許艷秋，王廣成，謝樹林，陳丙坤，吳春先，高立明

(四川省農(nóng)藥檢定所，成都 610041)

甲噻誘胺，化學(xué)名稱N-(5-甲基-1,3-噻唑-2-基)-4-甲基-1,2,3-噻二唑-5-甲酰胺，CAS號(hào)：908298-37-3，分子式：C8H8N4OS2，結(jié)構(gòu)式見圖1，是由南開大學(xué)創(chuàng)制開發(fā)的植物誘導(dǎo)抗病激活劑，其作用機(jī)制為誘導(dǎo)植物自身產(chǎn)生廣譜的抗病活性[1-2]。此物質(zhì)主要用于防治病原真菌、細(xì)菌和病毒等引起的多種作物病害，尤其是對(duì)水稻稻瘟病、煙草病毒病、黃瓜細(xì)菌性角斑病和黃瓜霜霉病等作物病害有一定的防治效果[2-4]和很好的誘導(dǎo)抗病效果[4-6]。

目前，關(guān)于甲噻誘胺的殘留分析方法已有專利報(bào)道[7]，但甲噻誘胺原藥的分析檢測(cè)方法尚未見公開報(bào)道。因此，本文采用高效液相色譜儀建立了一種測(cè)定甲噻誘胺原藥質(zhì)量分?jǐn)?shù)的定量分析方法，具有操作快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，精密度和準(zhǔn)確度均能滿足定量分析的要求，可用于甲噻誘胺生產(chǎn)中的質(zhì)量控制及其相關(guān)分析測(cè)試研究。

1 材料與方法

1.1 供試藥劑和試劑

甲噻誘胺標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0% (廣安利爾化學(xué)有限公司)；甲噻誘胺原藥，質(zhì)量分?jǐn)?shù)96.46% (廣安利爾化學(xué)有限公司)；甲醇，色譜純(飛世爾科技公司)；磷酸，分析純(四川西隴化工有限公司)；超純水，自制。

1.2 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀配DAD檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；AB204-S電子天平(瑞士梅特勒-托利多)；過(guò)濾器：濾膜孔徑0.45 μm。

1.3 液相色譜操作條件

色譜柱為250 mm×4.6 mm (i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)填ZORBAX SB-C18，5.0 μm填充物；流動(dòng)相為甲醇+0.1%磷酸水溶液(60∶40，體積比)，流速為1.0 mL/min；色譜柱溫度為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為265 nm；進(jìn)樣體積為3.0 μL，采用外標(biāo)法以峰面積定量。在該色譜條件下，甲噻誘胺保留時(shí)間約為5.8 min。典型色譜圖見圖1。

圖1 相同條件下甲噻誘胺標(biāo)樣和原藥樣品的液相色譜圖

1.4 樣品準(zhǔn)備

準(zhǔn)確稱取(萬(wàn)分之一天平)甲噻誘胺標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g于50.00 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋后，定容至刻度線，搖勻后作標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液儲(chǔ)存待用。另稱取甲噻誘胺原藥樣品0.05 g，采用同樣方法用甲醇溶液并定容至50.00 mL，作待測(cè)樣品溶液。

1.5 進(jìn)樣分析

按上述儀器條件運(yùn)行液相色譜，當(dāng)信號(hào)基線保持平穩(wěn)且無(wú)明顯波動(dòng)時(shí)，取用標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液進(jìn)樣分析，至連續(xù)2次進(jìn)樣檢測(cè)的信號(hào)值變化小于1.5%后，以標(biāo)準(zhǔn)樣品、待測(cè)樣品、待測(cè)樣品、標(biāo)準(zhǔn)樣品的順序?qū)奏缯T胺含量進(jìn)行測(cè)定。

1.6 結(jié)果計(jì)算

利用色譜工作站分別對(duì)標(biāo)樣和待測(cè)樣中甲噻誘胺的峰響應(yīng)信號(hào)面積進(jìn)行積分，并將所得結(jié)果平均后，按下列算式計(jì)算待測(cè)樣中的甲噻誘胺質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)：

式中：A1、A2分別為標(biāo)準(zhǔn)樣品中和待測(cè)樣品前后兩針甲噻誘胺峰面積的平均值；m1、m2分別為稱取的甲噻誘胺標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品的質(zhì)量(g)；ωs為標(biāo)準(zhǔn)品中甲噻誘胺的純度(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

采用二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，在210~400 nm吸收波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)甲噻誘胺標(biāo)樣進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果顯示，甲噻誘胺在345 nm附近有最大吸收，在265 nm也有較大吸收，結(jié)合出峰峰形，選擇265 nm作為本方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的選擇

流動(dòng)相采用有機(jī)相和水相按一定比例配合組成，其中甲醇作有機(jī)相部分，水相部分在純水或0.1%磷酸水溶液中選擇。在2種不同的水相下分別對(duì)甲噻誘胺標(biāo)樣進(jìn)行預(yù)分析試驗(yàn)，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)0.1%磷酸水溶液有利于改善甲噻誘胺的峰形與分離效果。調(diào)節(jié)流動(dòng)相中甲醇和磷酸水溶液的比例，當(dāng)其體積比為60∶40，流速為1.0 mL/min時(shí)，甲噻誘胺得到了良好的分離。

2.3 分析方法的線性相關(guān)性

配制5個(gè)濃度分別為0.429 0、0.801 9、1.029 6、1.237 5、2.162 2 mg/mL的甲噻誘胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3節(jié)色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以甲噻誘胺的質(zhì)量濃度為自變量，相應(yīng)的峰面積為因變量，進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果見圖2，在試驗(yàn)質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，甲噻誘胺的質(zhì)量濃度與信號(hào)響應(yīng)值之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y=4 977.3x+46.371，相關(guān)系數(shù)(R2)為1.000 0。

圖2 線性相關(guān)試驗(yàn)的線性回歸圖

2.4 分析方法精密度

對(duì)同一原藥樣品取樣5次進(jìn)行色譜分析，計(jì)算其中甲噻誘胺的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，試驗(yàn)結(jié)果見表1。可見，該方法的精密度符合分析的基本要求。

表1 精密度計(jì)算數(shù)據(jù)

2.5 方法準(zhǔn)確度

稱取已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的甲噻誘胺原藥樣品(由精密度數(shù)據(jù)計(jì)算獲得) 5份，分別加入一定量的甲噻誘胺標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成溶液后按1.3節(jié)色譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2?？梢?，本方法的回收率范圍均符合CIPAC的基本要求。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié) 論

本文建立了一種高效液相色譜檢測(cè)甲噻誘胺原藥中有效成分含量的分析方法。通過(guò)該方法的線性、 精密度和準(zhǔn)確度試驗(yàn)證實(shí)該方法具備對(duì)甲噻誘胺良好的分析效果，可用于對(duì)甲噻誘胺及其相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制。