張淑娟, 牛 錚，闞子斐，張依玲，徐沙沙，鄒 宏，張靜怡，宋振輝，2

(1. 西南大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，重慶 榮昌 402460 ； 2.西南大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院免疫學(xué)研究中心，重慶 榮昌 402460)

豬流行性腹瀉易感宿主為各個(gè)年齡段的豬，癥狀的輕重隨年齡的大小而有所不同，其中以新生仔豬最為嚴(yán)重[1]。最近幾年，豬消化道疾病中豬流行性腹瀉發(fā)病率、死亡率明顯提高,流行特點(diǎn)和發(fā)病癥狀也發(fā)生了一定的改變。豬流行性腹瀉病毒傳播途徑主要是直接、間接接觸和氣溶膠傳播[2]。豬感染后，病毒主要是在小腸黏膜上皮細(xì)胞中復(fù)制。由于病毒增殖首先造成機(jī)體小腸上皮細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)被破壞,繼而出現(xiàn)細(xì)胞功能障礙。腸絨毛出現(xiàn)萎縮、脫落、空泡化，造成了腸壁變薄，吸收表面積減少，同時(shí)干擾腸道菌群(GM)的平衡，降低益生菌的數(shù)量，從而使小腸吸收消化功能降低；另外，腸黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)的堿性磷酸酶(ALP)、氨基肽酶(APs)等活性降低或者缺乏，導(dǎo)致腸腔無(wú)法將小分子物質(zhì)進(jìn)一步分解、吸收，致使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)吸收障礙，腸腔內(nèi)的膠體滲透壓升高，同時(shí)，因?yàn)锳TP酶含量顯著減少，腸上皮細(xì)胞內(nèi)鈉泵機(jī)制失活，從而引發(fā)仔豬Na+失衡性腹瀉，嚴(yán)重時(shí)脫水甚至死亡-這是導(dǎo)致病豬死亡的主要原因[3]。豬流行性腹瀉發(fā)病日齡低、發(fā)病急且死亡率高，患病仔豬不能及時(shí)產(chǎn)生主動(dòng)免疫，所以免疫接種是預(yù)防該病的主要手段。2010年以來(lái)，Kim等發(fā)現(xiàn)全球開(kāi)始出現(xiàn)豬流行性腹瀉病毒變異體[4]，導(dǎo)致其傳統(tǒng)疫苗在很大程度上失去了保護(hù)作用,因此更加迫切需要有效地措施預(yù)防該病。在畜牧業(yè)中，常將益生菌代替抗生素作為飼料添加劑預(yù)防傳染病的發(fā)生，其中部分益生菌有較明顯的抗豬流行性腹瀉病毒效果。運(yùn)用益生菌(如乳酸桿菌、芽孢桿菌等)能夠很有效地減弱豬流行性腹瀉病毒的活性，使有益菌在體內(nèi)大量定植、快速繁殖,增加腸道內(nèi)有益菌的數(shù)量,從而調(diào)整腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡,在一定程度上可以預(yù)防豬流行性腹瀉。

1 豬流行性腹瀉(PED)的致病機(jī)理

豬流行性腹瀉病毒(PEDV)屬于套式病毒目(Nidovirales)、冠狀病毒科(Coronaviridae)、α-冠狀病毒屬(α-Coronavirus)，是具有包膜的單股正鏈RNA病毒，其結(jié)構(gòu)如圖1所示，組成蛋白主要包括：S蛋白(Spike protein)、E蛋白(Envelope protein)、N蛋白(Nucleocapsid protein)、M蛋白(Membrane protein)和ORF3蛋白等[5]。S蛋白是病毒粒子表面的纖突蛋白，當(dāng)細(xì)胞表面的受體與病毒粒子結(jié)合后，S蛋白就會(huì)通過(guò)膜融合方式侵入到機(jī)體細(xì)胞并介導(dǎo)宿主產(chǎn)生中和抗體。S蛋白又可以分為S1和S2兩個(gè)亞基，豬流行性腹瀉病毒的S1亞基具有高度變異性，負(fù)責(zé)識(shí)別和結(jié)合特異性受體，S2亞基與病毒-細(xì)胞融合有關(guān)且相對(duì)保守。S1亞基分為功能域和結(jié)構(gòu)域，結(jié)構(gòu)域又分為N端域(NTD)和C端域(CTD)。NTD和CTD結(jié)構(gòu)域有可能結(jié)合不同的受體，特別是碳水化合物或跨膜蛋白。多數(shù)蛋白質(zhì)受體與CTD結(jié)構(gòu)域結(jié)合[6]。M蛋白和E蛋白參與形成病毒包膜，N蛋白與病毒基因組一起形成核衣殼。

圖1 豬流行性腹瀉病毒結(jié)構(gòu)

目前研究表明，豬流行性腹瀉病毒入侵細(xì)胞的過(guò)程為：S糖蛋白與細(xì)胞受體結(jié)合后，被某種蛋白酶剪切后活化成一種融合肽，再通過(guò)融合肽與細(xì)胞內(nèi)成分的融合作用介導(dǎo)該病毒侵入宿主細(xì)胞，進(jìn)而釋放具有感染性的基因組RNA，同時(shí)核衣殼蛋白N也被釋放進(jìn)胞質(zhì)中[7]。因此，受體是病毒侵入宿主的主要途徑。最初研究表明，氨基肽酶N是血清型I冠狀病毒的主要細(xì)胞受體，并且可能是豬流行性腹瀉病毒進(jìn)入細(xì)胞的主要受體，但宋利娜等最新研究證實(shí)，豬小腸絨毛腸細(xì)胞表達(dá)的氨基肽酶N(APN)為α-冠狀病毒的主要受體，但卻不是豬流行性腹瀉病毒所必需的功能受體[8]。目前雖然有用于預(yù)防豬流行性腹瀉的相關(guān)疫苗(如CV777疫苗株)，但隨著豬流行性腹瀉病毒基因型的不斷變異，其保護(hù)效力大幅降低，現(xiàn)在最為迫切的是對(duì)該病進(jìn)行有效的防控。

2 益生菌的功能

益生菌是通過(guò)定植在機(jī)體內(nèi)，改變宿主某一部位菌群組成的一類對(duì)宿主有益的活性微生物。通過(guò)調(diào)節(jié)宿主黏膜與系統(tǒng)免疫功能或腸道內(nèi)菌群平衡，從而產(chǎn)生有利于健康作用的單微生物或組成明確的混合微生物，起到促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收、保持腸道健康的作用。目前文獻(xiàn)報(bào)道中常用的益生菌有酵母菌、乳酸菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌等[9]。

2.1 維持腸道菌群結(jié)構(gòu)平衡 當(dāng)病原菌入侵時(shí)腸道菌群生態(tài)平衡就會(huì)失調(diào)。益生菌在腸道內(nèi)定植,可大量繁殖成為腸道中有益的正常菌群,以維持腸道內(nèi)菌群平衡。同時(shí)，益生菌可搶占其他病原菌的生存空間和養(yǎng)分或自身分泌殺菌物質(zhì)等，使得病原菌沒(méi)有生存的空間；并且部分益生菌(如雙歧桿菌)中有硝化菌，可阻止動(dòng)物自身及許多致病菌產(chǎn)生的毒性胺和氨的合成，凈化動(dòng)物腸道微生態(tài)環(huán)境；益生菌也可直接作用于腸黏膜免疫系統(tǒng)，促使腸道分泌腸黏液，降低腸黏膜滲透性,以保護(hù)腸道黏膜屏障的完整性[10]。

2.2 抑制致病菌的生長(zhǎng)和繁殖 益生菌與致病菌競(jìng)爭(zhēng)定植位點(diǎn)或爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，從而抑制致病菌的生長(zhǎng)和繁殖。益生菌可刺激動(dòng)物免疫器官的生長(zhǎng)發(fā)育,激活體內(nèi)具有吞噬作用的T、B淋巴細(xì)胞,提高抗體、干擾素和免疫球蛋白水平，增強(qiáng)動(dòng)物細(xì)胞免疫和體液免疫功能，緩解機(jī)體的炎癥反應(yīng)等[10]。例如干酪乳桿菌(LcS)可以調(diào)節(jié)天然殺傷細(xì)胞的活性。鼠李糖乳桿菌(LGG)可以調(diào)節(jié)先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)，尤其針對(duì)胃腸道病原體的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致血清IgG和分泌型IgA水平升高[11]。并且，益生菌自身會(huì)產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，如戊糖乳桿菌產(chǎn)生的細(xì)菌素Pentocin JL-1對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus)具有良好的抑制活性[12];乳酸菌、雙歧桿菌、優(yōu)桿菌等定植到腸道后，會(huì)產(chǎn)生大量有機(jī)酸(如乙酸)和具有抗菌、增強(qiáng)免疫等作用的活性化合物，對(duì)病原菌的定植和生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用[13-14]。

2.3 提高機(jī)體抗氧化水平 機(jī)體中氧化物(氧自由基和羥基自由基等)，含有未配對(duì)的電子，容易發(fā)生氧化還原反應(yīng)，當(dāng)機(jī)體中的氧化物過(guò)量時(shí)會(huì)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生氧化損傷。機(jī)體中存在著抗氧化系統(tǒng)，可以不斷的清除機(jī)體合成的氧化物，維持著氧化物的動(dòng)態(tài)平衡。植物乳桿菌C88分泌的多糖通過(guò)清除活性氧、上調(diào)酶促和非酶促抗氧化劑活性、減少脂質(zhì)過(guò)氧化從而發(fā)揮抗氧化作用[15]。植物乳桿菌LPZ菌株能夠提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能，降低腹瀉發(fā)生率，該菌株能夠提高機(jī)體免疫力和抗氧化能力，提升腸道短鏈脂肪酸的含量[16]。

3 益生菌的抗病毒機(jī)制

益生菌可通過(guò)直接或間接兩種方式來(lái)抑制病毒。益生菌與病毒直接相互作用，通過(guò)與病毒競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合受體來(lái)阻止病毒吸附；間接方式可借助益生菌本身產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物等來(lái)減弱病毒的致病力,其機(jī)制如圖2所示。

圖2 益生菌抗病毒機(jī)制A:益生菌與病毒結(jié)合； B:益生菌捕獲病毒顆粒； C:益生菌掩蓋細(xì)胞特異性受體； D:益生菌競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合細(xì)胞受體; E:益生菌代謝產(chǎn)物作用于病毒； F:益生菌刺激腸上皮細(xì)胞分泌黏液; G:益生菌干擾病毒周期； H:益生菌調(diào)節(jié)免疫機(jī)制

3.1 益生菌-病毒直接相互作用 益生菌可以直接作用于病毒從而干擾其復(fù)制；還可以與病毒結(jié)合來(lái)阻斷其對(duì)宿主細(xì)胞受體的附著；另外，益生菌還能捕獲病毒顆粒抑制其進(jìn)入細(xì)胞。例如，從人類陰道分離出的加氏乳桿菌CMUL57就是通過(guò)直接相互作用來(lái)抑制單純皰疹病毒(HSV-2)的入侵；松果乳桿菌在單純皰疹病毒(HSV-2)的吸附和繁殖過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)明顯的抑制作用，而是在最初感染階段就通過(guò)捕獲病毒顆粒來(lái)抑制病毒進(jìn)入細(xì)胞[17]。

3.2 益生菌-受體相互作用 益生菌表面的黏附素會(huì)先一步黏附在病原微生物的結(jié)合靶點(diǎn)上，以此掩蓋特異性或非特異性受體，從而阻止病毒侵入宿主[18]。此外，益生菌還可誘導(dǎo)上皮細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒物質(zhì)來(lái)抑制病毒繁殖，并與病原體競(jìng)爭(zhēng)附著在細(xì)胞受體上，以防止病毒入侵細(xì)胞(如乳酸菌)[17]。豬流行性腹瀉病毒感染宿主的前提是先結(jié)合豬小腸上皮細(xì)胞上的相應(yīng)受體靶點(diǎn)，而益生菌產(chǎn)生的黏附物質(zhì)可能會(huì)先黏附在靶細(xì)胞受體上，從而阻止豬流行性腹瀉病毒侵入宿主，相關(guān)機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

3.3 代謝產(chǎn)物-病毒相互作用 益生菌培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)病毒有一定的抑制作用，且不會(huì)顯著干擾其他微生物菌群。在臨床上，益生菌產(chǎn)生的胞外多糖(EPS)安全無(wú)害且具有靶向性，可以刺激IL-12的合成和積累，從而增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞的活性和脾臟中IgA的合成。例如，乳酸菌產(chǎn)生的EPS可用于腺病毒的治療[19]。但是，并非所有乳酸菌菌株產(chǎn)生的EPS都能抗病毒，其取決于乳酸菌菌株的生物活性。另外，植物乳桿菌能夠分泌一種雙肽細(xì)菌素(Plantaricin EF，Pln EF)誘導(dǎo)腸上皮強(qiáng)化，增強(qiáng)腸道屏障功能，預(yù)防豬流行性腹瀉、傳染性胃腸炎等腸道傳染病[20]。

3.4 益生菌-機(jī)體相互作用 益生菌通過(guò)調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫機(jī)制，如上調(diào)干擾素、白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子水平以及提高血清、糞便中特異性IgA水平，以此增強(qiáng)機(jī)體的抗病毒的能力，緩解機(jī)體炎癥反應(yīng)。干擾素(IFN)可以有效防治豬腹瀉，劉延亭等[21]用乳酸菌菌株表達(dá)的重組IFN-α等干擾素對(duì)豬流行性腹瀉病毒抑制效果最好。植物乳桿菌(Lp-1)通過(guò)刺激IPEC-J2或ST細(xì)胞內(nèi)IFN-β介導(dǎo)的JAK1/STAT通路發(fā)揮抗傳染性胃腸炎病毒的作用，導(dǎo)致干擾素刺激基因(ISGs)上調(diào)，從而誘導(dǎo)抗病毒蛋白如ZAP和PKR的合成[22]。由于豬流行性腹瀉病毒致病機(jī)制類似于傳染性胃腸炎病毒，所以具有一定的參考意義。施開(kāi)創(chuàng)等[23]證明了豬流行性腹瀉病毒 nsp1蛋白抑制IFN-β激活的JAK/STAT信號(hào)通路，所以可以通過(guò)益生菌激活與IFN相關(guān)的信號(hào)通路誘導(dǎo)抗病毒反應(yīng)，促進(jìn)其產(chǎn)生IFN-α、IFN-β等抗病毒因子，增強(qiáng)抗豬流行性腹瀉病毒活性。在仔豬基礎(chǔ)日糧或飲水中添加植物乳桿菌有良好的抗炎活性，能顯著提高腸道中sIgA的分泌，促進(jìn)仔豬空腸和回腸絨毛發(fā)育，提高絨毛高度、回腸隱窩深度以及腸道黏膜免疫功能[24]，可能減輕豬流行性腹瀉病毒誘導(dǎo)的高水平炎癥反應(yīng)以及腸絨毛萎縮、脫落、空泡化等癥狀。

4 益生菌抗豬流行性腹瀉機(jī)制探討

目前有關(guān)益生菌抗豬流行性腹瀉的研究有限，由于傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒同科同屬，臨床癥狀相似，所以常將兩種傳染病一起研究。通過(guò)一系列對(duì)傳染性胃腸炎病毒的研究推測(cè)益生菌可能是從三大方面來(lái)發(fā)揮抗豬流行性腹瀉病毒的作用。

4.1 益生菌-豬流行性腹瀉病毒 益生菌與豬流行性腹瀉病毒競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞受體或通過(guò)吸附病毒顆粒，阻止豬流行性腹瀉病毒的侵入?？莶菅挎邨U菌OKB105和表面活性素能夠與傳染性胃腸炎病毒競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合細(xì)胞受體[25]；同時(shí)有研究表明，出生到斷奶初期仔豬口服腸球菌可明顯降低仔豬腹瀉率和腹瀉程度，并提高仔豬平均日增重。由于傳染性胃腸炎病毒與豬流行性腹瀉病毒是同屬冠狀病毒且致病機(jī)制相似，故益生菌可能與豬流行性腹瀉病毒競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合宿主細(xì)胞上受體或吸附病毒顆粒，以阻止豬流行性腹瀉病毒的侵入。

4.2 益生菌代謝產(chǎn)物-豬流行性腹瀉病毒 益生菌代謝物質(zhì)(如有機(jī)酸、胞外多糖)可以減弱病毒效力。豬流行性腹瀉病毒在自然環(huán)境下的生存能力不強(qiáng)，在高溫、低pH、高濃度胰蛋白酶和氯仿的環(huán)境下，病毒滴度會(huì)下降[26]。植物乳桿菌LPZ菌株能在腸道上定植，快速生長(zhǎng)和產(chǎn)生乳酸，從而形成低pH環(huán)境，可能會(huì)減弱豬流行性腹瀉病毒毒力。植物乳桿菌ZN-3菌體或pH 7.0發(fā)酵上清液,對(duì)細(xì)胞無(wú)毒副作用,均可在一定程度上降低豬流行性腹瀉病毒對(duì)宿主細(xì)胞的感染活性,可有效用于預(yù)防和治療豬流行性腹瀉[27]。研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌的EPS能夠促進(jìn)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)與occludin和ZO-1基因的啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)腸道緊密連接蛋白的表達(dá)，從而增強(qiáng)腸道屏障功能[28]。另外，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌LP-1產(chǎn)生的EPS可抑制豬流行性腹瀉病毒感染誘發(fā)的炎癥反應(yīng)。同時(shí)，在體外細(xì)胞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了EPS可促進(jìn)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)高水平分泌，其是凋亡的啟動(dòng)因子，誘導(dǎo)豬流行性腹瀉病毒感染后細(xì)胞的凋亡。

豬流行性腹瀉病毒 S1亞基NTD和CTD結(jié)構(gòu)域有可能結(jié)合不同的受體，特別是碳水化合物或跨膜蛋白[6]，而益生菌本身會(huì)產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶、多聚糖酶等碳水化合物分解酶,可降解宿主靶細(xì)胞上豬流行性腹瀉病毒相應(yīng)受體，是否能阻止豬流行性腹瀉病毒入侵還有待進(jìn)一步研究。

4.3 益生菌-機(jī)體 益生菌刺激機(jī)體誘發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)及抑制炎癥因子的表達(dá)。研究提出，植物乳桿菌可緩解由于致病菌侵襲造成的仔豬腸道緊密連接蛋白claudin-1、occludin和ZO-1含量的降低，提高緊密連接蛋白o(hù)ccludin、ZO-1的mRNA表達(dá)以及β-防御素2、3(pBD2,pBD3)的含量，抑制促炎性細(xì)胞因子IL-6和IL-8等的表達(dá)，增強(qiáng)仔豬腸道上皮的防御功能。同時(shí)，植物乳桿菌IS-10506能夠通過(guò)提高ERK和β-連環(huán)蛋白的表達(dá)來(lái)激活腸道干細(xì)胞的分化，抵抗腸道炎癥，維持腸道健康，進(jìn)而預(yù)防豬流行性腹瀉[29]。

5 益生菌在豬流行性腹瀉上的應(yīng)用

益生菌在臨床上常用作動(dòng)物飼料添加劑、微生態(tài)制劑和疫苗接種的一種新替代方法。并且將益生菌聯(lián)合應(yīng)用也在臨床上取得了顯著效果。豬流行性腹瀉病毒感染引起仔豬營(yíng)養(yǎng)不良導(dǎo)致腸道菌群(GM)從門到屬甚至物種水平的失衡和移位。如豬流行性腹瀉病毒感染的仔豬中魏氏梭菌(引起腸發(fā)炎)數(shù)量顯著增加，而有益細(xì)菌(例如產(chǎn)生短鏈脂肪酸、丁酸鹽的細(xì)菌)減少。另外，豬流行性腹瀉病毒感染還改變了仔豬腸道中的優(yōu)勢(shì)細(xì)菌。研究表明，普氏桿菌、擬桿菌和副球菌是產(chǎn)生短鏈脂肪酸的細(xì)菌，丁酸梭菌是產(chǎn)生丁酸鹽的細(xì)菌[30]。因此，這些細(xì)菌比例的降低可能導(dǎo)致腸道微生物群不穩(wěn)定，并可能促進(jìn)豬流行性腹瀉病毒的感染，這說(shuō)明了腸道菌群(GM)的改變會(huì)促進(jìn)豬流行性腹瀉病毒的感染。因此，腸道菌群在抵抗病毒感染引起的胃腸道傳染病方面起著重要的作用。目前，不同植物乳桿菌菌株已經(jīng)大量應(yīng)用于抗病毒研究中。口服滅活的乳酸桿菌L-137(HK-LP)，可激活先天性免疫并增強(qiáng)其誘導(dǎo)的I型干擾素(IFN-β)表達(dá)水平，從而提高其抗禽流感病毒H1N1的能力；植物乳桿菌LRCC5310產(chǎn)生的EPS通過(guò)抑制TNF-α的分泌和活性來(lái)抵抗輪狀病毒。

5.1 地衣芽孢桿菌 Peng等發(fā)現(xiàn)，地衣芽孢桿菌作為飼料添加劑，具有明顯的抗豬流行性腹瀉的作用，地衣芽孢桿菌粗提物(BLFP)中的表面活性素樣肽具有抗豬流行性腹瀉病毒的作用。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組豬流行性腹瀉癥狀有所減輕，細(xì)胞外病毒RNA水平顯著降低，腸絨毛脫落和病毒數(shù)量也有所減少，并且確定了BLFP在一定劑量下對(duì)常規(guī)豬是安全且無(wú)毒副作用的[31]。

5.2 活乳酸菌 泰國(guó)使用乳酸菌上清液(LAB-CFS)預(yù)處理Vero細(xì)胞，針對(duì)豬流行性腹瀉病毒大流行株進(jìn)行抗病毒活性試驗(yàn)。Wandee等發(fā)現(xiàn)，將乳酸菌的CFS稀釋度控制在1∶16的情況下，不僅可以降低細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)，還對(duì)Vero細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒性，能夠明顯降低豬流行性腹瀉病毒活性。但LAB-CFS抗豬流行性腹瀉病毒的作用機(jī)制尚不清楚，還有待進(jìn)一步研究。猜測(cè)可能是LAB-CFS中代謝物阻止豬流行性腹瀉病毒吸附侵入細(xì)胞[32]。

5.3 腸膜明串珠菌 Chang-Liao等從開(kāi)菲爾谷物中分離出4種乳酸菌(LAB)，即杜蘭腸球菌、腸膜明串珠菌、牛乳桿菌、乳酸乳球菌，其中腸膜明串珠菌的細(xì)胞內(nèi)提取物L(fēng)n在感染豬流行性腹瀉的Vero細(xì)胞中對(duì)豬流行性腹瀉病毒的預(yù)防作用更強(qiáng)，并且還具有對(duì)豬流行性腹瀉病毒的體外治療作用和體外直接抑制作用。腸膜明串珠菌不是簡(jiǎn)單地通過(guò)益生菌與病毒的直接相互作用抑制病毒吸附和滲透到細(xì)胞中，而是通過(guò)顯著上調(diào)Vero細(xì)胞中黏液病毒抗性蛋白1(MX1)和干擾素刺激基因15 kDa蛋白(ISG15)表達(dá)，從而達(dá)到抗病毒作用[33]。但其是否還通過(guò)其他機(jī)制產(chǎn)生抗病毒作用目前尚不明確。

5.4 植物乳桿菌 Huang等發(fā)現(xiàn)，植物乳桿菌NC8更適合用作表達(dá)保護(hù)性抗原的黏膜遞送穿梭載體，所以他們將豬流行性腹瀉病毒的免疫原性S蛋白和誘導(dǎo)的DCpep構(gòu)建了融合蛋白，并在植物乳桿菌表面表達(dá)了該蛋白，獲得純化的重組NC8-pSIP409-pgsA’-S-DCpep在小鼠身上可以特異性結(jié)合樹(shù)突狀細(xì)胞靶向肽并觸發(fā)細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。重組NC8-pSIP409-pgsA’-S-DCpep可以明顯增強(qiáng)IgG和IgA的分泌，產(chǎn)生針對(duì)S蛋白的特異性抗體，其誘導(dǎo)的全身免疫應(yīng)答具有良好的豬流行性腹瀉病毒中和活性[34]。重組植物乳桿菌可能有助于開(kāi)發(fā)針對(duì)豬流行性腹瀉病毒攻擊的新型疫苗。

6 展望

豬流行性腹瀉是豬養(yǎng)殖業(yè)中影響嚴(yán)重的傳染病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬流行性腹瀉病毒基因型突變，導(dǎo)致傳統(tǒng)意義上的疫苗在很大程度上失去了保護(hù)作用，所以如何在基因型變異的基礎(chǔ)上研究出新方法來(lái)防治該病，成了人們研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，大部分益生菌不僅可以減少有害菌的定植，還有抗病毒作用，如果能借助現(xiàn)代先進(jìn)的研究技術(shù)，根據(jù)益生菌的不同抗病毒機(jī)制對(duì)益生菌加以廣泛利用，將會(huì)帶來(lái)不可估量的經(jīng)濟(jì)效益。臨床上需要篩選抗病毒能力強(qiáng)、安全性好、黏附程度高的益生菌來(lái)防治豬流行性腹瀉，減少豬養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失。但是益生菌效果不是很穩(wěn)定，其次益生菌起作用必需要有相當(dāng)數(shù)量的活菌，才能保證效果。而且益生菌應(yīng)用還需要精確到菌株，僅通過(guò)屬或種鑒定益生菌是不夠的。所以，新型、有效且穩(wěn)定的新型菌株是需要不斷發(fā)現(xiàn)的。目前，多數(shù)研究借助益生菌菌株(如植物乳桿菌、酵母菌)作為載體來(lái)研究抗豬流行性腹瀉病毒感染，具有很大的研究開(kāi)發(fā)前景。在人體臨床干預(yù)研究中發(fā)現(xiàn)，特定的益生菌菌株可以縮短病程或降低某些病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)；動(dòng)物臨床上發(fā)現(xiàn)，益生菌和(或)其產(chǎn)物與傳統(tǒng)抗病毒藥物的組合物具有協(xié)同作用，在預(yù)防和治療某些病毒感染方面也有顯著的效果；并且益生菌在一定的稀釋濃度下還可以提高抗病毒感染性，并且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。但益生菌抗豬流行性腹瀉的具體機(jī)制尚不完全清楚，所以有待進(jìn)一步研究。相信隨著對(duì)益生菌的研究越來(lái)越深入，益生菌會(huì)為抗豬流行性腹瀉或防治其他動(dòng)物疫病做出更大的貢獻(xiàn)。