謝 洪，陸步詩(shī)，伍 強(qiáng)，李新社，王婧璇

（1.邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院，湖南邵陽(yáng) 422000；2.生態(tài)釀酒技術(shù)與應(yīng)用湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南邵陽(yáng) 422000）

青錢柳為胡桃科青錢柳屬植物，該屬僅有青錢柳一種，是集綠化、保健、藥用于一身的珍稀樹(shù)種[1]，被譽(yù)為植物界的大熊貓，醫(yī)學(xué)界的第三棵樹(shù)。對(duì)于其成分研究，目前報(bào)道的主要有無(wú)機(jī)類、黃酮類、多糖類和三萜類。無(wú)機(jī)類成分包括鉀鈣鎂等人體必要的常量元素等[2]；黃酮類包括黃酮醇及其苷類化合物[3-4]等；多糖類包括糖醛酸、β-糖苷鍵，并且有少量多糖和蛋白結(jié)合[5]；三萜類包括阿江欖仁酸、青錢柳酸A 和青錢柳酸B 等[6]。關(guān)于黃酮類化合物，其泛指兩個(gè)苯環(huán)(a 環(huán)與b 環(huán))通過(guò)中央三碳鏈相互連接所構(gòu)成，基本的結(jié)構(gòu)主要為6C-3C-6C 的一系列化合物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，黃酮類化合物具有很多的生物活性功能，包括抗炎作用[7-8]、清除自由基和抗氧化作用[9]、酶抑制作用[10-12]、抗腫瘤作用[13]、對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用[14-15]、調(diào)脂作用[16]、抗病毒藥理作用和抗菌作用等[17-18]。從藥理學(xué)角度分析，黃酮類物質(zhì)具有的效果包括抗抑郁、抗腫瘤、擴(kuò)張血管等藥理活性[19]。關(guān)于三萜類化合物，目前其對(duì)人體的功效主要有溶血、抗癌、抗炎、抗菌、抗病毒、降低膽固醇等作用。另外，青錢柳具有天然的降三高作用，主要包括了降低人體血壓、血糖、血脂的功能，其作用機(jī)理是通過(guò)恢復(fù)病變胰島細(xì)胞機(jī)構(gòu)和功能，增加外圍組織的胰島素受體，被醫(yī)學(xué)界稱之為“天然胰島素”[20-21]。

目前，對(duì)于青錢柳葉中成分的分析，主要有陳張金[22]采用UPLC-MS 法確定了其中含有蘆丁、金絲桃苷、槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、異槲皮苷、槲皮苷、槲皮素6種黃酮類成分；李俊秀等[23]總結(jié)了青錢柳黃酮單體46種。

關(guān)于青錢柳保健酒中的成分研究，鮮有報(bào)道。因此，本試驗(yàn)采用單因素與響應(yīng)面結(jié)合試驗(yàn)，獲得青錢柳保健酒的最佳浸泡條件，并在最佳條件下[24]，采用液質(zhì)聯(lián)用法（HPLC-MS）對(duì)制得的兩種青錢柳保健酒進(jìn)行成分鑒定分析，為青錢柳保健酒的生產(chǎn)提供有利參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

原料：青錢柳老葉、青錢柳嫩葉，武岡青錢柳有限公司提供。

酒樣：62%vol 二鍋頭白酒，北京順鑫農(nóng)業(yè)股份有限公司。

試劑及耗材：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，安徽酷爾生物工程有限公司；NaNO2（分析純），天津市永大化學(xué)試劑有限公司；Al(NO3)3·9H2O（分析純），成都金山化學(xué)試劑有限公司；甲酸（色譜純），聊城通達(dá)化工有限公司；甲醇（分析純），天津市瑞明威化工有限公司。

儀器設(shè)備：傾斜式高速萬(wàn)能粉碎機(jī)；電熱恒溫水浴鍋；高速離心機(jī)；電子天平；電子式液體密度計(jì)；超聲波清洗器；液相色譜（安捷倫1290uplc）；質(zhì)譜（安捷倫qtof6550）。

1.2 液質(zhì)聯(lián)用條件

流動(dòng)相A：0.1%甲酸水溶液；流動(dòng)相B：甲醇溶液；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；色譜柱：安捷倫extend C182.1×50 mm 1.7 μm；流動(dòng)相比例：0～3 min 5 % B；3～12 min 為5 %～95 % B；12～15 min 為95%B；15～20 min為5%B。

質(zhì)譜掃描范圍：一級(jí)100～1500 m/z；Gas Temp 150 ℃；drying gas 15 L/min；sheath gas temp 350 ℃；sheath gas flow 12 L/min；ESI-模式：電壓4000 V。

2 結(jié)果與分析

2.1 青錢柳保健酒鑒定結(jié)果

青錢柳葉保健酒中含有酯類、酸類、羥基化合物、醛類化合物等，其中主要有效成分是黃酮類和三萜類等。采用液相色譜（安捷倫1290uplc）與質(zhì)譜（安捷倫qtof6550）聯(lián)用，在設(shè)定的液質(zhì)聯(lián)用條件下分別對(duì)青錢柳嫩葉與老葉保健酒有效成分進(jìn)行分析。其總離子色譜圖見(jiàn)圖1 和圖2，成分鑒定結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖1 青錢柳嫩葉保健酒總離子色譜圖

圖2 青錢柳老葉保健酒總離子色譜圖

圖3 成分鑒定結(jié)果

由圖3 可知，青錢柳嫩葉保健酒在1.2 的液質(zhì)條件下，鑒定出的物質(zhì)有164 種，其中通過(guò)分析得出的黃酮類物質(zhì)有11 種，三萜類物質(zhì)有20 種。青錢柳老葉保健酒鑒定出的物質(zhì)有91 種，其中黃酮類物質(zhì)有7種，三萜類物質(zhì)有15種。

由此可見(jiàn)，青錢柳嫩葉保健酒中的成分比老葉保健酒中的有效成分更多，且成分更為復(fù)雜。嫩葉之所以成分種類比老葉多，原因是老葉在時(shí)間的積累下，很多成分已被分解利用，導(dǎo)致成分種類的減少，但根據(jù)鑒定結(jié)果分析，部分成分老葉峰面積大于嫩葉，原因是老葉雖然部分成分被分解利用，但也有部分成分在時(shí)間的積累下不斷地積累。另外，從圖中可以看出，兩種保健酒中均含有三萜類、黃酮類等有效成分，故通過(guò)浸泡制作青錢柳保健酒是可行的，此法能將青錢柳葉中有效成分溶解到白酒中，是因?yàn)榘拙浦泻幸掖?，而乙醇?duì)于部分類化合物是一種良好的有機(jī)溶劑。研究結(jié)果表明：從黃酮類及三萜類物質(zhì)成分種類分析，嫩葉保健酒中含有的黃酮類成分更多，保健效果更佳。

2.2 不同青錢柳保健酒中黃酮類成分對(duì)比分析

采用液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)兩種青錢柳保健酒中的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行鑒定，并通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行歸納分析，得出的結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 青錢柳嫩葉保健酒黃酮類物質(zhì)分析結(jié)果

由表1 可知，青錢柳嫩葉保健酒中含有11 種黃酮類物質(zhì)，其中屬黃酮苷類物質(zhì)種類較多；青錢柳老葉保健酒中含有7 種黃酮類物質(zhì)，同樣，大部分屬黃酮苷類。其中，青錢柳嫩葉保健酒中含有的黃酮類物質(zhì)囊括了老葉保健酒。原因是在植物生長(zhǎng)過(guò)程中，生長(zhǎng)初期，代謝不旺盛，光合作用弱，黃酮含量相對(duì)較少或變化不大。到了生長(zhǎng)期，光合作用強(qiáng)，代謝旺盛，植物中黃酮含量不斷上升。但隨著葉片的衰老，植物的光合作用減弱，黃酮類含量也就相應(yīng)減少，但黃酮類參與植物的生長(zhǎng)，這就導(dǎo)致部分黃酮類物質(zhì)被損耗而未能得到足夠的補(bǔ)充，從而導(dǎo)致黃酮含量逐漸減少。

研究結(jié)果表明，青錢柳老葉保健酒中除了3,4',5,7-四羥基黃酮-3-L-鼠李糖苷這種黃酮類物質(zhì)峰面積高于嫩葉保健酒，其他黃酮類物質(zhì)成分，峰面積均小于青錢柳嫩葉保健酒。故從黃酮類成分上進(jìn)行對(duì)比，嫩葉保健酒中的黃酮類成分更多，對(duì)人體更具有保健作用。

2.3 不同青錢柳保健酒中三萜類成分對(duì)比分析

采用液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)兩種青錢柳保健酒中的三萜類物質(zhì)進(jìn)行鑒定，并通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行歸納分析，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 青錢柳嫩葉保健酒三萜類物質(zhì)分析結(jié)果

由表2 可以看出，青錢柳嫩葉保健酒中所含有的三萜類化合物的種類以及大部分三萜類化合物的相對(duì)含量，均高于青錢柳老葉保健酒。其原因一是時(shí)間對(duì)植物生長(zhǎng)過(guò)程中三萜類化合物的影響。三萜類化合物在生長(zhǎng)過(guò)程中，含量首先是逐漸上升的狀態(tài)，然后開(kāi)始下降，隨后略微上升，最后三萜類化合物含量呈現(xiàn)逐步下降。故對(duì)比青錢柳嫩葉保健酒與老葉保健酒中三萜類化合物的成分種類以及大部分物質(zhì)的相對(duì)含量時(shí)，前者均高于后者，這與其本身葉片中所含有的三萜類物質(zhì)之間存在一定的聯(lián)系。二是在植物生長(zhǎng)的過(guò)程中，萜類物質(zhì)對(duì)植物的生長(zhǎng)起著重要作用，如部分三萜類物質(zhì)參與生長(zhǎng)激素等的合成，這也就導(dǎo)致其含量的減少，從生長(zhǎng)過(guò)程分析，這也是青錢柳嫩葉保健酒中三萜類成分及種類高于青錢柳老葉保健酒的重要原因之一。但部分三萜類物質(zhì)，隨著生長(zhǎng)過(guò)程中時(shí)間的積累，含量會(huì)逐漸升高。總體而言，從三萜類物質(zhì)的分析可以看出，嫩葉保健酒對(duì)人體更具有保健作用。

3 結(jié)論

通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用的鑒定結(jié)果表明，青錢柳嫩葉保健酒中含有11 種黃酮類物質(zhì)，青錢柳老葉保健酒中含有7 種黃酮類物質(zhì)，青錢柳老葉保健酒中含有的黃酮類物質(zhì)，在青錢柳嫩葉保健酒中均含有。另外，在兩種保健酒中，青錢柳嫩葉保健酒中三萜類物質(zhì)的成分以及大部分三萜類物質(zhì)的相對(duì)含量，均高于青錢柳老葉保健酒。故從黃酮類及三萜類成分種類的角度分析，青錢柳嫩葉用于保健酒的制作優(yōu)于青錢柳老葉，且所得的青錢柳嫩葉保健酒的保健效果優(yōu)于青錢柳老葉保健酒。與此同時(shí)，通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用的方法對(duì)青錢柳保健酒的鑒定分析，證明了青錢柳保健酒中含有多種三萜類和黃酮類，而這兩種成分能對(duì)人體起到良好的保健作用，故表明用青錢柳葉制取保健酒可行，且為青錢柳保健酒具有保健效果提供有力依據(jù)。