陳燕枝，張文，張可麗，魏穎，張建東，方義湖

(1.江西醫(yī)學高等?？茖W校病理教研室，江西 上饒 333400；2.南昌大學第二附屬醫(yī)院病理科，江西 南昌 330000；3.上饒市人民醫(yī)院病理科，江西 上饒 333400)

0 引言

乳腺癌作為全球高發(fā)惡性腫瘤疾病之一，過去20 多年中，該病發(fā)病率上升1.4 倍，世界上多數國家及其地區(qū)乳腺癌發(fā)病率上升30%~40%[1]。免疫療法是指激發(fā)、調動機體免疫系統(tǒng)起到控制、消滅腫瘤細胞一種治療措施，作為現階段腫瘤領域研究重點問題。相關研究證實[2]，程序性死亡分子1(PD-1)和程序性死亡配體1(PD-L1)的單克隆抗體類藥物能增強機體T 細胞活性達到增強自身免疫力抗腫瘤目的。單克隆抗體PD-1/ PD-L1 抑制劑應用于黑色素瘤、非小細胞癌治療中有相關報道，但對乳腺癌疾病相關報道較少。本文就探討PD-1/PD-L1 信號通路在三陰性乳腺癌(TNBC)表達情況及預后關系，為后期臨床治療提供理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取上饒市人民醫(yī)院和南昌市第二附屬醫(yī)院2016 年1月至2019 年12 月收入200 例三陰性乳腺癌(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)存檔石蠟標本，納入標準：①所有患者經過病理組織檢查確診為原發(fā)性乳腺癌；②經過家屬、患者同意后參與本次試驗；③無精神異常、抑郁癥疾病。排除標準：①影響到本次試驗進程疾??；②一般資料不全者；③合并其他惡性腫瘤。

選取同期于我院行手術切除的病理診斷為非三陰性乳腺癌的40 例患者的乳腺癌組織(1.5 cm×1.0 cm×1.0 cm)石蠟標本為對照。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法

所有患者病理切片均采用組織芯片儀制成，并制作成7×9 大小受體蠟塊，每個微孔直徑大小為0.9mm，間距為1mm，深度為3mm。本次試驗開展過程中免疫組織化學檢查采用Leica BOND-MAX 全自動免疫組織化學操作。本次試驗所采用試劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司，嚴格按照說明書標準判斷，并以PBS 代替一抗作為陰性對照組，用內對照作為陽性對照。ER(克隆號EP1)、PR(克隆號EP2)、HER2( 克隆號UMAB36)、CH5/6( 克 隆號D5/16B4)、CD8( 克隆號SP16)、CD4( 克隆號SP35)、Ki-67( 克隆號MIB1)、PD-1(克隆號MRQ-22)和PD-L1(克隆號SP142)。

1.2.2 判定標準

由我院2 名高年資乳腺病理?？漆t(yī)師并對病理結構進行判斷，并依據2010 年美國腫瘤學會/美國病理醫(yī)師學院判定標準：陽性：ER、PR 胞核陽性細胞≥1%。依據2014 年制訂的中國乳腺癌HER2 檢測指南判定：陰性：0~1+，陽性：3+，若結果為2+，為判定標準再次進行檢測，檢測結果HER2 基因無擴增表示為陰性，陽性：PD-1/PD-L1 細胞膜、細胞質棕黃或棕褐色。陽性：PD-L1 細胞數≥1%，陰性：＜1%，對腫瘤細胞、間質TILS 中PD-L1 表達情況評價。PD-1 表達于間質TILS，陽性：陽性細胞數≥5%，陰性：＜5%。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 PD-1/PD-L1 表達情況

腫瘤細胞和間質TILS 中PD-L1 陽性率為17.5%(35/200)和24.0%(48/200)，高于非三陰性乳腺癌組織的 15.0%(6/40，差異有統(tǒng)計學意義(P＜ 0.05)。間質TILS 中PD-1 陽性率為26.0%(52/200)。高于非三陰性乳腺癌組織的7.5%(3/40)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見圖1。

圖1 表達情況

2.2 三陰性乳腺癌中PD-1/PD-L1 的表達與臨床病理特征的關系

200 例三陰性乳腺癌患者中，病理結果診斷為：68 例患者出現1~24 枚不等的淋巴結轉移，12 例患者出現腫瘤侵犯神經，19 例患者出現脈管內癌栓，46 例患者出現組織學II 級，154 例患者出現組織學III 級。腫瘤細胞PD-L1 陽性與組織學級別、淋巴結轉移有關(P＜0.05)，間質TILS PD-L1 陽性與組織學級別有關，級別越高表達越強(P＜0.05)，間質TILS PD-1 陽性與臨床各病例特征無相關性。見表1。

表1 三陰性乳腺癌中PD-1/PD-L1 的表達與臨床病理特征的關系

3 討論

PD-1/PD-L1 通路可能通過誘導T 細胞耐受、 抑制T 細胞增殖、抑制細胞因子分泌、阻礙抗原呈遞過程等方式來協(xié)助腫瘤免疫逃逸[3]。近些年來相關研究證實[4]，PD-L1 廣泛存在于人體多數腫瘤組織中，如乳腺癌、肺癌、胃癌以及宮頸癌等諸多腫瘤組織微環(huán)境中，能有效提高機體腫瘤反應性T 淋巴細胞凋亡，起到一定調節(jié)免疫原性作用。PD-1 廣泛存在于胸腺細胞、成熟T 細胞以及B 細胞中，臨床相關研究證實[5]，間質TILS 作為PD-1 等共同抑制信號，因此，當機體T 細胞耗竭時，PD-1 作為反映信號之一，腫瘤細胞中當PD-L1 表達會引起機體T 細胞功能障礙。因此，PD-1/PD-L1 為靶點腫瘤免疫治療為后期腫瘤疾病控制起著重要臨床意義，阻斷PD-1/PD-L1 信號通路，相對增強T 細胞免疫效應的 方法成為抗腫瘤免疫治療的一個重要手段[6]。

本文研究表明，間質TILS PD-L1 陽性與組織學級別有關，級別越高表達越強，而間質TILS PD-1 陽性與臨床各病例特征無相關性。上述結果證實，PD-1/PD-L1 信號通路的PD-L1 與間質TLI 相關，并非為腫瘤細胞本身。Muenst 等[7]的研究發(fā)現 650 例乳腺癌(TNBC 127 例)中PD-L1 陽性表達率為 23.4%，其表達與年齡，腫瘤大小、分期、分級，淋巴結轉移狀態(tài)，雌激素受體(estrogen receptor，ER)缺失和增殖細胞核抗原 Ki-67 高表達相關。另有研究[8]亦支持 PD-L1 表達與高 TIL 水平及其他預后不良因素，如年輕、高組織學分級、ER 陰性、孕激素受體(progesterone receptor，PR) 陰性、HER-2 過表達、高增殖指數及侵襲性亞型(三陰性、基底細胞樣)等相關。

范鈺，錢震，蘇勤軍等[7]研究中表明，非小細胞癌中PD-L1 在癌細胞以及癌間質淋巴細胞和巨噬細胞的表達陽性率高達48.93%、61.70%，結果證實，癌細胞和間質淋巴細胞中PD- L1 的表達與癌間質淋巴細胞中 PD-1 的表達呈正相關。在楊芳，陳曉品[8]研究中，PD-L1 在胃癌中的表達與PD-1 陽性間質TILS 的數量呈負相關。PD-L1 與其受體PD-1 陽性表達之間的相關性在不同腫瘤中表現形式不一致，但后期仍需臨床大樣本認證。

綜上所述，PD-1/PD-L1 在TNBC 中具有較高的表達，對三陰性乳腺癌的預后具有一定的預測作用，以及為三陰性乳腺癌免疫治療帶來更多希望。