莫蘭健，黎 莉，趙學青，唐靜芝，李 瑩，寧 天，李日倫

（廣西衛(wèi)生職業(yè)技術學院，廣西 南寧 530023）

破格救心湯來源于《傷寒論》中的經方四逆湯[1]。在四逆湯的基礎上添加參附龍牡救逆湯和名醫(yī)張錫純的來復湯，即為破格救心湯。此方中重用附子回陽，并用山萸肉斂陰、麝香醒竅。四逆湯是傳統(tǒng)中醫(yī)常用的強心類方劑，在治療心力衰竭等重癥方面的效果顯著?！渡褶r本草經》中記載，附子有大毒。附子為破格救心湯中的君藥。此藥的毒性正是其“回陽”的藥效所在。在臨床上，經靜脈注射給藥起效的速度最快。本次研究對破格救心湯進行了溶血性試驗，以觀察將該方制成注射劑使用的安全性。為了驗證臨床應用破格救心湯的安全性，本次研究中對破格救心湯進行了急性毒性試驗。

1 試驗材料

昆明種小白鼠200 只，平均體重為（20±2.0）g，雌雄小鼠數量各半，購于廣西醫(yī)科大學實驗動物中心，合格證號為SCXK (桂):2009-0802。家兔1 只，購于東郊種兔場。制作破格救心湯的中藥材購于廣西康全藥業(yè)連鎖有限公司。

2 試驗方法

2.1 破格救心湯的體外溶血性試驗

制作5 組含附子生藥的破格救心湯藥液，作為受試藥液。A 組藥液中附子的含量為0.03 g/mL，煎煮0.5 h。B 組藥液中附子的含量為0.1 g/mL，煎煮0.5 h。C 組藥液中附子的含量為0.2 g/mL，煎煮0.5 h。D 組藥液中附子的含量為0.4 g/mL，煎煮1 h。E 組藥液中附子的含量為0.8 g/mL，煎煮2 h。將《中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則》作為理論指導，取家兔血液制作紅細胞懸液，對破格救心湯進行體外溶血性試驗。取家兔的靜脈血20 mL，用玻璃棒均勻攪拌血液10 min，先去除血液中的纖維蛋白原，制成脫纖血液[2]，再加入10 倍量的生理鹽水，搖勻，進行離心處理15 min（離心機的轉速為1300 轉/min），去除離心管中的上清液。用生理鹽水洗滌沉淀的紅細胞，洗滌2 ～3 次，直至上清液不再顯紅色為止。將得到的紅細胞加入到生理鹽水中配置成2% 的混懸液，備用。取7 支潔凈的試管。在各試管中分別加入2% 紅細胞混懸液、生理鹽水或蒸餾水、受試藥液（具體的添加方法見表1）?；靹蚝螅瑢⒃嚬苤糜跍囟葹椋?7±0.5）℃的恒溫水浴箱中，每隔15 min 觀察1 次試管中溶液的情況并記錄。1 h后，每隔l h 觀察1 次相關情況，連續(xù)觀察3 h。如果觀察到試管中溶液變得透明，表示溶液發(fā)生溶血。如果溶液分層，上清液無色、透明，下層溶液混濁，表示溶液未發(fā)生溶血。如果在溶液中觀察到絮狀沉淀物，表示有紅細胞凝聚反應。若在3 h 內溶液中不發(fā)生溶血或紅細胞凝聚反應，可判定該溶液能夠供靜脈注射用。如果該溶液出現紅細胞凝聚反應，可按免疫熒光檢測法確定紅細胞凝集反應的真實性。如果溶液中的凝集物不能搖散或在玻片上不能被沖散可判定溶液發(fā)生真凝集反應，表示該溶液不適合臨床靜脈注射使用。如果溶液中的凝集物在振蕩試管后能均勻分散或在顯微鏡下觀察到溶液中凝集的紅細胞被沖散（將凝集物放在載玻片上，在蓋玻片邊緣加2 滴生理鹽水）可判定溶液發(fā)生假凝集反應。

2.2 破格救心湯的急性毒性試驗

白鼠（雌雄小鼠各半數），隨機將其分為對照組、A 組、B 組、C 組、D 組及E 組。使小鼠禁食約14 h 后[4]，為A ～E 組小鼠分別使用附子生藥含量為0.03 g/mL、0.1 g/mL、0.2 g/mL、0.4 g/mL、0.8 g/mL 的受試藥液按0.4 mL/10 g 的最大給藥量進行灌胃給藥，每日給藥2 次，兩次給藥間隔的時間至少為8 h。為對照組小鼠使用等量的飲用水灌胃[5]。給藥后，將小鼠正常飼養(yǎng)于清潔實驗室中，清潔實驗室的平均室溫為（24±2）℃，室內相對濕度為45% ～60%。觀察小鼠的活動、皮毛、采食量、體重、排便等情況有無異常，并觀察小鼠有無中毒癥狀及死亡情況（若小鼠死亡，立即解剖并進行病理學檢查），連續(xù)觀察1 周。1 周后，處死小鼠并進行解剖，肉眼觀察其肝、心、脾、肺、腎、膀胱、性腺（子宮、卵巢或睪丸和附睪）、胃、大腸、小腸等，與對照組小鼠進行比較，分析其上述臟器是否出現異常變化。

2.2.1 預試驗 取60 只禁食時間在24 h 以上的健康小白鼠（雌雄小鼠各半數），隨機將其分為對照組、A 組、B 組、C 組、D 組及E 組[3]。為A ～E組小鼠分別使用附子生藥含量為0.03 g/mL、0.1 g/mL、0.2 g/mL、0.4 g/mL、0.8 g/mL 的受試藥液，按0.4 mL/10 g 的最大給藥量進行灌胃給藥。為對照組小鼠使用等量的飲用水灌胃。1 周后，給藥組小鼠與對照組小鼠均未死亡，無法按正常規(guī)律測定出半致死量，故繼續(xù)進行最大給藥量的測定試驗。

2.2.2 最大給藥量測定試驗 選擇120 只健康小

2.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計軟件處理本次研究中的所有數據。計量資料用±s表示，用t檢驗。計數資料用% 表示，采用χ2 檢驗，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結果

3.1 對破格救心湯進行體外溶血性試驗的結果

將各試管放置3 h，第1 ～第6 支試管進行溶血性試驗的結果均呈陰性，第7 支試管進行溶血性試驗的結果呈陽性。詳見表1。

表1 對破格救心湯進行體外溶血性試驗的結果（mL）

3.2 對破格救心湯進行急性毒性試驗的結果

用受試藥液灌胃后，大多數小鼠的活動量增多。用受試藥液灌胃后2 h 內，小鼠的進食量減少，排便排尿無異常，部分小鼠在進食前會先喝水。灌胃后3 h，小鼠的活動、進食量等逐漸恢復正常。此后連續(xù)觀察7 d，小鼠的活動、皮毛、排便情況均正常。用受試藥液灌胃后，除D 組小鼠的進食量在第7 天有明顯變化外，其余各組小鼠的進食量與對照組小鼠相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），詳見表2。用受試藥液灌胃后，各組小鼠的體重與對照組小鼠相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），詳見表3。6 組小鼠均未死亡，詳見表4。試驗結束后，對處死的小鼠進行解剖，其肝、心、脾、肺、腎、膀胱、性腺( 子宮、卵巢或睪丸和附睪)、 胃、大腸、小腸等臟器均未發(fā)生明顯的異常改變。

表2 用受試藥液灌胃前后小鼠進食量的比較（g，± s）

表2 用受試藥液灌胃前后小鼠進食量的比較（g，± s）

注：*表示與對照組小鼠相比，P ＜0.05；#表示與對照組小鼠相比，P ＞0.05。

組名給藥前給藥后第1 天第3 天第5 天第7 天對照組 5.6±0.08 5.3±0.07 5.6±0.09 5.8±0.08 6.3±0.09 A 組 5.3±0.07# 5.1±0.08# 5.3±0.07# 5.7±0.07# 5.9±0.08#B 組 5.5±0.08# 5.2±0.07# 5.5±0.09# 5.9±0.08# 6.0±0.07#C 組 5.2±0.07# 5.0±0.08# 5.2±0.07# 5.4±0.07# 5.9±0.08#D 組 5.7±0.06# 5.5±0.08# 5.7±0.07# 5.9±0.07# 7.5±0.08*E 組 5.2±0.07# 5.0±0.08# 5.2±0.07# 5.7±0.07# 6.0±0.08#

表3 用受試藥液灌胃前后小鼠體重的比較（g，± s）

表3 用受試藥液灌胃前后小鼠體重的比較（g，± s）

注：# 表示與對照組小鼠相比，P ＞0.05。

組名給藥前給藥后第一天第三天第五天第七天對照組 19.0±0.82 19.6±1.01 22.8±1.45 25.7±2.10 27.7±2.42 A 組 19.3±0.85# 19.8±0.93# 23.2±1.82# 26.3±1.89# 28.3±2.61#B 組 19.2±0.86# 19.8±1.01# 22.9±1.60# 25.7±2.21# 28.0±2.75#C 組 19.1±0.66# 19.7±0.75# 22.4±1.49# 24.9±2.39# 26.9±3.17#D 組 19.5±0.64# 20.1±0.71# 23.5±1.78# 26.4±2.61# 29.0±3.44#E 組 19.0±0.69# 19.5±0.83# 22.1±1.19# 25.5±1.81# 27.3±2.28#

表4 用受試藥液灌胃后小鼠的存活情況（只）

3 討論

本研究中對破格救心湯進行體外溶血性試驗的結果顯示，附子生藥含量為0.03 g/mL、0.1 g/mL、0.2 g/mL、0.4 g/mL、0.8 g/mL 的破格救心湯制成的注射劑安全性均較高，可供臨床靜脈注射使用。破格救心湯可用于治療心力衰竭等急危重癥。煎煮中藥湯劑費時過長，在用其治療急癥時難免緩不濟急，貽誤病機。如果能把中藥湯劑改為注射劑，對患者進行靜脈給藥，在臨床搶救領域必將取得重大突破。對本研究中表2、表3 的數據進行分析可知，給藥組小鼠與對照組小鼠的一般情況相比較，無明顯差異。對表4 中的數據進行分析可知，給藥組與對照組中均無小鼠死亡。一般認為，按體重計算，小鼠每日最大的給藥量相當于成人臨床日給藥量的100 倍以上是較為安全的[6]。為小鼠每日使用破格救心湯藥液的劑量若為16 g/kg，不會使其發(fā)生中毒。若進一步增加該藥液的用量，小鼠可能會發(fā)生毒性反應。在臨床上，為了應對患者可能發(fā)生的附子中毒情況，中醫(yī)師要嚴格把控破格救心湯的用量，并隨時準備好解毒藥品。

本次研究中，經體外溶血性試驗證實，破格救心湯對家兔的血紅細胞無體外溶血和凝集反應，將該方制成注射劑使用的安全性較高。經急性毒性試驗證實，破格救心湯是較安全的方劑，不會導致小鼠死亡或發(fā)生內臟病變。