陳良宇，和順?lè)迹驁?bào)春，張 偉

（1 昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院暨云南省天然藥物藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 云南 昆明 650500）

（2 云南龍津康佑生物醫(yī)藥有限公司 云南 昆明 650503）

（3 昆明龍津藥業(yè)股份有限公司 云南 昆明 650503）

依折麥布片是由美國(guó)默克（Merck）公司和先靈葆雅（Schering-Plough）公司共同研制的選擇性抑制膽固醇吸收的藥物[1]，是第1 個(gè)被FDA 批準(zhǔn)上市的膽固醇吸收抑制劑[2]。其機(jī)制主要是選擇性地抑制人體內(nèi)小腸黏膜上傳輸?shù)鞍譔PC1L1 的活性，有效減少腸內(nèi)膽固醇的吸收，降低血漿中膽固醇水平和肝臟內(nèi)膽固醇的儲(chǔ)存量[3]。此藥在臨床上用于治療原發(fā)性高膽固醇血癥，家族性純合子高膽固醇血癥（HoFH），純合子谷甾醇血癥[4]，混合性高脂血癥和冠心病等?！睹绹?guó)藥典》第41 版[5]中依折麥布片的含量測(cè)定均采用高效液相色譜法，該方法專屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確度高，但使用高效液相色譜法檢測(cè)時(shí)操作繁瑣，耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，成本高。因此本文將嘗試采用紫外分光光度法對(duì)依折麥布片的含量進(jìn)行測(cè)定，以期開發(fā)出一種準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法。

1.儀器與試藥試劑

Evolution 350 紫外可見分光光度計(jì)（美國(guó)Thermofisher Scientific 公司），UV-2700 紫外可見分光光度計(jì)（日本島津公司），Ultimate 3000 高效液相色譜儀（美國(guó)Thermofisher Scientific 公司），Secura225D-1CN 半微量電子天平（德國(guó)賽多利斯公司），SK8300GT 超聲波清洗機(jī)（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）。

依折麥布對(duì)照品（USP 標(biāo)準(zhǔn)品，批號(hào)R075K0）；依折麥布片（云南龍津康佑生物醫(yī)藥有限公司提供，規(guī)格10 mg，批號(hào)20201118、01210303、01210304）；乙腈（色譜純，安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司，批號(hào)6308BW07）；冰醋酸（分析純，四川西隴科技股份有限公司，批號(hào)20201127）；水是實(shí)驗(yàn)室的自制純化水。聚四氟乙稀微孔濾膜（天津圣信唯科技有限公司提供）。

2.方法和結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱取依折麥布的對(duì)照品適量，用稀釋劑（乙腈﹕水﹕冰醋酸=60﹕40﹕0.1）溶解，制成濃度為20 μg/mL 的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取依折麥布片10 片，置500 mL量瓶中，加稀釋劑適量，超聲30 min，稀釋劑定容至刻度，搖勻，過(guò)濾；精密量取續(xù)濾液5 mL，置50 mL 量瓶中，稀釋劑定容至刻度，搖勻即得。

2.1.3 測(cè)定方法 照紫外-可見分光光度法（《中國(guó)藥典》2020 年版四部通則0401[6]）在選定的測(cè)定波長(zhǎng)處依次測(cè)定空白溶劑、空白輔料溶液、對(duì)照品溶液及供試品溶液。

2.2 專屬性

取依折麥布片（批號(hào)：20201118）5 片，于50 mL 量瓶中分別進(jìn)行酸、堿、氧化、高溫和光照強(qiáng)制破壞。另按處方比例制備空白輔料溶液[7]，取空白溶劑及上述溶液在190～400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，從圖1來(lái)看，在248 nm 波長(zhǎng)處，空白溶劑和空白輔料不影響主要成分檢測(cè)；酸、堿、氧化、高溫和光照強(qiáng)制破壞后，樣品在248 nm 波長(zhǎng)處無(wú)吸收干擾，因此本試驗(yàn)選擇248 nm 作為依折麥布片的檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 依折麥布檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

2.3 線性關(guān)系考察

以濃度為20 μg/mL 的對(duì)照品溶液作為100%濃度的線性溶液，分別配制25%、50%、75%、100%、125% 和150%濃度的線性溶液，照紫外-可見分光光度法（《中國(guó)藥典》2020 年版四部通則0401[6]）測(cè)定其吸光度，得到吸光度與濃度的回歸方程為：A=0.0384C+0.0049，其中r=0.9999（n=6）見圖2。結(jié)果表明依折麥布在濃度范圍為5～30 μg/mL 內(nèi)的線性關(guān)系良好。

圖2 依折麥布片含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“2.1.2”項(xiàng)配制1 份供試品溶液，室溫放置，分別在0、1、2、4、8 h 測(cè)定吸光度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，吸光度RSD為0.64%，供試品溶液中主成分在室溫下8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 重復(fù)性 取同一批次的樣品（批號(hào)：2001118）6 份，每份10 片進(jìn)行精密稱量，根據(jù)“2.1.2”項(xiàng)配置供試品溶液，測(cè)定吸光度并計(jì)算含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，依折麥布的平均含量（n=6）為101.05%，RSD 為0.52%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.5.2 中間精密度 按“2.1.2”項(xiàng)重復(fù)配制6 份供試品溶液，在不同時(shí)間使用不同儀器測(cè)定吸光度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，依折麥布的平均含量（n=6）101.02%，RSD為0.26%。重復(fù)性試驗(yàn)與中間精密度共12 份數(shù)據(jù)的平均含量（n=12）為101.03%，RSD 為0.35%，表明該方法的精密度能達(dá)到含量分析要求。

2.6 回收率試驗(yàn)

精密稱定依折麥布對(duì)照品適量，制備成1 mg/mL 的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液1.6、2.0、2.4 mL 置100 mL 量瓶中，各加入空白輔料約18 mg，制備成80%、100%、120%的回收率溶液，每個(gè)濃度平行制備3 份，分別測(cè)定各溶液的吸光度并計(jì)算回收率及RSD，平均回收率101.06%，RSD 為0.33%。結(jié)果表明，該方法具有良好的回收率，見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品測(cè)定

取3 批依折麥布片，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每批制備3 份，測(cè)定吸收度并計(jì)算含量，另參照《美國(guó)藥典》第41 版[5]中依折麥布片含量測(cè)定方法按高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2020 年版0512[8]）測(cè)定相同3 批依折麥布片的含量。結(jié)果表明，各批含量之間沒(méi)有顯著差異。此外，本法測(cè)定含量與HPLC 法結(jié)果無(wú)顯著差異，具有可靠性，見表2。

表2 3 批依折麥布片中依折麥布含量測(cè)定結(jié)果（%）

3.討論

本文建立紫外分光光度法測(cè)定依折麥布片含量的方法。根據(jù)掃描光譜可知依折麥布最大吸收波長(zhǎng)在232 nm處，但空白輔料在該波長(zhǎng)處有少量干擾，故選擇248 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)；而濃度為20 μg/mL 的溶液在248 nm 波長(zhǎng)處的吸光度在0.7 左右，符合朗伯-比爾定律的適用范圍；本方法檢測(cè)快速，成本低，可較好滿足仿制藥集采經(jīng)濟(jì)性的要求。

本文根據(jù)依折麥布具有強(qiáng)紫外吸收的特性，采取紫外分光光度法測(cè)定依折麥布片的含量，從線性關(guān)系、準(zhǔn)確度試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)及樣品測(cè)定中得到試驗(yàn)結(jié)果可知，該方法準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)，可以作為制劑質(zhì)量控制的快速檢測(cè)方法來(lái)使用。