李偉 尚宏清 王冰濤

乳腺癌是一種分子異質(zhì)性腫瘤，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，由多種基因?qū)е拢?］。乳腺癌的發(fā)病率在我國青年女性群體中逐年上升，給防治帶來一定程度的影響，研究乳腺癌的發(fā)病機(jī)制對于早期防治具有積極的意義［2］。長鏈脂酰輔酶A 合成酶4（acyl-coa synthetase long-chain family member 4，Acsl4）是脂肪酸代謝的關(guān)鍵酶，能夠引發(fā)細(xì)胞凋亡［3］。拓?fù)洚悩?gòu)酶α（TopioisomeraseⅡα，TopoⅡα）是由TOPⅡ基因進(jìn)行編碼的DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶，參與DNA 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的重要進(jìn)程，其蛋白的過量表達(dá)能夠反應(yīng)細(xì)胞的增殖［4］。研究［5］表明，在乳腺癌患者體內(nèi)存在TopoⅡα 異常表達(dá)的情況，本研究檢測乳腺癌患者體內(nèi)Acsl4、TopoⅡα 的表達(dá)情況，并分析其與與乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系，現(xiàn)將報(bào)道如下。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

收集本院2019年4月至2021年5月期間行乳腺癌改良根治術(shù)患者的病理標(biāo)本126 例作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理標(biāo)本、免疫組化結(jié)果、臨床資料均完整無缺失；②均符合《中國臨床腫瘤學(xué)會(huì)乳腺癌診療指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)［6］，確診為浸潤性小葉癌及浸潤性導(dǎo)管癌；③患者術(shù)前未接受過相關(guān)放化療或新輔助放化療；④治療前無乳腺癌發(fā)病史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤患者；②合并癌細(xì)胞遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及炎性乳腺癌患者；③具有明確的遺傳性乳腺癌家族史，為高危乳腺癌并發(fā)者；④術(shù)前行過放化療及內(nèi)分泌、分子靶向治療。觀察組平均年齡（46.23±10.79）歲，其中未絕經(jīng)56 例，絕經(jīng)70 例；TNM 分期［7］為Ⅰ～Ⅱ期69 例，Ⅲ～Ⅳ期57 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52 例，未轉(zhuǎn)移74 例；腫瘤直徑＜2 cm 36 例，腫瘤直徑2～5 cm 50 例，腫瘤直徑≥5 cm 40 例；病理分級高分化42 例，中分化54 例，低分化30 例；HER2 陰性37 例，HER2 陽性89 例；PR 陰性86 例，PR 陽性40 例；ER 陰性87 例，ER 陽性41 例。另取同期因良性病變手術(shù)切除的乳腺組織標(biāo)本42 例作為對照組，對照組平均年齡（47.11±10.75）歲。兩組患者均為女性，年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究所有患者均簽訂了知情同意書，且本研究經(jīng)過本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 試劑與方法

兔抗人Acsl4 單克隆抗體、鼠抗人TopoⅡα 單克隆抗體均購于上海夢澤生物科技有限公司，稀釋比例均為1∶100。所有病理標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，5 μm 連續(xù)切片后，采用免疫組織化學(xué)法檢測Acsl4 和TopoⅡα 表達(dá)情況，具體操作按照免疫組化試劑盒說明書進(jìn)行，分別加入一抗、二抗，DAB 顯色、蘇木精復(fù)染后，由已知Acsl4、TopoⅡα 陽性切片作為陽性對照，PBS 代替一抗作為陰性對照，進(jìn)行光鏡下觀察。所有切片均由本院2 位資深病理醫(yī)師雙盲閱片得出結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

Acsl4、TopoⅡα 的染色結(jié)果判定［8-9］：Acsl4 以胞質(zhì)、胞膜含有棕黃色顆粒的腫瘤細(xì)胞計(jì)為陽性細(xì)胞，根據(jù)染色程度不著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別為0 分、1 分、2 分、3 分。根據(jù)陽性細(xì)胞范圍無陽性細(xì)胞、陽性細(xì)胞1%～10%、10%～50%、50%～80%、80%～100%分別為0 分、1 分、2 分、3 分、4 分。兩項(xiàng)的乘積即為Acsl4 的染色積分，按其評分，0～4分為陰性，5～12 分為陽性。TopoⅡα 以細(xì)胞核含有棕黃色顆粒的腫瘤細(xì)胞計(jì)為陽性細(xì)胞，根據(jù)染色程度不著色、淡黃色、棕黃色、棕褐色分別為0 分、1 分、2 分、3 分。根據(jù)陽性細(xì)胞范圍陽性細(xì)胞≤10%、10%～29%、30%～49%、≥50%分別為0 分、1 分、2 分、3 分。兩項(xiàng)的乘積即為TopoⅡα 的染色積分，按其評分0～3 分為陰性，4～9 分為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 22.0 軟件行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料用n（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；正態(tài)分布的計(jì)量資料用（）表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Acsl4、TopoⅡα 的表達(dá)比較

觀察組的Acsl4、TopoⅡα兩者陽性表達(dá)率顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖1、表1。

表1 兩組Acsl4、TopoⅡα 的表達(dá)［n（%）］Table 1 Expression of Acsl4，TopoⅡα in both groups［n（%）］

圖1 染色結(jié)果（蘇木精染色，×200）Figure 1 staining results(Hematoxyli compound staining，×200)

2.2 HER2、PR、ER 中Acsl4、TopoⅡα 的表達(dá)

HER2 陽性的Acsl4、TopoⅡα 陽性表達(dá)均高于HER2 陰性，而PR、ER 陰性的Acsl4、TopoⅡα 陽性表達(dá)均高于PR、ER 陽性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 HER2、PR、ER 中Acsl4、TopoⅡα 的表達(dá)［n（%）］Table 2 Expression of Acsl4，TopoⅡα in HER2，PR，ER［n（%）］

2.3 Acsl4、TopoⅡα 表達(dá)與臨床病理的關(guān)系

高分化腫瘤的Acsl4、TopoⅡα 陽性表達(dá)高于中分化、低分化；TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期的Acsl4、TopoⅡα 陽性表達(dá)高于Ⅰ～Ⅱ期；腫瘤直徑＞5 cm的Acsl4、TopoⅡα 陽性表達(dá)高于腫瘤直徑＜2cm、腫瘤直徑2～5 cm；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Acsl4、TopoⅡα陽性表達(dá)高于未轉(zhuǎn)移，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Acsl4、TopoⅡα 表達(dá)與年齡、是否絕經(jīng)無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表3 Acsl4、TopoⅡα 表達(dá)與臨床病理的關(guān)系［n（%）］Table 3 Relationship between Acsl4，TopoⅡα expression and clinicopathology［n（%）］

3 討論

相關(guān)研究［10］表明，脂肪酸代謝是參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的重要過程，而Acsl4 是脂肪酸代謝過程的關(guān)鍵蛋白，可以活化不飽和長鏈脂肪酸，參與合成膜磷脂并且引發(fā)細(xì)胞鐵死亡，而誘導(dǎo)鐵死亡又可有效殺死癌細(xì)胞［11］，同時(shí)，Acsl4 還能促進(jìn)細(xì)胞不受控制地?zé)o限生長增殖，導(dǎo)致腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移［12］，因此，可知Acsl4 在細(xì)胞死亡方面有雙重作用，既能引發(fā)細(xì)胞鐵死亡，又能促進(jìn)細(xì)胞逃離程序性死亡、發(fā)展為癌細(xì)胞。TopoⅡ又稱旋轉(zhuǎn)酶，有兩種α、β 同工酶之分［13］。TopoⅡα 能夠DNA 的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄進(jìn)程，具有細(xì)胞周期特異性，在細(xì)胞周期前期TopoII α 含量快速上升，而在有絲分裂后下降，TopoⅡα 蛋白陽性提示腫瘤細(xì)胞處于增殖狀態(tài)，可反映腫瘤細(xì)胞的增殖活性［14］。研究［15］指出，Acsl4 與TopoⅡα 都能夠作為腫瘤的生物標(biāo)志物，提示腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。

本研究結(jié)果提示Acsl4、TopoⅡα 的異常表達(dá)能夠在一定程度上反應(yīng)乳腺癌的病情發(fā)展。Acsl4、TopoⅡα 在癌癥組織學(xué)分級較高的組織中的表達(dá)陽性率高于分級較低的，提示Acsl4、TopoⅡα 可能在參與乳腺癌細(xì)胞的分化進(jìn)程中具有重要作用，并且其陽性表達(dá)與乳腺癌的惡性程度相關(guān)。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者體內(nèi)，Acsl4、Topo 陽性表達(dá)率高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，提示作為反映腫瘤細(xì)胞增殖活性重要指標(biāo)的Acsl4、TopoⅡα 與乳腺癌轉(zhuǎn)移情況有關(guān)。且相關(guān)研究［16］指出，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目是常規(guī)用于評價(jià)浸潤性乳腺癌預(yù)后的重要的因素，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組數(shù)越多，乳腺癌分期越晚，其預(yù)后越差。同時(shí)，相關(guān)研究還指出，腫瘤細(xì)胞增殖、分裂活動(dòng)較正常細(xì)胞活躍，核分裂相增多，因此腫瘤大小與TNM 分期相關(guān)，腫瘤分化程度越差，腫瘤體積越大［17］。研究結(jié)果提示TopoⅡα 是調(diào)控細(xì)胞增殖的重要靶基因，而Acsl4 能夠促進(jìn)細(xì)胞無限生長。

HER2 又叫人體表皮生長因子-2，是一種能夠激活酶活性，實(shí)現(xiàn)跨膜轉(zhuǎn)移的糖蛋白，也是乳腺癌重要的原癌基因之一。癌基因HER2 的表達(dá)能夠反彈腫瘤的激活狀態(tài)，在乳腺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中起重要的作用，其陽性表達(dá)的患者預(yù)后較差，腫瘤增殖和侵襲活性較強(qiáng)。有研究［18］指出，TopoⅡα 基因與HER2 能夠共表達(dá)，其位于HER2 基因的下游片段，當(dāng)HER2 基因過度表達(dá)時(shí)，可通過多種途徑參與跨膜信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而實(shí)現(xiàn)TopoⅡα 基因的增強(qiáng)表達(dá)，因此，HER2 陽性表達(dá)患者體內(nèi)的TopoⅡα 表達(dá)水平較高，與本研究結(jié)果具有一致性。

近來有研究［19］表明，雌激素受體ER 是參與乳腺癌細(xì)胞Acsl4 啟動(dòng)子高活性的轉(zhuǎn)錄因子，ER 的表達(dá)狀態(tài)是能夠調(diào)節(jié)Acsl4 表達(dá)，同時(shí)PR 是ER 活化的產(chǎn)物之一，兩者的表達(dá)呈正相關(guān)［20］，ACSL4 的狀態(tài)能預(yù)測乳腺癌細(xì)胞的激素受體狀態(tài)，而下調(diào)ACSL4 的表達(dá)可以誘導(dǎo)ACSL4 陽性細(xì)胞系中ER的表達(dá)，與本研究結(jié)果中PR 陰性、ER 陰性患者體內(nèi)ACSL4 陽性表達(dá)率高于PR 陽性、ER 陽性患者具有一致性。

綜上所述，Acsl4、TopoⅡα 在乳腺癌組織中存在異常表達(dá)，兩者的陽性表達(dá)與乳腺癌患者組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤直徑、及ER 陰性、PR 陰性、HER2 陽性的表達(dá)密切相關(guān)。由于乳腺癌是一個(gè)多基因疾病，故Acsl4、TopoⅡα 在乳腺癌中的作用機(jī)制還需進(jìn)一步闡明。