蘇柘僮，肖勁邦，錢(qián)柏霖，朱潁琨，周劍婧，朱秋祥，楊世林，馮育林，高紅偉，沈留紅

(1.廣西英路維特藥物有限公司，廣西 荔浦 546600 ； 2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 動(dòng)物疫病與人類(lèi)健康四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 成都 611130 ； 3.江西中醫(yī)藥大學(xué) 中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心，江西 南昌 330006 ； 4.廣西中醫(yī)藥大學(xué), 廣西 南寧 530000)

乳房炎是全世界公認(rèn)的奶牛三大疾病之一，嚴(yán)重制約了奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前其防控主要手段是使用抗生素，但長(zhǎng)期大劑量甚至超劑量使用抗生素，不僅會(huì)導(dǎo)致耐藥菌株產(chǎn)生耐藥性，還會(huì)導(dǎo)致乳汁內(nèi)抗生素殘留的公共衛(wèi)生安全隱患[1-4]。中草藥及其制劑因其療效好、副作用少、無(wú)殘留等優(yōu)勢(shì)，在奶牛養(yǎng)殖中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛，牧場(chǎng)常選用具有抗菌消炎、提高免疫、抗氧化、抗內(nèi)毒素等作用的中藥或中藥組方治療奶牛乳房炎，并取得一定效果[5-6]。白頭翁及其主要成分白頭翁皂苷B4具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲(chóng)等功效，人醫(yī)臨床上常用于抗炎抑菌[7-9]、增強(qiáng)免疫[10]和抗氧化[11]等，其兼?zhèn)涞目寡?、抑菌、抗氧化和提升免疫力等藥效，與乳房炎清除細(xì)菌、緩解炎癥、提高自身免疫力以幫助自愈的治療需求密切吻合。因此，本試驗(yàn)旨在探究不同劑量白頭翁皂苷B4對(duì)奶牛臨床型乳房炎奶牛體溫、呼吸頻率、心率、單次反芻咀嚼次數(shù)、產(chǎn)奶量、治愈時(shí)間和治愈率的影響，從臨床的角度探明白頭翁皂苷B4治療臨床型乳房炎的最佳劑量，為后續(xù)試驗(yàn)及其臨床推廣應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選用四川某規(guī)?；膛?chǎng)半封閉統(tǒng)一飼舍的中國(guó)荷斯坦奶牛，體重(612±47)kg，年齡3～4周歲，2～3胎泌乳高峰期健康奶牛20頭和患臨床型乳房炎的奶牛50頭。從中選取泌乳天數(shù)、產(chǎn)奶量相近的臨床檢查健康奶牛12頭和患臨床型乳房炎奶牛36頭進(jìn)行本試驗(yàn)，常規(guī)飼養(yǎng)。

1.2 主要試劑 白頭翁皂苷B4注射液(100 mL/瓶，白頭翁皂苷B4含量66.67%)，由四川英路維特醫(yī)藥科技有限公司惠贈(zèng)，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥固體制劑制造技術(shù)國(guó)家工程研究中心鑒定。

1.3 主要儀器 阿波羅(ALPRO)牛群管理系統(tǒng)，瑞士DeLaval股份有限公司；TGLB-16G臺(tái)式離心機(jī)，Sigma公司；JS-B電子臺(tái)秤，上海升徽電子有限公司；DW-86L828W超低溫冰箱，青島海爾股份有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 奶牛臨床型乳房炎判斷標(biāo)準(zhǔn) 本試驗(yàn)臨床型乳房炎奶牛均為自然發(fā)病病例，由牧場(chǎng)同一執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師判定，其判定標(biāo)準(zhǔn)：奶牛乳腺紅、腫、觸之敏感，患區(qū)乳房表面溫度升高，乳腺腫大，產(chǎn)奶量顯著減少或停止，乳汁異常，呈淺黃色或淺紅色，稀薄或黏稠，有絮狀物。

1.4.2 試驗(yàn)?zāi)膛＝o藥方法及分組 根據(jù)乳房灌注、頸部肌內(nèi)注射和頸靜脈注射白頭翁皂苷B4治療奶牛臨床型乳房炎(5、10 mL/次和15 mL/次，3 次/d，連續(xù)給藥4～6 d)均有效的預(yù)試驗(yàn)結(jié)果。因頸部肌內(nèi)注射給藥最簡(jiǎn)單，本試驗(yàn)選擇頸部肌內(nèi)注射的方法給藥。將12頭健康奶牛(對(duì)照組)記為A組，36頭臨床型乳房炎奶牛(試驗(yàn)組)隨機(jī)均分為B、C、D三組。A組不注射藥物，B、C組和D組分別頸部肌內(nèi)注射白頭翁皂苷B4 15、30 mL和60 mL，1 次/d，發(fā)病當(dāng)天即開(kāi)始用藥(采樣均在用藥之前)，記為第1天，連續(xù)給藥4～6 d，觀察至第12天。

1.4.3 試驗(yàn)?zāi)膛ｓw溫、呼吸頻率、心率、單次反芻咀嚼次數(shù)測(cè)定 每日上午8:00應(yīng)用體溫表測(cè)定并記錄健康和臨床型乳房炎奶牛第1～7天直腸溫度；利用秒表記錄連續(xù)5 min心率、呼吸頻率，記錄連續(xù)3次的單次反芻咀嚼次數(shù)，并均取平均值。

1.4.4 療效判定方法和標(biāo)準(zhǔn) 治療期間及治愈后，對(duì)比每一天臨床癥狀和乳汁性狀進(jìn)行分析[12]。痊愈：乳房或患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀完全消失，產(chǎn)奶量回升，泌乳量和乳汁恢復(fù)正常；有效：乳房或患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀減輕或基本消失，乳汁無(wú)凝塊或有少量絮狀物或基本恢復(fù)正常，泌乳量回升或基本恢復(fù)正常；無(wú)效：乳房或患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀無(wú)明顯改善或加重，泌乳量下降，乳汁異常。

1.4.5 試驗(yàn)?zāi)膛．a(chǎn)奶量、治愈時(shí)間和治愈率的測(cè)定 依據(jù)ALPRO牛群管理系統(tǒng)記錄健康及臨床型乳房炎奶牛試驗(yàn)第1～7天的產(chǎn)奶量，觀察臨床型乳房炎奶牛每天的臨床癥狀(包括乳房質(zhì)地、性狀、乳汁性狀等)判斷治愈情況，并計(jì)算12 d內(nèi)的治愈時(shí)間、有效率及治愈率等。

2 結(jié)果

2.1 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛體溫的影響 如表1所示，臨床型乳房炎奶牛和健康奶牛體溫均在正常范圍波動(dòng)，B、C、D組奶牛體溫均呈逐漸下降趨勢(shì)，第5天后均接近對(duì)照組(組內(nèi)差異均不顯著)(P>0.05)。其中B組1～3 d差異不顯著(P>0.05)，C組1～3 d差異顯著(P<0.05)，D組1～5 d差異均顯著(P<0.05)。試驗(yàn)前4天，3個(gè)試驗(yàn)組組間均分別差異不顯著(P>0.05)，但均明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；第5～6天，B組仍明顯高于A組(P<0.05)，第7天時(shí)，各組體溫差異均不顯著(P>0.05)。

表1 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛體溫的影響Table 1 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the temperature of dairy cows with clinical mastitis (℃、n=12)

2.2 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛呼吸頻率的影響 如表2所示，A組奶牛呼吸頻率1～7 d均在正常范圍波動(dòng)(P>0.05)；B、C、D組奶牛呼吸頻率均呈下降趨勢(shì)，其中B組第3～4、5～7天差異均分別不顯著(P>0.05)，但第1、2、3～4、5～7天間分別差異顯著(P<0.05)；C組第3～4、4～6、5～7天差異均分別不顯著(P>0.05)，但第1、2、3、5～7天間分別差異顯著(P<0.05)；D組第5～7天差異均分別不顯著(P>0.05)，但第1、2、3、4、7天間分別差異顯著(P<0.05)。另外，B、C、D組前3天均顯著高于A組(P<0.05)；第4天，C、D組均分別與A、B組差異顯著(P<0.05)；第5～6天，B組顯著高于A組(P<0.05)；第7天，A組與B、C、D組差異均分別不顯著(P>0.05)，但B組和C組差異顯著(P<0.05)。

表2 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛呼吸頻率的影響Table 2 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the respiratory rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.3 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛心率的影響 如表3所示，A、B、C、D各組間和組內(nèi)奶牛第1～7天試驗(yàn)?zāi)膛Ｐ穆示鶡o(wú)明顯變化趨勢(shì)，差異均分別不顯著(P>0.05)。

表3 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛心率的影響Table 3 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the heart rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.4 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛單次反芻咀嚼次數(shù)的影響 由表4可見(jiàn)，試驗(yàn)期間A組奶牛各天單次反芻咀嚼次數(shù)均差異不顯著(P>0.05)。B、C、D組奶牛隨用藥時(shí)間推進(jìn)，治療前3天，B、C、D組(組間差異不顯著)均明顯低于A組(P<0.05)，且3 d后，B組明顯低于C組或D組(P<0.05)， C、D組(第4天與A組差異不顯著)效果優(yōu)于B組(第7天仍低于A組)，但C、D組差異均不顯著(P>0.05)。第4天后基本恢復(fù)正常，組內(nèi)差異不顯著(P>0.05)。

表4 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛單次反芻咀嚼次數(shù)的影響Table 4 Effect of Pulsatilla saponin B4 on mastications per rumination of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.5 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛泌乳量的影響 由表5可見(jiàn)，試驗(yàn)期間A組奶牛各天產(chǎn)奶量均差異不顯著(P>0.05)。B、C、D組除第2天低于第1天外，均隨治療時(shí)間推進(jìn)，呈上升趨勢(shì)，C、D組第4天后明顯高于前3天，B組第5天后才明顯高于前3天(P<0.05)。臨床型乳房炎奶牛產(chǎn)奶量明顯低于健康奶牛(P<0.05)，治療7 d均也明顯低于A組(P<0.05)，且第3天后，B組明顯低于C、D組(P<0.05)，D組高于C組，但組間差異不顯著(P>0.05)。

表5 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛泌乳量的影響Table 5 Effect of Pulsatilla saponin B4 on the milk production of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

2.6 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛治愈時(shí)間及治愈率的影響 如表6所示，B、C、D組臨床型乳房炎奶牛12 d內(nèi)治療有效率均達(dá)100.00%，總治愈率分別為75.00%、75.00%和91.67%，呈明顯量效關(guān)系；平均治愈時(shí)間分別為6.33、6.11 d和6.91 d，其中，治療第6天，C組即有6頭臨床治愈，B、D組均為4頭。綜上，選取C組30 mL/d的劑量即可達(dá)到理想臨床治療效果。

表6 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛治愈時(shí)間及治愈率的影響Table 6 Effect of Pulsatilla saponin B4 on cure time and cure rate of dairy cows with clinical mastitis (n=12)

3 討論

3.1 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛主要臨床指標(biāo)的影響 體溫、呼吸頻率、心率和單次反芻次數(shù)是評(píng)價(jià)奶牛機(jī)體健康狀況和生理狀態(tài)的重要臨床指標(biāo)。奶牛屬于恒溫動(dòng)物，其體溫僅在較為恒定的范圍內(nèi)發(fā)生細(xì)微變化，但臨床型乳房炎會(huì)造成奶牛體溫不同程度升高，從而刺激呼吸感受器，經(jīng)呼吸中樞整合增強(qiáng)呼吸反射，導(dǎo)致奶牛呼吸頻率上升[13]，進(jìn)而促使心交感神經(jīng)興奮，心臟收縮力加強(qiáng)，心率加快。本試驗(yàn)結(jié)果表明，臨床型乳房炎奶牛體溫、呼吸頻率、心率和單次反芻次數(shù)均在正常生理范圍波動(dòng)，但體溫、呼吸頻率均高于健康奶牛，使用白頭翁皂苷B4治療后均呈下降趨勢(shì)，并在第7天時(shí)，各組間奶牛體溫、呼吸頻率均分別差異不顯著(P>0.05)，與王爽[5]和鄭會(huì)超等[14]研究結(jié)果一致，說(shuō)明臨床型乳房炎引起奶牛體溫和呼吸頻率不同程度的升高，而白頭翁皂苷B4可發(fā)揮抗炎、解熱作用，并呈一定量效關(guān)系緩解體溫和呼吸頻率的升高。臨床型乳房炎奶牛的心率在發(fā)病初期及治療過(guò)程中與健康奶牛無(wú)明顯變化(P>0.05)，與肖定福等[15]利用青蒿、薄荷、佩蘭、金銀花和甘草等按一定比例配制組成的中藥組方降低熱應(yīng)激奶牛心率的結(jié)果相符，一方面可能由于牧場(chǎng)揭發(fā)臨床型乳房炎較為及時(shí)，尚無(wú)嚴(yán)重全身癥狀；另一方面表明白頭翁皂苷B4對(duì)奶牛心率無(wú)明顯副作用。奶牛是反芻動(dòng)物，反芻活動(dòng)對(duì)其采食和消化具有重要意義，當(dāng)奶牛處于疾病或應(yīng)激狀態(tài)下，反芻咀嚼次數(shù)會(huì)發(fā)生顯著變化[16-17]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)第1～3天各組臨床型乳房炎奶牛單次反芻咀嚼次數(shù)均顯著低于健康奶牛(P<0.05)，但隨治療時(shí)間的推進(jìn)，單次反芻咀嚼次數(shù)逐漸恢復(fù)，在第4天時(shí)發(fā)生顯著改善，說(shuō)明臨床型乳房炎會(huì)影響奶牛的反芻和消化功能，而白頭翁皂苷B4具備解熱、抗炎、抑菌、提高免疫的作用，可有效緩解奶牛炎癥和疼痛應(yīng)激狀態(tài)，恢復(fù)單次咀嚼和反芻次數(shù)，改善采食。

3.2 白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎奶牛治愈時(shí)間、治愈率和泌乳量的影響 臨床型乳房炎大多是由細(xì)菌感染引起炎癥反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致奶牛乳腺損傷和產(chǎn)奶量下降，抑制細(xì)菌和消除炎癥是治療奶牛乳房炎的2個(gè)關(guān)鍵。研究表明，白頭翁兼具良好的抗菌和抗炎作用，白頭翁皂苷B4的α、β不飽和酮結(jié)構(gòu)是抗炎所必需基團(tuán)，可調(diào)節(jié)血管收縮，增加血流量，減輕白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附反應(yīng)，控制白細(xì)胞傳出血管壁，減少炎癥組織中白細(xì)胞數(shù)，從而減輕炎癥反應(yīng)，其效應(yīng)與局部血流量相關(guān)，而奶牛每產(chǎn)1 kg牛奶需500 kg的血液流經(jīng)乳腺[18]，因此推測(cè)對(duì)乳腺也會(huì)有相應(yīng)的效果，文獻(xiàn)報(bào)道應(yīng)用白頭翁散加減治療奶牛出血性乳房炎，灌服1劑后乳汁紅色變淡，續(xù)服2劑，4 d后痊愈[19]；金蘭梅等[20]通過(guò)體外抑菌試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，單味白頭翁對(duì)引起奶牛乳房炎的金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和無(wú)乳鏈球菌均有較強(qiáng)抑制作用；呂平等[6]研究認(rèn)為，白頭翁提取物均對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有一定抑菌作用。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組臨床型乳房炎奶牛12 d內(nèi)治療有效率均達(dá)100%，總治愈率分別為75.00%、75.00%和91.67%，其中在治療第7天，3個(gè)組治愈頭數(shù)相近，在超出給藥時(shí)間后，C、D組分別有1頭和2頭自愈，且在治療過(guò)程中，泌乳量均呈逐漸上升趨勢(shì)，C組和D組第3天開(kāi)始，泌乳量回升趨勢(shì)均顯著高于B組(P<0.05)， 表明不同劑量白頭翁皂苷B4對(duì)臨床型乳房炎均具有較好治療效果，呈明顯量效關(guān)系。但考慮治療成本和減輕注射應(yīng)激，推薦30 mL頸部肌內(nèi)注射，1 次/d，連續(xù)4～6 d，即可達(dá)到理想治療效果。