賈 平，童 清，唐紅燕，楊利華，李 倩，張建珠，劉 悅

(普洱市林業(yè)和草原科學(xué)研究所，云南 普洱 665000)

白及(Bletillastriata(Thunb.) Reichb.f.)又名連及草、甘根、紫蘭等，為蘭科(Orchidaceae)白及屬(Bletilla)植物，主要利用部位為假鱗莖(干燥)。白及主要分布在中國(guó)、緬甸北部以及日本等國(guó)，在我國(guó)主產(chǎn)于貴州、云南、四川、重慶、陜西、浙江等省市，生于海拔100～3200 m的櫟樹(shù)林或針葉林下、路邊草叢或巖石縫中[1]。

白及所含化學(xué)成分種類(lèi)極其豐富，其中聯(lián)芐類(lèi)、二氫菲類(lèi)、聯(lián)菲類(lèi)等為白及主要活性成分[2-3]。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為，白及具有補(bǔ)肺止血、消腫生肌等功效[4]；現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，白及多糖具有促進(jìn)凝血、消炎抗菌、抗腫瘤等作用[5]。隨著白及的藥用功效及其它作用被不斷開(kāi)發(fā)，其市場(chǎng)需求量也在逐年上升，導(dǎo)致野生白及資源日趨枯竭[6-7]。

近年來(lái)，普洱市相關(guān)企業(yè)及科研院所開(kāi)始大力研究白及人工繁育及豐產(chǎn)栽培技術(shù)，白及優(yōu)良品種的選育成為白及人工繁育的重點(diǎn)研究?jī)?nèi)容。普洱市林業(yè)科學(xué)研究所、普洱市玉林林業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司、普洱良寶生物科技有限公司等科研單位及企業(yè)對(duì)白及優(yōu)良品種選育進(jìn)行了一系列研究，選育出2個(gè)生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、品質(zhì)好的白及優(yōu)良品種。但是，普洱市仍然存在良種及新品種推廣種植范圍較小、普通農(nóng)戶(hù)對(duì)良種的認(rèn)識(shí)和種植較少等問(wèn)題。因此，本研究通過(guò)進(jìn)一步選育良種，提高白及產(chǎn)量及質(zhì)量，以期為農(nóng)戶(hù)增產(chǎn)增收提供保障，為鞏固脫貧攻堅(jiān)成果打下基礎(chǔ)。

1 選育地自然概況

母株位于普洱市鎮(zhèn)沅縣勐大鎮(zhèn)文來(lái)村背陰山，地理坐標(biāo)為100°50′21″E、24°04′10″N，海拔1360 m，坡向?yàn)楸逼?，土壤為紅壤，林分為雜木林，母株年齡4 a。初選、復(fù)選、決選地點(diǎn)位于云南省普洱市鎮(zhèn)沅縣，位于100°21′—101°31′E、23°24′—24°22′N(xiāo)之間，平均海拔1376 m，年均氣溫18.5 ℃，年均降水量1235 mm，年均日照時(shí)間2065 h。

優(yōu)良無(wú)性系選育共設(shè)置3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)，分別位于普洱市鎮(zhèn)沅縣勐大鎮(zhèn)文來(lái)村、景谷縣威遠(yuǎn)鎮(zhèn)公榔村芒洋社、普洱市林業(yè)科學(xué)研究所苗圃(表1)。

表1 優(yōu)良無(wú)性系選育試驗(yàn)地情況

2 選育過(guò)程

2.1 篩選指標(biāo)

植株生長(zhǎng)特性及適應(yīng)性、假鱗莖產(chǎn)量、假鱗莖品質(zhì)是白及良種選育過(guò)程中的關(guān)鍵指標(biāo)，也是評(píng)價(jià)區(qū)域性試驗(yàn)的重要依據(jù)。

2.1.1 初選 植株生長(zhǎng)健壯，葉片生長(zhǎng)茂盛，無(wú)病蟲(chóng)害；每叢株數(shù)在15株以上，平均株高50 cm以上，平均地徑0.8 cm以上，鮮假鱗莖飽滿(mǎn)，大小均勻。

2.1.2 復(fù)選 在初選的基礎(chǔ)上進(jìn)一步調(diào)查假鱗莖生長(zhǎng)情況，選擇株產(chǎn)鮮假鱗莖500 g以上，單個(gè)鮮假鱗莖重30 g以上，鮮假鱗莖飽滿(mǎn)、大小均勻的植株進(jìn)入復(fù)選。

2.1.3 決選 對(duì)已進(jìn)入復(fù)選的優(yōu)良單株進(jìn)行鮮假鱗莖內(nèi)含物測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)為：白及粗多糖含量6.0%及以上、還原糖含量1.00%及以上，結(jié)果符合以上標(biāo)準(zhǔn)的優(yōu)良單株進(jìn)入決選。

2.1.4 優(yōu)良無(wú)性系選育 篩選出的優(yōu)良單株經(jīng)過(guò)組培育苗、無(wú)性系后代測(cè)定，能夠保持母株的優(yōu)良性狀，在不同區(qū)域適應(yīng)性強(qiáng)、產(chǎn)量高、品質(zhì)好。

2.2 優(yōu)株選擇

2015年3—11月，普洱市林業(yè)科學(xué)研究所技術(shù)人員在鎮(zhèn)沅縣勐大鎮(zhèn)文來(lái)村背陰山進(jìn)行野外調(diào)查，共發(fā)現(xiàn)白及野生實(shí)生單株1023株，并對(duì)植株生長(zhǎng)情況、開(kāi)花結(jié)果習(xí)性、生物學(xué)特性等進(jìn)行調(diào)查，根據(jù)初選的篩選指標(biāo)，共選出優(yōu)良單株31株。2016年對(duì)初選出的優(yōu)良單株生長(zhǎng)情況、抗性等特性進(jìn)行觀(guān)測(cè)，并對(duì)假鱗莖生長(zhǎng)情況及產(chǎn)量進(jìn)行調(diào)查，淘汰18株，復(fù)選出優(yōu)良單株13株。2017年對(duì)進(jìn)入復(fù)選的優(yōu)良單株假鱗莖進(jìn)行品質(zhì)檢測(cè)，決選出6株優(yōu)良單株，分別編號(hào)為 PELK-1～PELK-6。

2.3 優(yōu)良無(wú)性系選育

2017—2018年，將決選出的6個(gè)優(yōu)良單株分別利用原球莖芽培育組培苗，2018年7月開(kāi)始進(jìn)行優(yōu)良無(wú)性系選育。在3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)(表1)采用隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)設(shè)計(jì)，6個(gè)優(yōu)良單株無(wú)性系組培苗作為6個(gè)處理，以普通白及組培苗作為對(duì)照(CK)，每個(gè)處理種植15株(叢)，3次重復(fù)。株(叢)行距20 cm×30 cm。

連續(xù)3 a對(duì)6個(gè)優(yōu)良單株的無(wú)性系后代及對(duì)照白及的生長(zhǎng)情況、物候、抗性等進(jìn)行觀(guān)測(cè)，并對(duì)假鱗莖中粗多糖、還原糖的含量進(jìn)行檢測(cè)。粗多糖檢測(cè)方法為：苯酚-硫酸分光光度測(cè)定法[8]；還原糖的檢測(cè)方法為：GB 5009.7—2016食品中還原糖的測(cè)定[9]。

3 選育結(jié)果與分析

試驗(yàn)結(jié)果表明，PELK-1號(hào)優(yōu)良單株無(wú)性系后代植株生長(zhǎng)旺盛，發(fā)苗能力強(qiáng)，產(chǎn)量高，品質(zhì)好，無(wú)病蟲(chóng)害，抗逆性強(qiáng)，相較于其它5個(gè)優(yōu)良單株無(wú)性系后代及對(duì)照具有極顯著差異，因此最終選定PELK-1號(hào)優(yōu)良單株無(wú)性系后代為優(yōu)良無(wú)性系，命名為‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系。該無(wú)性系于2020年11月17日通過(guò)云南省林木品種審定委員會(huì)認(rèn)定(良種編號(hào)：云 R-SC-BS-054-2020)。

3.1 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系品種特性

3.1.1 植物學(xué)特性 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系植株直立狀，3年生植株平均株高0.60 m，最高可達(dá)0.89 m，平均地徑1.19 cm，平均每叢有單株16.87株，最多可達(dá)42株。每株有葉3～6片，披針形或?qū)捙樞危L(zhǎng)6.2～63.8 cm，寬0.8～12.4 cm，先端漸尖，基部下延成長(zhǎng)鞘狀，全緣?？偁罨ㄐ蝽斏ㄝS下部綠色，著生花朵部位紫紅色，長(zhǎng)18.6～43.1 cm，苞片披針形，早脫落；花期4—6月，花紫紅色，每個(gè)花序有花4～14朵，每朵花有5片花瓣，完全打開(kāi)后直徑3.4～4.1 cm；中萼片和兩側(cè)花瓣近等長(zhǎng)，狹長(zhǎng)橢圓形，長(zhǎng)2.9～3.2 cm，寬0.8～0.9 cm，側(cè)萼片狹長(zhǎng)圓形，鐮刀狀彎曲，長(zhǎng)2.4～2.7 cm，寬0.7～0.9 cm；唇瓣抱蕊柱，倒卵形，長(zhǎng)2.3～2.7 cm，寬1.6～2.1 cm，內(nèi)有5條白色縱褶，上部3裂，兩側(cè)裂片耳狀，中裂片頂端微凹或截平，邊緣皺縮；蕊柱正面上端紫紅色，里面白色，長(zhǎng)1.8～2.0 cm，寬0.4～0.5 cm；花托紫紅色，長(zhǎng)0.8～1.4 cm。果期7—9月，朔果圓柱形，兩端尖，具6縱肋，長(zhǎng)2.9～3.8 cm，直徑0.7～0.9 cm；每個(gè)總狀花序有2～6個(gè)果實(shí)，成熟時(shí)淺褐色。種子小，粉狀，黃褐色，僅有胚，無(wú)胚乳。假鱗莖為淺白色，肉質(zhì)肥厚、富黏性，扁球形近似圓球形，數(shù)個(gè)緊密相連，爪狀分支長(zhǎng)1.4～3.2 cm，粗1.1～2.1 cm；假鱗莖平均長(zhǎng)、寬、厚分別為3.51、3.15、2.36 cm，最大假鱗莖重89.19 g，平均單個(gè)假鱗莖重45.39 g。折干率為4∶1。

3.1.2 品種特異性、一致性和穩(wěn)定性

1)特異性：‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系與對(duì)照(商品種)比較，其特異性主要表現(xiàn)在假鱗莖上，詳見(jiàn)表2。

2)一致性：‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系采用組織培養(yǎng)繁殖。組培苗未見(jiàn)異型植株，品種特異性狀在母株和無(wú)性系間具有高度一致性。

表2 ‘普科1號(hào)’優(yōu)良無(wú)性系特異性狀

3)穩(wěn)定性：經(jīng)對(duì)母株和無(wú)性系后代植株進(jìn)行調(diào)查，‘普科1號(hào)’假鱗莖形狀、假鱗莖爪狀分枝形狀、新生假鱗莖生長(zhǎng)方向等特異性表現(xiàn)均高度穩(wěn)定。

3.1.3 生態(tài)學(xué)特性 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系在海拔1200～1800 m的地方種植，芽分化、生長(zhǎng)快，植株生長(zhǎng)旺盛，假鱗莖大，種植3 a即可采收；在海拔1900～2200 m的地方種植，芽分化、生長(zhǎng)稍慢，植株生長(zhǎng)較好，假鱗莖稍小，種植4～5 a可采收。

3.2 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系生長(zhǎng)發(fā)育特性及物候特征

3.2.1 生長(zhǎng)發(fā)育特性 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系植株生長(zhǎng)旺盛，3年生植株平均株高59.73 cm，地徑1.19 cm，葉長(zhǎng)40.67 cm，葉寬6.31 cm，假鱗莖長(zhǎng)、寬、厚分別為3.51、3.15、2.36 cm，與其它5個(gè)參試無(wú)性系及普通白及品種(CK)比較均具有極顯著差異(表3)。

表3 ‘普科1號(hào)’及其它參試無(wú)性系3年生植株及假鱗莖生長(zhǎng)情況 cm

‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系3年生植株平均每叢可產(chǎn)假鱗莖16.87個(gè)，鮮假鱗莖產(chǎn)量可達(dá)45943.8 kg·hm-2，與其它5個(gè)參試無(wú)性系及普通白及品種(CK)相比差異極顯著(表4)。

表4 ‘普科1號(hào)’及其它參試無(wú)性系3年生假鱗莖產(chǎn)量

3.2.2 物候特征 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系在鎮(zhèn)沅縣、景谷縣、思茅區(qū)物候期基本一致，植株生長(zhǎng)期為2月初—10月中旬，單個(gè)假鱗莖生長(zhǎng)期為1 a(表5)。

表5 ‘普科1號(hào)’白及物候特征

3.3 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系品質(zhì)

白及粗多糖和原糖含量為評(píng)價(jià)白及假鱗莖品質(zhì)的2個(gè)重要指標(biāo)。2020年6月對(duì)‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系及其它參試無(wú)性系3年生假鱗莖鮮品粗多糖、還原糖含量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表6。通過(guò)檢測(cè)，‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系粗多糖含量為7.85%、還原糖含量為1.68%，分別超過(guò)對(duì)照409.74%、127.03%。

表6 ‘普科1號(hào)’及其它參試無(wú)性系3年生假鱗莖鮮品粗多糖、還原糖含量 %

3.4 ‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系繁育及種植技術(shù)

3.4.1 良種繁育技術(shù) 采用1/2 MS+NAA 0.2(0.5) mg·L-1+蔗糖2.5%+土豆泥8%+活性炭0.1%培養(yǎng)基，在無(wú)菌條件下將未產(chǎn)生根的原球莖分化物轉(zhuǎn)接入培養(yǎng)基中，于(25±2) ℃條件下培養(yǎng)，每日光照12 h。瓶苗在培養(yǎng)室培養(yǎng)60～90 d，待苗高1.0～1.5 cm、萌發(fā)的苗長(zhǎng)滿(mǎn)培養(yǎng)瓶時(shí)進(jìn)行分苗，每瓶苗分成3～4瓶。

在(25±2) ℃條件下壯苗培養(yǎng)基中生長(zhǎng)60～90 d，苗高3 cm左右時(shí)即可煉苗。首先將瓶蓋逐漸打開(kāi)，在常溫條件下的遮蔭棚或溫室煉苗15～20 d，再移到溫室大棚種植進(jìn)行馴化煉苗；大棚馴化煉苗80～100 d，苗高≥6 cm，鱗球莖≥2 cm，具有3～4片葉即可出圃。

3.4.2 種植技術(shù)

1)大田種植。深翻土地30 cm，起寬1.0 m、高30 cm的畦，細(xì)耕后平整畦面，株行距20 cm×30 cm。施有機(jī)肥60～75 t·hm-2，普通過(guò)磷酸鈣3000 kg·hm-2，基肥與土壤充分拌均。組培苗在1—7月種植，分株苗在1—3月種植，開(kāi)5 cm深的種植溝，種植時(shí)做到苗正、根舒，覆土5 cm，再覆蓋松針，以見(jiàn)不到土為宜。搭建遮蔭網(wǎng)棚高2.0 m，遮光度30%～50%。種植后進(jìn)行適時(shí)除草。每年春、秋兩季各追肥1次，按照過(guò)磷酸鈣(P2O5含量12%)450 kg·hm-2和漚肥1.5 t·hm-2的用量，將過(guò)磷酸鈣和漚肥混合均勻撒施在種植床面上，覆蓋一層松針后再覆蓋上一層黑色塑料地膜。

2)林下種植。在普洱市闊葉林及針葉林下均可種植，林分郁閉度以0.4～0.6為宜。清除林下雜灌、雜草等，整地、種植株行距與大田種植一致。施有機(jī)肥30～45 t·hm-2，普通過(guò)磷酸鈣300 kg·hm-2作為基肥。種植時(shí)間5—8月，其它與大田種植方法相同。加強(qiáng)病蟲(chóng)害防治，11—12月植株地上部分干枯后，采收假鱗莖。

4 結(jié)論與討論

普洱市林業(yè)科學(xué)研究所歷時(shí)6 a，經(jīng)過(guò)初選、復(fù)選、決選、優(yōu)良無(wú)性系選育等程序，選育出‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系?！湛?號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系具有植株生長(zhǎng)旺盛、假鱗莖產(chǎn)量高、品質(zhì)優(yōu)良等特性。該優(yōu)良無(wú)性系在海拔1200～1800 m的區(qū)域種植3 a即可采收，產(chǎn)量最高可達(dá)45943.8 kg·hm-2；在海拔1900～2200 m的區(qū)域種植，4～5 a可采收。對(duì)3年生鮮假鱗莖進(jìn)行成分含量檢測(cè)，粗多糖含量7.85%、還原糖含量1.68%，比對(duì)照分別高出409.74%、127.03%。該優(yōu)良無(wú)性系通過(guò)組織培養(yǎng)繁育種苗，在普洱市鎮(zhèn)沅縣、景谷縣、思茅區(qū)進(jìn)行區(qū)域性種植試驗(yàn)，結(jié)果表明該優(yōu)良無(wú)性系在普洱市不同縣(區(qū))生長(zhǎng)良好，適應(yīng)性強(qiáng)，且能夠保持其優(yōu)良性狀的穩(wěn)定，適宜在普洱市推廣種植。

普洱市白及良種數(shù)量還較少，目前僅有良寶大白及1號(hào)[10]、‘普洱1號(hào)’[11]2個(gè)白及優(yōu)良品種，另有1個(gè)白及“玉霞”新品種[12]；白及良種推廣種植范圍較小，普通農(nóng)戶(hù)對(duì)白及良種的認(rèn)識(shí)和利用有限。普洱市林業(yè)科學(xué)研究所選育的‘普科1號(hào)’白及優(yōu)良無(wú)性系，能夠解決普洱市目前白及良種單一的問(wèn)題；下一步通過(guò)對(duì)現(xiàn)有白及優(yōu)良無(wú)性系進(jìn)行推廣與應(yīng)用，能夠讓種植戶(hù)對(duì)白及良種有進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，提高良種利用率，從而進(jìn)一步提高白及單位面積產(chǎn)量與品質(zhì)，為農(nóng)戶(hù)增產(chǎn)增收提供技術(shù)保障；同時(shí)也能夠促進(jìn)普洱市白及種植產(chǎn)業(yè)進(jìn)一步向良種化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)?；l(fā)展，為普洱市白及產(chǎn)業(yè)的發(fā)展做出積極貢獻(xiàn)。