朱珊， 田新磊， 趙文錦

(1.河南中醫(yī)藥大學(xué) 第二臨床醫(yī)學(xué)院， 河南 鄭州 450000； 2.河南省中醫(yī)院 兒科， 河南 鄭州 450000)

急性支氣管炎是兒科常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病之一，主要是由各種致病原所引起的氣管、支氣管黏膜感染，以咳嗽為主要臨床表現(xiàn)[1]，其基本病理機(jī)制為氣道的急性炎癥.現(xiàn)代研究認(rèn)為炎癥與氧化應(yīng)激反應(yīng)二者是相互依存的[2]，在炎癥的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中，白介素-1β(interleukin-1，IL-1β)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)等促炎因子，可促使吞噬細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等細(xì)胞活化產(chǎn)生大量的體內(nèi)活性氧(reactive oxygen species，ROS)，可殺滅各種病原體以減輕機(jī)體的炎癥反應(yīng)，然而一旦ROS產(chǎn)生過(guò)多，又可引起局部氧化應(yīng)激反應(yīng)甚至組織損傷，進(jìn)而激活各種與炎癥反應(yīng)有關(guān)的信號(hào)通路，誘導(dǎo)甚至促進(jìn)炎癥的發(fā)生.細(xì)胞核抗氧化因子(nuclear factor erythroid2-related factor 2，Nrf2)/血紅素加氧酶(heme oxygenase-1，HO-1)通路是已被證實(shí)的與機(jī)體器官的抗氧化應(yīng)激損傷有關(guān)的主要通路之一[3]，其下游產(chǎn)物HO-1與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)，可促進(jìn)IL-10(interleukin-10，IL-10)等抗炎因子的釋放，同時(shí)抑制IL-6、IL-1β等促炎因子的釋放，具有調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的作用，進(jìn)而發(fā)揮抗感染、抗氧化作用，是一種經(jīng)典的抗氧化劑.Nrf2能促進(jìn)HO-1的表達(dá)，降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平，阻止與急、慢性炎癥性疾病相關(guān)的巨噬細(xì)胞過(guò)度活化[4].

急性支氣管炎的西醫(yī)學(xué)治療主要以對(duì)癥處理為主，但是本病臨床具有反復(fù)性，容易引起機(jī)體免疫功能的紊亂，影響兒童的健康，故西醫(yī)學(xué)治療優(yōu)勢(shì)不明顯.中醫(yī)治病以“整體觀念”為指導(dǎo)，標(biāo)本兼治，不僅能緩解癥狀，而且能提高機(jī)體的免疫力，在治療本病時(shí)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì).我國(guó)著名兒科專家李晏齡教授根據(jù)小兒“陽(yáng)常有余”的體質(zhì)特點(diǎn)和“風(fēng)為百病之長(zhǎng)”的致病特點(diǎn)，認(rèn)為臨床上小兒咳嗽以風(fēng)熱型最為多見(jiàn)，故而創(chuàng)立了由黃芩、連翹、桑白皮、葶藶子、炙紫菀、茯苓、丹參、五味子、甘草等組成的清肺止咳方，其臨床療效顯著.本課題通過(guò)測(cè)定急性支氣管炎模型小鼠肺組織中Nfr2、HO-1蛋白表達(dá)水平及IL-1β、IL-6積分光密度值，基于抗氧化應(yīng)激角度，探討Nfr2/HO-1信號(hào)通路在急性支氣管炎中的病理機(jī)制；通過(guò)分析不同藥物對(duì)模型小鼠肺組織Nfr2、HO-1、IL-1β、IL-6的影響，評(píng)價(jià)清肺止咳方的療效，為該方的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù).

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康4周齡SPF級(jí)昆明種小鼠80只，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g，購(gòu)買于河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：0008476，實(shí)驗(yàn)經(jīng)河南省中醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn).

1.1.2 主要試劑與儀器

Nfr2試劑盒、HO-1試劑盒、IL-1β試劑盒、IL-6試劑盒均購(gòu)置于美國(guó)Santa Cruz 公司；SP9001試劑盒、DAB顯色試劑盒、BCA蛋白質(zhì)量濃度測(cè)定試劑盒(增強(qiáng)型)、RIPA組織細(xì)胞快速裂解液均購(gòu)置于北京索萊寶科技有限公司；β-actin (批號(hào)：CP10399) 購(gòu)自美國(guó)Abnova公司；凝膠成像系統(tǒng)(CSL-MDOCUV 1D型，通用實(shí)驗(yàn)科技有限公司)、顯微鏡(DM2500型，德國(guó)LEICA公司)、電泳儀(1658003型，美國(guó)Bio-Rad公司)、酶標(biāo)儀(RT-2100C型，上海攸茜實(shí)業(yè)有限公司)、石蠟切片機(jī)、包埋機(jī)、組織脫水機(jī)等均由河南省中醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室提供.

1.1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

清肺止咳方主要成分：黃芩、連翹、桑白皮、葶藶子、炙紫菀、茯苓、丹參、五味子、甘草等，由河南省中醫(yī)院藥劑科制備成藥液，每毫升藥液約含2 g生藥.

小兒清熱止咳口服液主要成分：麻黃、炒苦杏仁、石膏、甘草、黃芩、板藍(lán)根、北豆根等，由榮昌制藥(淄博)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z20143014.該藥處方收載于《中華人民共和國(guó)藥典》(2005版)，主要用于治療小兒外感、邪毒內(nèi)盛、發(fā)熱惡寒、咳嗽痰黃、氣促喘息、口干音啞、咽喉腫痛等，療效確切，應(yīng)用廣泛.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組與造模

將購(gòu)買的80只小鼠常規(guī)(室溫26 ℃,濕度55%)飼養(yǎng)3 d后，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表分為模型組64只和正常組16只(每組雌雄各半).根據(jù)《實(shí)用中醫(yī)證候動(dòng)物模型學(xué)》等相關(guān)文獻(xiàn)介紹，自制煙熏箱采用改良煙熏法(煙葉、刨花)刺激模型組小鼠制備急性支氣管炎模型(每次30 min，每日2次，共1周)[5]，正常組小鼠常規(guī)飼養(yǎng).造模結(jié)束后，隨機(jī)從兩組中各選4只小鼠，取其肺組織，進(jìn)行HE染色，檢測(cè)病理形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，鑒定模型制備成功與否.

1.2.2 再次分組及干預(yù)方法

模型制備完成后，將正常組小鼠12只常規(guī)飼養(yǎng).模型組60只小鼠隨機(jī)分為5組，即空白模型組，小兒清熱止咳口服液組,清肺止咳方低、中、高劑量治療組，每組12只，雌雄各半；所有小鼠每日進(jìn)行灌胃治療1次，共計(jì)1周.其中正常組、空白模型組小鼠給予生理鹽水灌胃(0.027 mL·g-1·d-1)；治療組予相應(yīng)藥物灌胃，清肺止咳方低、中、高劑量治療組予清肺止咳方灌胃(0.009 mL·g-1·d-1、0.018 mL·g-1·d-1、0.027 mL·g-1·d-1)，根據(jù)《中藥新藥研究指導(dǎo)原則》灌胃量分別為臨床用藥量的10、20、30倍；小兒清熱止咳口服液組灌胃量為0.009 mL·g-1·d-1.給藥期間由于灌胃不當(dāng)，空白模型組、清肺止咳方高劑量組小鼠各死亡1只.

1.2.3 標(biāo)本采集

灌胃治療1周后，將全部小鼠禁食12 h(自由飲水)，分別稱量體質(zhì)量后，頸椎脫臼處死小鼠.結(jié)扎小鼠主支氣管，分離取出雙側(cè)肺組織，將左側(cè)肺組織，置入4%多聚甲醛溶液中固定；另剪取右側(cè)肺組織，用無(wú)菌紗布包裹置于液氮中，轉(zhuǎn)移至-80 ℃冰箱中保存.

1.2.4 免疫組化法檢測(cè)肺組織IL-1β、IL-6積分光密度

具體操作按照免疫組化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行.將4%甲醛固定的肺組織，常規(guī)脫水進(jìn)行石蠟包埋，石蠟包埋后制備厚度4 μm切片，烤片，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫二甲苯，蒸餾水沖洗，PBS緩沖液沖洗后在3% H2O2溶液中浸泡，蒸餾水沖洗后放置于枸櫞酸鹽緩沖液中加熱至沸騰后冷卻至室溫，進(jìn)行抗原修復(fù)，冷卻沖洗后，加入封閉液，37 ℃反應(yīng)30 min，滴加相應(yīng)抗體(V抗體∶V抗體稀釋液=1∶100)，4 ℃過(guò)夜；再次沖洗后滴加生物素化山羊抗兔IgG，37 ℃反應(yīng)30 min，室溫下DAB顯色20 min后蒸餾水沖洗，復(fù)染，沖洗，脫水干燥，二甲苯透明，樹(shù)膠封片.在高倍視野下，細(xì)胞膜呈棕黃色著色為陽(yáng)性細(xì)胞，用Image pro plus v6.0圖像分析系統(tǒng)測(cè)定陽(yáng)性細(xì)胞積分光密度.

1.2.5 Western blot法檢測(cè)小鼠肺組織Nfr2、HO-1蛋白表達(dá)水平

剪取一小塊右側(cè)肺組織，置入RIPA裂解液中，充分混勻，超聲4次，每次10 s，然后放置冰上30 min，4 ℃、14 000 r/min離心15 min，然后收集上清液，提取總蛋白.根據(jù)BCA蛋白定量結(jié)果上樣，每泳道30 μg蛋白，進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，至溴酚藍(lán)標(biāo)記跑至膠底上方1 cm處；電泳后，30 V電壓過(guò)夜轉(zhuǎn)膜15 h，20%甲醇活化；PVDF膜置入0.05 g/mL脫脂奶粉溶液以最慢速度搖床封閉2 h，4 ℃過(guò)夜孵一抗(V一抗∶V一抗稀釋液=1∶2 000)；取出條帶，TBST洗6次，5 min/次，置入二抗+3%脫脂奶粉溶液，以最慢速度搖床，常溫2 h孵育二抗；曝光取出條帶，TBST洗6次,5 min/次，曝光顯影.采用BIO-RAD Image Lab軟件對(duì)蛋白表達(dá)進(jìn)行分析，蛋白表達(dá)水平為目的條帶與β-actin內(nèi)參條帶吸光度值的比值.

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 模型制備結(jié)果及鑒定

模型制備完成后，正常組小鼠反應(yīng)活潑，體質(zhì)量增加，毛色亮澤；模型組小鼠出現(xiàn)打噴嚏、咳嗽癥狀，伴有精神萎靡、扎堆、瞇眼、撓鼻、毛色暗淡、體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢或下降等.取各組小鼠肺組織制備病理切片，經(jīng)HE染色后于光鏡下進(jìn)行鑒定：正常組小鼠肺組織內(nèi)氣管、肺泡、肺間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常，上皮細(xì)胞正常；模型組小鼠氣管和支氣管黏膜明顯充血，間質(zhì)毛細(xì)血管擴(kuò)張，肺泡及纖毛上皮細(xì)胞細(xì)胞損傷、脫落，黏液腺體增生，黏膜下層可見(jiàn)中性及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，符合支氣管炎病理表現(xiàn)(圖1).結(jié)合模型組小鼠的臨床表現(xiàn)可判定模型制備成功.

A：正常組；B：模型組.A:The normal group;B:The model group.

2.2 不同藥物及濃度對(duì)小鼠肺組織IL-1β、IL-6積分光密度的影響

各組小鼠肺組織IL-1β、IL-6免疫組化切片結(jié)果判讀：高倍鏡下，細(xì)胞膜呈棕黃色的為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞越多，提示IL-1β、IL-6積分光密度越高.其中正常組與各治療組小鼠肺組織中的IL-1β、IL-6的積分光密度均低于模型組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；清肺止咳方低、中、高劑量組小鼠肺組織IL-1β、IL-6的積分光密度均低于小兒清熱止咳口服液組，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；清肺止咳方低、中、高劑量組組間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05，圖2).

a：各組小鼠肺組織IL-1β免疫組化染色結(jié)果(×400)；b：各組小鼠肺組織IL-1β積分光密度；c：各組小鼠肺組織IL-6免疫組化染色結(jié)果(×400)；d：各組小鼠肺組織IL-6積分光密度. A：正常組；B：空白模型組；C：小兒清熱止咳口服液組；D：清肺止咳方低劑量組；E清肺止咳方中劑量組；F清肺止咳方高劑量組.1)與空白模型組比較，P<0.05；2)與正常組比較，P<0.05；3)與小兒清熱止咳口服液組比較，P<0.05.

2.3 不同藥物及濃度對(duì)小鼠肺組織Nfr2、HO-1蛋白表達(dá)的影響

與模型組相比，正常組與各治療組小鼠肺組織中的Nfr2、HO-1的蛋白表達(dá)水平均升高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；清肺止咳方低、中、高劑量組小鼠肺組織Nfr2、HO-1的蛋白表達(dá)水平均高于小兒清熱止咳口服液組，且各組與小兒清熱止咳口服液組相比均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；清肺止咳方低、中、高劑量組之間相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05,圖3).

a：各組小鼠肺組織Nrf2、HO-1蛋白表達(dá)的Western blot結(jié)果；b：各組小鼠肺組織Nrf2蛋白相對(duì)表達(dá)水平；c：各組小鼠肺組織HO-1蛋白相對(duì)表達(dá)水平. A：正常組；B：空白模型組；C：小兒清熱止咳口服液組；D：清肺止咳方低劑量組；E清肺止咳方中劑量組；F清肺止咳方高劑量組.1)與空白模型組比較，P<0.05；2)與正常組比較，P<0.05；3)與小兒清熱止咳口服液組比較，P<0.05.

3 討論

急性支氣管炎的發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)[6].當(dāng)呼吸道黏膜受到炎癥刺激時(shí)，可產(chǎn)生大量的活性氧，過(guò)多的活性氧可破壞體內(nèi)的氧化還原平衡，誘發(fā)細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，引起黏膜細(xì)胞損傷甚至凋亡[7]，進(jìn)而導(dǎo)致急性支氣管炎、肺炎等呼吸道相關(guān)疾病的發(fā)生.Nrf2/HO-1信號(hào)通路不僅具有抗感染、抗氧化作用，而且還能調(diào)控細(xì)胞的凋亡、自噬，對(duì)抗和修復(fù)氧化應(yīng)激反應(yīng)引起的局部損傷，進(jìn)而防治呼吸系統(tǒng)相關(guān)疾病[8].其中Nrf2可以與氧化反應(yīng)元件蛋白結(jié)合，從而激活和上調(diào)抗氧化蛋白的表達(dá)，提高機(jī)體組織的抗氧化能力和氧自由基的清除能力，而且能下調(diào)機(jī)體組織對(duì)氧化應(yīng)激反應(yīng)的敏感性，進(jìn)而維持機(jī)體組織的正常生理功能.另一方面，它同時(shí)可以抑制組織釋放IL-1β、IL-6、金屬蛋白酶等促炎物質(zhì)[9]，因此，Nrf2是氧化應(yīng)激反應(yīng)過(guò)程中的重要調(diào)控因子之一.HO-1是一種經(jīng)典的抗氧化劑，它能夠催化血紅素的降解，通過(guò)降解血紅素促進(jìn)機(jī)體組織釋放IL-10等抗炎因子，不僅可以清除氧自由基，而且可上調(diào)、激活抗凋亡蛋白的表達(dá)，抑制氧化反應(yīng)，另一方面在降解過(guò)程中，能夠產(chǎn)生較多的CO，CO可以抑制IL-6、IL-1β等促炎因子的釋放[10]，進(jìn)而減輕炎癥反應(yīng).因此HO-1能夠抑制氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)，同時(shí)參與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展，具有調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的作用，與氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān).IL-6是診斷肺部感染炎癥的重要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之一，它可以激活炎癥反應(yīng)以及免疫反應(yīng)，參與宿主細(xì)胞的防御應(yīng)激反應(yīng)，加速疾病進(jìn)展，并且能夠維持免疫反應(yīng)，其作為促使各種炎癥發(fā)生的關(guān)鍵細(xì)胞因子，得到了目前臨床上的公認(rèn)[11].IL-6水平的下調(diào)，可以改善急性呼吸窘迫綜合征大鼠肺水腫及炎癥反應(yīng)[12].IL-1β屬于IL-1細(xì)胞因子家族，它可以通過(guò)誘導(dǎo)、參與表達(dá)ROS的中性粒細(xì)胞的活化，促使產(chǎn)生過(guò)量的ROS，從而損傷肺上皮細(xì)胞，加重炎癥反應(yīng)[13]，是炎癥反應(yīng)的一種重要介質(zhì).本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，正常組與各治療組小鼠肺組織中IL-1β、IL-6的積分光密度均低于模型組，其中以清肺止咳方治療組降低最為明顯；正常組與各治療組急性支氣管炎模型小鼠肺組織中Nfr2、HO-1的蛋白表達(dá)水平均高于模型組，以清肺止咳方治療組升高最為明顯，可以進(jìn)一步說(shuō)明在急性支氣管炎產(chǎn)生的病理環(huán)節(jié)中，IL-1β、IL-6具有明顯的促炎作用，而Nfr2、HO-1具有很好的抗炎作用.同時(shí)也表明清肺止咳方、小兒清熱止咳口服液均能有效治療急性支氣管炎模型小鼠，且清肺止咳方療效優(yōu)于小兒清熱止咳口服液.

急性支氣管炎可歸屬于中醫(yī)學(xué)“咳嗽”的范疇.《幼幼集成》曰：“……咳嗽屬脾肺者居多，以肺主氣，脾主痰故也.”指出咳嗽的主要病位在于肺、脾兩臟.《醫(yī)方集解·補(bǔ)養(yǎng)之劑第一》載“脾者，萬(wàn)物之母也，肺者，氣之母也，脾胃一虛，肺氣先絕”，因此“肺脾相關(guān)”理論對(duì)肺系疾病的診斷及治療有重要的指導(dǎo)意義[14].

我國(guó)著名兒科專家李晏齡教授根據(jù)小兒臟腑相對(duì)嬌嫩，藩籬稀疏不固，容易被外邪所侵襲，加之其“陽(yáng)常有余”的體質(zhì)特點(diǎn)，認(rèn)為小兒感邪最易化熱，然“風(fēng)為百病之長(zhǎng)”，故指出臨床上以風(fēng)熱型咳嗽最為多見(jiàn).基于此，創(chuàng)立了清肺止咳方，該方是由黃芩、連翹、桑白皮、葶藶子、炙紫菀、茯苓、丹參、五味子、甘草等組成.方中黃芩擅長(zhǎng)清泄肺火和上焦實(shí)熱，連翹既能疏散外感邪風(fēng)，又可解毒清熱，二藥合用，表里雙清共為君藥；桑白皮、葶藶子相須為用，功專瀉肺平喘，炙紫菀化痰止咳，茯苓善健脾滲濕，四者合用止咳平喘，健脾化痰，瀉貯痰之器，絕生痰之源，共為臣藥；丹參活血祛瘀，使血行氣生，五味子益氣生津斂肺，二者共為佐藥；甘草，益氣補(bǔ)脾，調(diào)和諸藥，為使藥.小兒清肺止咳方前期進(jìn)行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明其具有明顯的止咳、祛痰、抗感染的作用，可以調(diào)控Th1和Th2細(xì)胞亞群的平衡來(lái)抑制氣道炎癥，從而減少炎癥反應(yīng)的發(fā)生及致病因素對(duì)肺組織的損傷；前期臨床觀察表明，該方的臨床有效率為96.77%[15].

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，黃芩的主要有效成分中的黃酮類化合物，具有抗感染、抗氧化、提升機(jī)體免疫力等作用[16]；連翹的水提物連翹酯能夠上調(diào)細(xì)胞因子Nrf2的特異性表達(dá)，促進(jìn)其下游的抗氧化蛋白HO-1表達(dá)，進(jìn)而降低細(xì)胞內(nèi)ROS水平[17]；桑白皮的提取物具有抗感染、抗病毒、抗氧化、抗過(guò)敏及免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[18]；葶藶子中含有的槲皮素和β-谷甾醇等有效化合物可通過(guò)MAPK等靶標(biāo)蛋白而有效抑制支氣管及肺組織炎癥的產(chǎn)生，激活機(jī)體的免疫應(yīng)答系統(tǒng)，減少促炎介質(zhì)的釋放及黏液的生成，緩解氣道的阻塞癥狀[19]；紫菀中所含有的紫菀酮、紫菀皂苷等均具有很好的祛痰作用[20]；茯苓中所含的茯苓多糖能夠提升機(jī)體的免疫水平，改善機(jī)體因免疫力低下產(chǎn)生的諸多問(wèn)題[21]；丹參提取物中的丹參酮IIA可以上調(diào)HO-1的表達(dá)，減少機(jī)體產(chǎn)生ROS[22]；五味子中的五味子乙素能夠抑制炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，同時(shí)能抑制NF-κB通路的激活[23]；甘草中的甘草多糖能降低腺病毒、柯薩奇病毒等呼吸道常見(jiàn)病毒的吸附力，并能夠減弱病毒進(jìn)入細(xì)胞的能力，起到保護(hù)細(xì)胞的作用[24].

中藥具有減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)以及抑制氧化應(yīng)激等作用，這在中醫(yī)臨床應(yīng)用和藥效機(jī)制等不同層面均有大量的研究文獻(xiàn)支持.其中，Nfr2/HO-1信號(hào)通路是急性支氣管炎治療的一個(gè)靶點(diǎn).隨著現(xiàn)代社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人類的生活環(huán)境和生活習(xí)慣也發(fā)生了改變，兒科的疾病譜也隨之發(fā)生了改變，其中不典型病原體所引起的急性支氣管炎發(fā)病率也逐漸升高，西醫(yī)特異性藥物的研發(fā)需要較長(zhǎng)周期，而中醫(yī)學(xué)臨證強(qiáng)調(diào)“辨證論治”，辨病與辨證相結(jié)合，三因制宜，加之中藥材來(lái)源充足，服用方便，應(yīng)用優(yōu)勢(shì)明顯.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，清肺止咳方低、中、高劑量3組小鼠的肺組織中IL-1β、IL-6積分光密度及Nfr2、HO-1的蛋白表達(dá)水平之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明清肺止咳方在治療急性支氣管炎模型小鼠時(shí)不存在劑量依賴性.因此運(yùn)用中醫(yī)藥防治小兒咳嗽(急性支氣管炎)具有較大的優(yōu)勢(shì)和發(fā)展前景，同時(shí)運(yùn)用現(xiàn)代分子醫(yī)學(xué)理論及現(xiàn)代藥理學(xué)研究理論可闡明中醫(yī)藥的作用機(jī)制，這為其臨床應(yīng)用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù).本研究是以臨床療效為基礎(chǔ)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明該方治療急性支氣管炎的機(jī)制可能與通過(guò)Nfr2/HO-1信號(hào)通路調(diào)節(jié)炎癥因子水平有關(guān)，其更深入的作用機(jī)制有待進(jìn)一步探索.

作者貢獻(xiàn)聲明

朱珊：提出研究思路和框架，修改論文；田新磊：設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，撰寫論文；趙文錦：實(shí)驗(yàn)操作，統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù).

利益沖突聲明

本研究未受到企業(yè)、公司等第三方資助，不存在潛在利益沖突.