS 為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-芐氨基嘌呤（6-BA）、赤霉素（GA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA），詳見(jiàn)表1、表2、表3、表4。蔗糖用量為30 g/L，瓊脂用量為4.9 g/L[2]。

培養(yǎng)溫度24±2℃，每日光照14 h，光照強(qiáng)度2200 lx[3]。

1.3.3 培養(yǎng)方法

1.3.3.1 誘導(dǎo)培養(yǎng)。將滅好菌的莖段接種于以MS 為基本培養(yǎng)基附加不同濃度6-BA、GA、NAA 的培養(yǎng)基中，詳見(jiàn)表1，每瓶3 點(diǎn)，接種10 瓶。

1.3.3.2 繼代培養(yǎng)。將誘導(dǎo)后的小芽接種于以MS 為基本培養(yǎng)基附加不同濃度6-BA、GA 的培養(yǎng)基中，詳見(jiàn)表2，每瓶3 點(diǎn)，接種10 瓶。

1.3.3.3 壯苗培養(yǎng)。將繼代培養(yǎng)后的小苗接種于以MS 為基本培養(yǎng)基附加不同濃度6-BA、GA、NAA 的培養(yǎng)基中，每瓶3 點(diǎn)，接種10 瓶，詳見(jiàn)表3。

1.3.3.4 生根培養(yǎng)。將經(jīng)過(guò)壯苗培養(yǎng)的組培苗接種于以MS為基本培養(yǎng)基附加不同濃度IBA、NAA 的培養(yǎng)基中，每瓶3 點(diǎn)，接種10 瓶，詳見(jiàn)表4[4]。

1.4 測(cè)定內(nèi)容

接種4～5 天后觀察記錄誘導(dǎo)成芽數(shù)，計(jì)算發(fā)芽率。繼代培養(yǎng)接種1 周后，觀察記錄重生芽數(shù)量，計(jì)算增值系數(shù)。壯苗培養(yǎng)接種后觀察記錄幼苗生長(zhǎng)情況。生根培養(yǎng)接種5 天后，觀察并記錄組培苗生根數(shù)，計(jì)算生根率。

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 不同激素組合對(duì)誘導(dǎo)成芽的影響

在接種4～5 天后，莖段上有小芽長(zhǎng)出，由表1 可以看出，培養(yǎng)基MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.05 mg/L 培養(yǎng)效果最佳。培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有出現(xiàn)褐化，誘導(dǎo)30 天后可進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

表1 不同激素組合對(duì)誘導(dǎo)成芽的影響

2.2 不同激素濃度對(duì)繼代培養(yǎng)的影響

接種1 周后，小芽明顯生長(zhǎng)，20 天后可以出現(xiàn)重生芽。由表2 可以看出，培養(yǎng)基MS+6-BA1.0 mg/L 效果最佳，重生芽數(shù)量明顯多于其他幾種組合。培養(yǎng)過(guò)程中沒(méi)有玻璃化現(xiàn)象，大概20 天左右可進(jìn)行1 次繼代培養(yǎng)。

表2 不同激素濃度對(duì)繼代的影響

2.3 不同激素組合對(duì)壯苗培養(yǎng)的影響

接種10 天后，可長(zhǎng)至2 cm 左右，30 天后可長(zhǎng)至5 cm 以上，且苗較粗壯，可進(jìn)行生根培養(yǎng)。由表3 可以看出，培養(yǎng)基MS+6-BA0.5 mg/L+NAA0.02 mg/L 組培苗生長(zhǎng)最佳。

表3 不同激素組合對(duì)壯苗培養(yǎng)的影響

2.4 不同激素濃度對(duì)生根的影響

接種5 天后，可以看見(jiàn)苗的底部出現(xiàn)小白點(diǎn)，10 天左右有根長(zhǎng)出。由表4 可看出，不加任何激素的培養(yǎng)基MS 生根效果最好。25 天左右根系長(zhǎng)度可達(dá)到移栽標(biāo)準(zhǔn)，可進(jìn)行煉苗移栽。

表4 不同激素濃度對(duì)生根的影響

煉苗移栽時(shí)將組培瓶移至煉苗室放置1～2 天后打開(kāi)瓶蓋，去蓋后放置5～7 天，然后將組培苗栽植在溫室苗床上[5]。苗床配比為草炭土：園土：細(xì)砂=7：2：1。室內(nèi)溫度不能超過(guò)28℃，前期注意遮陽(yáng)保水[6]。

3 結(jié)論與討論

3.1 組培中褐化產(chǎn)生原因及解決措施

組培中出現(xiàn)苗木褐化問(wèn)題可能是滅菌過(guò)程中酒精或氯化汞的使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；光照溫度對(duì)褐變影響也較大，溫度高光照強(qiáng)易產(chǎn)生褐變。產(chǎn)生褐變問(wèn)題可適當(dāng)降低培養(yǎng)溫度，遮光或暗培養(yǎng)一段時(shí)間；或進(jìn)行連續(xù)移瓶，也可有效減輕組培苗褐化[7]。

3.2 組培中玻璃化產(chǎn)生原因及解決措施

組培中出現(xiàn)苗木玻璃化問(wèn)題可能是由于培養(yǎng)中激素濃度高，導(dǎo)致苗增殖過(guò)快，培養(yǎng)基中吸收養(yǎng)分不足，且吸收大量水分，從而造成玻璃化問(wèn)題。溫度變化對(duì)苗木的玻璃化影響較大，溫度變化較大時(shí)，組培瓶壁上產(chǎn)生大量水珠；另外，消毒方法、光照等也對(duì)苗木玻璃化有一定影響[8]。

3.3 苗木移栽成活率低原因及解決措施

煉苗時(shí)間過(guò)短，移栽到溫室后遮陽(yáng)保濕不佳，是造成移栽后成活率低的主要原因。煉苗時(shí)間不應(yīng)低于5 天，移栽后應(yīng)保證遮陽(yáng)保濕15～20 天，移栽苗完全成活后適當(dāng)遮陽(yáng)即可。

野生軟棗獼猴桃品種很多，但真正各項(xiàng)性狀都比較優(yōu)秀的品種很少。本試驗(yàn)研究東北地區(qū)野生獼猴桃的組培快繁技術(shù)，可大大加快野生軟棗獼猴桃優(yōu)良品種的篩選及繁殖推廣速度，為東北地區(qū)野生軟棗獼猴桃資源開(kāi)發(fā)及其優(yōu)良品種選育奠定基礎(chǔ)[9]。