張凱歌 ， 王夢瑤 ， 張冰雨 ， 楊玉榮 ， 姜義寶

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 ， 河南 鄭州 450000)

綿羊黃脂病是以綿羊脂肪組織呈現(xiàn)黃色為特征的一種色素沉積性疾病，主要是屠宰時發(fā)現(xiàn)皮下脂肪變黃，影響肉品質(zhì)量和銷售[1-2]。黃脂病的發(fā)病原因主要包括：飼料中含有色素含量高的原料，如含葉黃素的植物、胡蘿卜和南瓜等；飼料添加劑配方或生產(chǎn)工藝不合理，動物攝入較高的銅元素，缺少維生素E，食入過多的不飽和脂肪酸；錐蟲病、焦蟲病、附紅細(xì)胞體或鉤端螺旋體等病原侵入機體，引起紅細(xì)胞大量溶血；食入肝毒素植物、藥物或霉變飼料，影響肝臟功能；遺傳性因素，如缺少葉黃素氧化酶；其他影響紅細(xì)胞代謝的因素等[3-5]。近年來，隨著肉羊產(chǎn)業(yè)的現(xiàn)代化發(fā)展，高密度、集約化的飼養(yǎng)模式，銅元素常作為添加劑使用在飼料中，黃脂病的發(fā)生率逐年上升，綿羊一旦發(fā)生銅中毒，將給養(yǎng)殖戶帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟損失。已有關(guān)于黃脂病方面的研究報道，但關(guān)于綿羊因銅中毒而引起黃脂病的病理學(xué)變化鮮有報道。本試驗對近期收診的河南和山東某肉羊養(yǎng)殖場的黃脂病綿羊病例進行了病因診斷，并觀察分析其病理變化，推測其發(fā)生機制，揭示綿羊慢性銅中毒的病理特征，目的是為該病的臨床診斷和綜合防治提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 2017年冬—2019年春，河南省、山東省、山西省和內(nèi)蒙古等地，多家集約化綿羊養(yǎng)殖場育肥羊發(fā)生黃脂病，河南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)病理實驗室收診并分析河南洛陽和山東菏澤發(fā)生黃脂病的病死綿羊標(biāo)本，共6例。黃脂病標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)：患羊尿液呈暗紅色，剖檢病變?yōu)橹军S染。因黃脂病影響羊肉市場銷售，需查明其發(fā)病原因。

1.2 試驗方法 對送檢綿羊進行病理剖檢，記錄眼觀病變，分別采取心臟、肝臟、膽囊、脾臟、肺臟、腎臟、小腸及部分淋巴結(jié)，置10%福爾馬林溶液固定。固定的綿羊病理組織，經(jīng)石蠟切片、H.E.染色置Olympus BX43顯微鏡下觀察。血液和新鮮肺臟、淋巴結(jié)進行涂片鏡檢，觀察是否存在弓形蟲、附紅細(xì)胞體、焦蟲等病原的感染。采取新鮮的綿羊血液、肝臟、腎臟，以及送檢病例養(yǎng)殖場的飼料，應(yīng)用原子吸收法檢測其銅元素的含量。

2 結(jié)果

2.1 臨床發(fā)病和病理剖檢情況 臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)，因黃脂病死亡的綿羊約占羊場養(yǎng)羊總數(shù)量的2%～3%，發(fā)病羊為群體中營養(yǎng)狀態(tài)佳的個體，體溫、脈搏、呼吸未見明顯異常，臨床表現(xiàn)為行動遲緩，無神，可視黏膜蒼白、有的黃染，喜俯臥站立虛弱，走路搖晃，尿液呈暗紅色，病程久者轉(zhuǎn)為黑褐色，抗生素治療未見明顯效果，1～2周死亡。

多數(shù)患羊無明顯臨床癥狀，僅在屠宰時發(fā)現(xiàn)全身脂肪黃染，約占屠宰羊的5%，表現(xiàn)為皮下脂肪、腸系膜脂肪、腎脂肪和心臟冠狀脂肪均呈現(xiàn)黃色，脂肪黃染顏色過夜后消退至灰白色；肌肉淡黃色；腎臟腫大呈紅褐色至藍黑色，切片外翻、腎皮質(zhì)、腎髓質(zhì)和腎盂呈現(xiàn)均勻的紫黑色，切面結(jié)構(gòu)模糊，質(zhì)軟(圖1A)；肝臟輕度腫大、質(zhì)軟，呈灰黃色，切面結(jié)構(gòu)模糊，有小米粒樣膿腫灶；膽囊高度腫大，體積超過肝右葉的體積(圖1D)，充盈多量膽汁，膽汁濃稠，呈深綠色；膀胱內(nèi)尿液呈現(xiàn)紫黑色；心臟質(zhì)軟，蒼白色；淋巴結(jié)腫脹；脾臟無明顯異常變化。

圖1 綿羊慢性銅中毒病理學(xué)變化Fig.1 Pathological changes in sheep with chronic copper toxicosisA：腎臟； B：腎小管含大量血紅蛋白(箭頭)(H.E.染色)； C：腎小管和小動脈有大量血紅素沉積(箭頭)(H.E.染色)； D：肝臟及膽囊； E：肝臟膿腫(三角)，肝小葉周邊淋巴細(xì)胞浸潤(箭頭)(H.E.染色)； F：肝細(xì)胞沉著膽色素(箭頭)、細(xì)菌團塊(三角)(H.E.染色)。標(biāo)尺=50 μmA:Kidney; B:Renal tubules contained large amount of hemoglobin (Arrow) (H.E.staining); C:Large protoheme was deposited in renal tubules and arterioles (Arrow) (H.E.staining); D:Liver and gall bladder; E:Liver abscess (Triangle),lymphocyte infiltration around hepatic lobule (Arrow) (H.E.staining); F:Bile pigment was deposited in hepatocytes (Arrow),bacterial clumps (Triangle) (H.E.staining). Bar=50 μm

2.2 涂片及病理組織學(xué)變化 顯微鏡下，綿羊主要表現(xiàn)為肝臟和腎臟的損傷和血紅素、膽色素的沉積，伴有小的膿腫病灶。血液、肺臟、淋巴結(jié)組織涂片鏡檢，未見弓形蟲、附紅細(xì)胞體、焦蟲等病原微生物。其他器官未見明顯病理變化。

腎臟的主要病理變化表現(xiàn)為嚴(yán)重的腎小管壞死和管型(圖1B)。腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)含大量褐色細(xì)顆粒樣物質(zhì)，發(fā)生明顯的透明變性、有的腎小管上皮細(xì)胞溶解，腎小管管腔出現(xiàn)透明、均質(zhì)、淡粉色的血紅蛋白管型，遠端腎小管充滿橙紅色、折光顆粒物質(zhì)，表現(xiàn)為典型的血紅素管型(圖1C)。間質(zhì)少量淋巴細(xì)胞浸潤。腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞增生，部分腎小囊囊腔有少量蛋白樣物質(zhì)滲出。

肝小葉結(jié)構(gòu)不清，靠近中央靜脈的肝細(xì)胞呈局灶性壞死(圖1E)，竇狀隙水腫、變寬，少量淋巴細(xì)胞浸潤，肝細(xì)胞索斷裂、排列紊亂，匯管區(qū)小膽管增生，淋巴細(xì)胞浸潤，少量成纖維細(xì)胞增生。多量肝細(xì)胞腫大、界限模糊，表現(xiàn)有程度不同的水泡變性和細(xì)胞溶解，大量膽色素和含鐵血黃素沉著于肝細(xì)胞內(nèi)或竇狀隙內(nèi)。此外，肝組織中可見多個微小的局灶性膿腫灶，直徑30～50 μm，還可見細(xì)菌團塊(圖1F)。

2.3 綿羊組織和飼料銅元素的含量 血液、肝臟、腎臟及飼料中銅元素含量檢測結(jié)果見表1。綿羊血液、肝臟、腎臟和5%預(yù)混料中銅元素含量均高于正常水平，其中血液銅含量約為參考值的100倍，肝臟銅含量約為參考值的2倍，腎臟銅含量約為參考值的6倍，5%的預(yù)混料銅含量約為參考值的10倍。精飼料的銅含量處在參考值范圍。

表1 綿羊血液、組織和飼料中銅元素含量Table 1 The content of copper in blood,tissue and feed of sheep

3 討論

本試驗的綿羊黃脂病病例，從綿羊組織、血液和預(yù)混料中檢出較高含量的銅元素，結(jié)合病理學(xué)特征發(fā)現(xiàn)腎呈現(xiàn)均勻黑色；膽囊極度腫大，充盈多量膽汁；肝臟和腎臟沉著大量血紅蛋白和膽色素，送檢綿羊診斷為慢性酮中毒而引起的黃脂病。

銅是所有細(xì)胞都需要的一種重要的微量元素，正常時，銅與銅藍蛋白結(jié)合并貯存在肝細(xì)胞溶酶體中[6]。銅中毒是一種常見的中毒性疾病，見于多種動物，多由于飼料銅污染或攝食含銅制劑，或拮抗銅生物利用度的鉬攝入不足而引起[7]。需嚴(yán)格控制家畜使用銅的含量，如稍有過量即會中毒，威脅生命。銅中毒時，常因肝內(nèi)漸進性銅蓄積而引起細(xì)胞損害，綿羊因很難調(diào)控銅貯存，因此比其他動物更敏感[8-10]。

本試驗發(fā)現(xiàn)，綿羊慢性銅中毒時黏膜、脂肪中出現(xiàn)大量的黃疸，肝臟、腎臟的病變明顯，其病理特征是肝細(xì)胞變性、壞死，枯否氏細(xì)胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬含鐵血黃素，并伴有膽色素蓄積，膽囊充盈腫大，這與報道的結(jié)果一致[9-10]。肝臟的病理變化可能是當(dāng)攝入的銅含量超過肝臟的代謝能力，銅釋放入血。銅能與紅細(xì)胞膜的巰基結(jié)合減少紅細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量，產(chǎn)生活性氧并抑制還原性輔酶Ⅱ的活性，引起紅細(xì)胞膜損傷，降低紅細(xì)胞可變形性、增加膜滲透性，引起血管內(nèi)溶血性貧血，血清中的血紅蛋白濃度增加[11]。血紅蛋白分解為膽紅素和膽綠素，形成膽汁。產(chǎn)生的自由基還損害脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸，誘發(fā)炎癥，引起肝細(xì)胞損傷[12-15]。

腎臟表現(xiàn)為腎小管壞死和管型，血紅蛋白尿性腎病，這與已有研究報道一致[4,15]。腎臟的病理變化可能是紅細(xì)胞溶血后，產(chǎn)生多量不能吸收或排泄的血紅蛋白，血紅蛋白與觸珠蛋白載體結(jié)合而進行運輸，一部分血紅蛋白進入腎小球過濾，但體積大，不能通過腎小球。血紅蛋白在載體消耗完后游離于血漿中，隨尿排出，增加了腎小管管腔內(nèi)原尿的濃度，從而導(dǎo)致血紅蛋白尿性腎病。血紅蛋白本身對腎臟沒有傷害，然而，當(dāng)腎小球濾液中含有高濃度的血紅蛋白時，由于紅細(xì)胞大量破壞，腎發(fā)生嚴(yán)重的貧血，會促進腎小管壞死，嚴(yán)重可導(dǎo)致腎功能衰竭[5,16]。但目前，研究者對綿羊肝臟、腎臟富集銅，脂肪黃染的機制仍不清楚，可能與肝臟代謝、紅細(xì)胞代謝、膽汁和尿液的生成與排泄有關(guān)。

過量的銅可誘發(fā)人體嘔吐、肝功能衰竭、腎功能衰竭、血尿、胃腸道出血、貧血、溶血、循環(huán)休克和死亡[17]。黃脂病患羊的肝臟、腎臟中銅含量分別為247 mg/(kg·bw)和35 mg/(kg·bw)，遠遠超過GB15199—94《食品中銅限量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》食品中銅的含量[≤10 mg/(kg·bw)]，這種綿羊副產(chǎn)品對人類健康是有害的，因此臨床防治慢性綿羊酮中毒病例的發(fā)生有利于動物福利及人類食品安全。

臨床早期的綿羊黃脂病不易診斷，需要借助病理剖檢技術(shù)結(jié)合病理組織學(xué)診斷。本試驗只對綿羊黃脂病的發(fā)病原因和病理組織學(xué)結(jié)構(gòu)進行了初步了解，關(guān)于其形成過程和防控措施還需要進一步研究。此外，鉬可抑制銅的吸收，綿羊?qū)︺~敏感是否與鉬的吸收障礙有關(guān)，尚需進一步研究。