姚 昕，涂 勇

(西昌學(xué)院農(nóng)業(yè)科學(xué)學(xué)院，四川 西昌 615013)

石榴(Punicagranatum)，為石榴科石榴屬植物，屬落葉灌木或小喬木，由于其籽粒晶瑩多汁，酸甜適宜，營養(yǎng)豐富，深受消費(fèi)者的歡迎。目前我國石榴栽植面積已位居世界首位，四川攀西地區(qū)更是成為了國內(nèi)最大的石榴產(chǎn)區(qū)[1]。石榴貯藏期果皮易發(fā)生褐變、皺縮、病害等問題，進(jìn)一步擴(kuò)展至籽粒易發(fā)生變色、變味甚至腐爛，極大地影響了其商品價(jià)值，而多種病原菌協(xié)同作用是導(dǎo)致腐爛變質(zhì)主要原因之一。植物精油為天然植物的提取物，往往含有抑制病原菌的生物活性成分，具有顯著的抑菌活性和廣泛的抗菌譜范圍，且其副作用小、殘留毒性低，具有作為天然防腐劑的潛在價(jià)值，已成為當(dāng)下果蔬保鮮領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一[2-4]。本試驗(yàn)選取15種植物精油，初步研究了其對2種石榴采后病原真菌的抑制效果，以期為石榴新型植物源保鮮劑的探究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 供試石榴 石榴品種為突尼斯軟籽，2020年8月26日采摘于四川省涼山州西昌市黃聯(lián)關(guān)鎮(zhèn)。挑選果形完整、無病蟲害、無機(jī)械損傷的果實(shí)。

1.1.2 供試菌株 供試菌株為石榴墊殼孢(Coniellagranati)和灰葡萄孢菌(Botrytiscinerea)，由西昌學(xué)院石榴貯藏與加工研究課題組提供。

1.1.3 供試精油 薄荷油、桉葉油、肉桂油、生姜油、大蒜油、丁香油，均為單方精油，購自江西雪松天然藥用油有限公司；茶樹油、迷迭香油、鼠尾草油、香茅油、百里香油、連翹油、艾葉油、橘子油、山蒼籽油，均為單方精油，江西惜緣香料有油限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種活化 將供試菌株接至馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上，25℃恒溫培養(yǎng)5d。

1.2.2 牛津杯法測定抑菌圈直徑 采用牛津杯法[5]，測定2種供試菌株對植物精油原液的抗敏性。取單個(gè)菌餅置于PDA培養(yǎng)基中心，在距中心等距離處放置3個(gè)牛津杯(d=5mm)，杯內(nèi)注入精油原液，25℃恒溫培養(yǎng)4d，十字交叉法測量抑菌圈直徑(cm)。

1.2.3 室內(nèi)毒力測定 采用生長速率法[6]，將初篩選出的7種植物精油分別以少許吐溫-80進(jìn)行溶解，配制成濃度為2000.0μL/L、1000.0μL/L、500.0μL/L、250.0μL/L、100.0μL/L、50.0μL/L、25.0μL/L和12.5μL/L含植物精油培養(yǎng)基，以吐溫-80為對照，每個(gè)濃度重復(fù)3次，接種供試菌株于培養(yǎng)基中心，25℃恒溫培養(yǎng)5d，十字交叉法測量菌落直徑(cm)，計(jì)算抑制率及毒力回歸方程，求出EC50和EC90。

1.2.4 精油熏蒸對石榴果實(shí)的保鮮防腐效果 石榴果實(shí)用PE袋(厚度0.01mm)整體包裝裝箱，將優(yōu)選出的2種植物精油按照室內(nèi)毒力試驗(yàn)計(jì)算出的EC90配置相應(yīng)處理濃度，均勻涂布在濾紙(14.0cm×10.0cm)上并貼于保鮮膜內(nèi)側(cè)，25℃下貯藏，第25d時(shí)統(tǒng)計(jì)各處理組石榴果實(shí)腐爛個(gè)數(shù)及腐爛等級，計(jì)算腐爛率和腐爛指數(shù)[7]。每個(gè)處理30個(gè)果實(shí)，重復(fù)3次。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用Excel 2010和 SPSS19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 植物精油對2種石榴采后病原真菌的抑制效果

如表1所示，15種供試植物精油對2種石榴采后致病真菌菌絲生長均有不同程度的抑制效果，其中香茅油、薄荷油、鼠尾草油、桉葉油、茶樹油、迷迭香油和肉桂油7種植物精油具有較好的抑制效果，其抑菌圈直徑均在6.00cm以上，而百里香油和橘子油抑制效果較差，其抑菌圈直徑均不足2.00cm。

表1 植物精油對2種石榴采后致病真菌的抑制效果

2.2 7種抑菌效果較好的植物精油對2種石榴采后病原真菌的毒力測定

進(jìn)一步對初篩出的7種植物精油進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，由表2可知，茶樹油和桉葉油毒力相對較強(qiáng)，茶樹油對2種致病真菌EC50分別為32.2795μL/L和64.9449μL/L，EC90分別為644.1509μL/L和682.3139μL/L，平均EC50和EC90為48.6122μL/L和663.2324μL/L，桉葉油對2種致病真菌EC50分別為分別為56.5131μL/L和42.5192μL/L，EC90分別為714.3943μL/L和443.3824μL/L，平均EC50和EC90為49.5162μL/L和578.8884μL/L，兩者差異不明顯。此外，香茅油對灰葡萄孢菌也具有較好的抑制作用，其EC50和EC90分別為44.9724μL/L和580.1205μL/L。

表2 7種抑菌效果較高的植物精油對2種石榴采后致病真菌的毒力測定

2.3 植物精油對石榴采后病害的控制效果

將茶樹油和桉葉油對石榴進(jìn)行熏蒸處理，貯藏過程果實(shí)腐爛率和腐爛指數(shù)的變化情況見表3。由表3可知，茶樹油和桉葉油均能一定程度上抑制石榴貯藏期的腐爛。貯藏21d時(shí)，桉葉油和茶樹油處理組腐爛率分別為16.67%和20.83%，腐爛指數(shù)分別為0.20和0.25，均顯著低于對照組(P>0.05)，而此時(shí)對照組腐爛率和腐爛指數(shù)已達(dá)到33.33%和0.41。

表3 2種植物精油處理對石榴貯藏期的影響

3 結(jié)果與討論

植物精油對2種石榴采后病原真菌的抑菌效果試驗(yàn)結(jié)果表明，茶樹油和桉葉油能有效地抑制2種病原真菌菌絲的生長，并能較好地控制貯藏期石榴的腐爛。目前國內(nèi)還未見利用植物精油控制石榴采后病害的相關(guān)報(bào)道，但在其他果蔬產(chǎn)品上較多。潘小軍等[8]以黃瓜炭疽病菌為試驗(yàn)材料，研究了13種植物精油的抑菌效果，其中肉桂皮油、牛至油和丁香油效果較好，能有效地延長黃瓜的貯藏期，延緩其品質(zhì)的下降。王丹等[8]研究5種植物精油對藍(lán)莓采后黑斑病病原菌的影響，發(fā)現(xiàn)肉桂皮油對鏈格孢菌菌絲生長具有較強(qiáng)的抑制作用，能夠一定程度上降低藍(lán)莓果實(shí)黑斑病的發(fā)病率，對藍(lán)莓采后黑斑病具有較好的防治作用。劉瑞玲等[10]選用6種植物精油對紅肉火龍果采后病原菌進(jìn)行抑菌性試驗(yàn)，結(jié)果顯示香芹酚精油對層生鐮刀菌和平頭炭疽菌的抑菌效果最好。近年來新型保鮮劑在石榴上的應(yīng)用效果及其安全性報(bào)道較少，而植物精油作為一種新型抑菌劑值得進(jìn)一步探索，以期篩選出高效、安全、能對石榴采后多種病原菌的進(jìn)行綜合防治的方法。此外，由于植物精油、病原菌和果實(shí)之間的交互作用較為復(fù)雜，在考慮殺菌、防腐的同時(shí)，還需要對果實(shí)其他方面的品質(zhì)指標(biāo)進(jìn)行綜合考量，因此，植物精油對于石榴的保鮮效果及抑菌機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。