梁若鵠 梁燕麗 鄧金蓮 張 穎 龔慧英 吳劍云

廣東省茂名市中心血站中心實(shí)驗(yàn)室，廣東茂名 525000

濃縮血小板分離技術(shù)是指通過血細(xì)胞分離或離心的方法從全血中提取出血小板濃縮液的過程，提取出的濃縮血小板制品含有高濃度的血小板、白細(xì)胞和纖維蛋白[1-3]。目前最常用的濃縮血小板有富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）、富含血小板纖維蛋白（platelet rich fibrin，PRF）、高度濃縮生長(zhǎng)因子血纖維蛋白（concentrate growth factors，CGF）等。隨著醫(yī)療技術(shù)水平不斷提高，成分輸血觀念不斷進(jìn)步，臨床需要的濃縮血小板不斷增加，在單采血小板無法滿足臨床需要的情況下，為保證臨床止血制劑的及時(shí)供應(yīng)，最大限度利用血液資源[4-5]，廣東省茂名市中心血站一直以來均開展手工濃縮血小板的制備工作。傳統(tǒng)的手工分離方法操作人員在分離操作主要依賴其自身操作經(jīng)驗(yàn)和操作專業(yè)能力，分離處理中操作人員只能夠通過肉眼進(jìn)行觀察，沒有相關(guān)儀器能夠輔助操作，這難以保證操作分離成功率，容易導(dǎo)致血液產(chǎn)品質(zhì)量出現(xiàn)偏差，最終影響操作結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020年1月至12月在廣東茂名市中心血站無償獻(xiàn)血的健康人群收集的108 袋24 h 內(nèi)制備的400 ml 全血作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法分組的方法將研究對(duì)象分為實(shí)驗(yàn)組（54 袋）和對(duì)照組（54袋）。研究對(duì)象在獻(xiàn)血前72 h 內(nèi)未服用他汀類藥物和阿斯匹林類藥物,采血過程順暢，采血時(shí)長(zhǎng)≤10 min，采集后在20℃～24℃的環(huán)境下保存和運(yùn)輸。采血袋使用一次性無菌五聯(lián)采血袋，購(gòu)自于四川南格爾生物醫(yī)學(xué)股份有限公司（生產(chǎn)批號(hào)：國(guó)械注準(zhǔn)20193151548）；全自動(dòng)全血成分分離機(jī)使用型號(hào)為Sepamatic-SL（Ⅲ）的高效型全自動(dòng)全血成分分離機(jī)（德國(guó)LMB 公司)；型號(hào)為8KS 的大容量冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma 公司）；型號(hào)為Axiolab.AI 蔡司顯微鏡（德國(guó)蔡司公司）；型號(hào)為BC-3000plus 的全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）； 型號(hào)為721305 的Nageotte計(jì)數(shù)板（德國(guó)普蘭德公司）。根據(jù)《血站技術(shù)操作規(guī)程（2019 版）》[6]的要求進(jìn)行質(zhì)量管理。納入標(biāo)準(zhǔn)：①?gòu)V東省茂名市自愿無償?shù)墨I(xiàn)血者進(jìn)行體檢；②抗丙肝病毒（hepatitis C virus，HCV）、乙肝病毒e 抗原（hepatitis B virus e antigen，HBV-e）、人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）和抗梅毒抗體檢測(cè)為陰性的全血； ③所有獻(xiàn)血者在獻(xiàn)血前的體檢結(jié)果及相關(guān)血液學(xué)檢查結(jié)果，均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求（GBl8467—2011）》[7]相關(guān)規(guī)定。排除標(biāo)準(zhǔn)：不符合上述①②③標(biāo)準(zhǔn)任何一項(xiàng)時(shí)均要排除。本研究經(jīng)茂名市中心血站醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)；所有體檢者及其家屬均知情同意。

1.2 方法

研究對(duì)象全血需要經(jīng)過兩次離心再分組比較觀察，第1 次離心，離心力為2074×g，離心溫度為20～24℃，離心時(shí)間為19 min，加速為9，減速曲線為21；第2 次離心，離心力為284×g，離心溫度：20～24℃，離心時(shí)間為10 min，加速為9，減速曲線為21。制備方法采用白膜法，主要采用本站購(gòu)置的全自動(dòng)全血成分分離機(jī)使用型號(hào)為Sepamatic-SL（Ⅲ）的高效型全自動(dòng)全血成分分離機(jī)（德國(guó)LMB 公司）；型號(hào)為8KS 的大容量冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma 公司）。

1.2.1 對(duì)照組

對(duì)照組采用手工制備濃縮血小板，把第1 次離心后外觀正常的全血袋置于分漿夾內(nèi)，將上層血漿流入轉(zhuǎn)移袋，待血漿流至距紅細(xì)胞界面約3 cm 時(shí)，用止夾夾緊該轉(zhuǎn)移管，將余下的血漿（50～60 ml）和近紅細(xì)胞界面的白膜層（40～50 ml）擠入白膜袋內(nèi)，制成血小板混懸液，總?cè)萘?0～110 ml； 血小板混懸液第2 次離心，利用分漿夾分離制備生成濃縮血小板；手工掃描錄入血液信息管理系統(tǒng)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)組

實(shí)驗(yàn)組采用分離機(jī)制備濃縮血小板，把第一次離心后外觀正常的全血袋安裝要分離機(jī)上，選擇07-2U懸紅+冰漿+白膜程序。正確掛袋后，按下開始鍵，根據(jù)顯示屏提示依次掃描母袋條碼→血漿袋條碼→紅細(xì)胞保存液袋→白膜袋和血小板保存袋→操作者編號(hào)等，程序開始自動(dòng)進(jìn)行分離，制備成的血小板混懸液總?cè)萘?00 ml；血小板混懸液二次離心，利用分漿夾分離制備生成濃縮血小板。

1.2.3 濃縮血小板的檢測(cè)

濃縮血小板20～24℃環(huán)境保存至儲(chǔ)存期末（制備后5 d），采用BC-3000plus 的全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀及大容量Nageotte 計(jì)數(shù)板對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量指標(biāo)監(jiān)測(cè)，檢測(cè)指標(biāo)包括濃縮血小板的血小板含量，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，儲(chǔ)存期末pH 值。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 觀察指標(biāo) 主要觀察24 h 內(nèi)制備的400 ml 全血的濃縮血小板的質(zhì)量指標(biāo)，包括血小板計(jì)數(shù)、酸堿度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、濃縮血小板的容量、濃縮血小板合格率及細(xì)菌培養(yǎng)情況。

1.3.2 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)國(guó)家全血成分質(zhì)量要求（GBl8469—2012）[8]的相關(guān)規(guī)定，400 ml 全血制備的濃縮血小板的質(zhì)量控制項(xiàng)目及其要求包括： ①容量為50～76 ml；②儲(chǔ)存期末pH 值為6.4～7.4； ③血小板含量≥4.0×1010個(gè)；④紅細(xì)胞混入量≤2．0×109個(gè)；⑤無細(xì)菌生長(zhǎng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組的濃縮血小板計(jì)數(shù)大于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組的酸堿度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組的濃縮血小板容量小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組的濃縮血小板合格率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表1）。

表1 兩種方法制備濃縮血小板質(zhì)量的比較（±s）

表1 兩種方法制備濃縮血小板質(zhì)量的比較（±s）

注 “-” 表示無數(shù)據(jù)

組別 血小板計(jì)數(shù)（×1010/L） 酸堿度 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（×109/L） 細(xì)菌培養(yǎng) 容量（ml） 合格率（%）實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組t/χ2 值P 值7.62±0.91 6.41±1.78 4.448＜0.001 7.11±0.04 6.94±1.25 0.999 0.320 1.17±0.35 1.52±0.75 3.108 0.002無菌生長(zhǎng)無菌生長(zhǎng)--60.00±4.58 64.00±16.36 1.730 0.087 100 92.6 24.725 0.003

3 討論

濃縮血小板是將全血經(jīng)離心處理后得到的血小板濃縮物，因?yàn)闈饪s血小板中含有大量生長(zhǎng)因子及蛋白質(zhì)，靜脈輸入后能有效到達(dá)到損傷部位并發(fā)揮作用，控制炎癥，不但對(duì)細(xì)胞而且對(duì)組織的再生和炎癥的控制都起到促進(jìn)作用，從而有利于機(jī)體修復(fù)損傷組織，目前已經(jīng)在臨床中被廣泛應(yīng)用[9-13]。濃縮血小板是將室溫保存的多聯(lián)袋內(nèi)的全血，于采血后6 h 內(nèi)在20℃～24℃的全封閉條件下將血小板分離出并懸浮在血漿內(nèi)所制成的成分血。

濃縮血小板的采集、制備、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、輸注等各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)延長(zhǎng)血小板的活性起著極其重要的作用，是保證血小板質(zhì)量的關(guān)鍵。目前血站制備濃縮血小板主要通過手工分離和分離機(jī)分離制備完成。而手工分離過程步驟繁瑣，多人操作，無法實(shí)時(shí)記錄制備時(shí)間，一旦發(fā)生血液制劑質(zhì)量問題，血液制備過程無法責(zé)任到人，質(zhì)量管理困難，而且分離制備的產(chǎn)品人為差異性大，產(chǎn)品不標(biāo)準(zhǔn)，且人為誤差很大[14-16]。所以本研究開展分離機(jī)的研究項(xiàng)目，目的是解決血液成分制備過程自化管理，進(jìn)而提升血液成分制備產(chǎn)品質(zhì)量及改進(jìn)血液制備的工藝，有效解放人力，提高人員利用率，這會(huì)極大促進(jìn)血站的成分制備智能化建設(shè)的進(jìn)度。2018—2020年本站分批引進(jìn)全自動(dòng)全血成分分離機(jī)（簡(jiǎn)稱分離機(jī)）12 臺(tái)，部分操作采用分離機(jī)代替手工制備濃血小板，在保證濃縮血小板質(zhì)量穩(wěn)定在高水平的同時(shí)實(shí)現(xiàn)了濃縮血小板制備過程的可追溯性、解放人力，降低勞動(dòng)成本。本研究評(píng)價(jià)全自動(dòng)全血成分分離機(jī)白膜法制備濃縮血小板的效果，并與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究，為制備濃縮血小板質(zhì)量控制提供參考。

Sepamatic-SL（Ⅲ）高效型全自動(dòng)全血成分分離機(jī)是德國(guó)LMB 公司最新研制的全血成分分離設(shè)備，主要應(yīng)用于血站血液成分制備科室。具有一定的優(yōu)勢(shì)，體現(xiàn)在：高效率、高性能、信息化和標(biāo)準(zhǔn)化等。本研究結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組的濃縮血小板計(jì)數(shù)大于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組的酸堿度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組的紅細(xì)胞計(jì)數(shù)小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組的濃縮血小板容量小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩組的濃縮血小板合格率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示全自動(dòng)全血成分分離機(jī)白膜法制備濃縮血小板的效果較好，值得推廣。

另外，在全自動(dòng)全血成分分離機(jī)參數(shù)設(shè)置上應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步研究并細(xì)化，例如流速控制2～3 g/s，二次離心程序的運(yùn)行，總耗時(shí)10 min 內(nèi)的控制等因素[17-18]。在將來的工作中，本項(xiàng)目將進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，采用全自動(dòng)全血成分分離機(jī)制備濃縮血小板的效果優(yōu)于人工方法，其質(zhì)量?jī)?yōu)于手工分離制備的同時(shí)，可實(shí)現(xiàn)濃縮血小板制備過程的自動(dòng)化管理。