賈利蕊 馬占清 馬 婷

(青海省農(nóng)產(chǎn)品質量安全檢測中心，青海 西寧 810000)

丙溴磷分子式為：C11H15BrClO3PS，它是一種廣譜高效、中等毒性、低殘留的有機磷殺蟲劑，主要用于棉花、玉米、甜菜、大豆、馬鈴薯、蔬菜、煙草等作物，防治害蟲(特別是鱗翅目害蟲)和螨。少量的農(nóng)藥殘留不會引起人體急性中毒，但長期食用農(nóng)藥殘留超標的食品，對人體健康有一定影響。根據(jù)《食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量》[2](GB2763—2021)中規(guī)定，丙溴磷在番茄、白菜、蘋果中的最大殘留限量分別為10mg/kg、5mg/kg、0.05mg/kg。

丙溴磷的過量食用會造成嚴重污染，危害人類健康和生態(tài)可持續(xù)發(fā)展，因此，本文利用氣相色譜，以番茄，白菜，蘋果做研究對象，建立果蔬中丙溴磷農(nóng)藥殘留的檢測方法。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1儀器

高速組織搗碎機(2000r/min)、JM-2002電子天平(0.01g)、AH-30全自動勻漿機(10000r/min)、G16高速離心機(6000r/min)、N-1200B旋轉蒸發(fā)儀(150r/min、36℃)、MS3basis旋渦混合器、Agilent6890N氣相色譜儀(美國安捷倫公司生產(chǎn))，配備電子捕獲檢測器(ECD)。

1.1.2試劑

乙腈(德國Merk公司，色譜純)；正己烷(德國Merk公司，色譜純)；丙酮(德國Merk公司，色譜純)；氯化鈉(分析純)；SPE小柱(Dick-Ma,弗羅里矽柱Florisil)；丙溴磷農(nóng)藥標準品為100ug/mL(農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳環(huán)境保護科研檢測所)。

1.2 實驗方法及原理

本試驗參照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》(NY/T761-2008)中第2部分，蔬菜和水果中有機氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多殘留的測定進行檢測，將試樣用乙腈分離、提取，提取液經(jīng)濃縮、凈化、再濃縮后，用自動進樣器，經(jīng)過毛細管柱到電子捕獲器(ECD)檢測器中檢測。根據(jù)保留時間定性，外標法定量。

ECD檢測器使用原理：電子捕獲檢測器ECD也是一種離子化檢測器，它是一個有選擇性的高靈敏度的檢測器，它只對具有電負性的物質，如含鹵素、硫、磷、氮的物質有信號，物質的電負性越強，也就是電子吸收系數(shù)越大，檢測器的靈敏度越高如丙溴磷等則有信號，而對電中性(無電負性)的物質，如烷烴等則無信號。

1.3 操作條件

色譜柱：DB-17(50%聚甲基硅氧烷，30m×0.25mm×0.25um毛細色譜柱)，進樣口溫度：200℃；檢測器溫度:310℃；柱溫梯度：開始升至100℃(保持1min)后，以20℃/min升至200℃保持5min，再以5℃/min升至250℃保持3min，最后再以10℃/min升至270℃保持10min；載氣：氮氣(高純氮≥99.999%，流速60mL/min)，采用不分流進樣，進樣量為1uL。

1.4 標準溶液配制

準確量取1.00mL的丙溴磷(100ug/mL)農(nóng)藥標準品，用正己烷稀釋至10mL，配制成10.00ug/mL的丙溴磷農(nóng)藥標準儲備液，避光保存在-18℃冰箱中，有效期為12個月。

將10.00ug/mL的丙溴磷標準儲備液，分別用正己烷溶劑、番茄基質，白菜基質和蘋果基質配制成0.01ug/mL，0.05ug/mL，0.10ug/mL，0.20ug/mL和0.50ug/mL五個梯度的標準工作溶液，經(jīng)儀器測定，進行對比分析。

1.5 實驗步驟

1.5.1樣品制備。將番茄、白菜、蘋果切碎混合均勻放入高速組織搗碎機中，粉碎制成待測樣，標明編號，放入樣品盒中，與-18℃冰箱中保存、備用。

1.5.2提取和凈化。用電子天平準確稱取20.00g試樣于離心管中，加入40mL乙腈，放入全自動勻漿機中進行勻漿2min后，再放入7g的氯化鈉，繼續(xù)勻漿2min，然后離心2min，使乙腈相和水相充分分層。吸取10mL有機相于旋蒸瓶中，旋蒸至近干，加入2mL正己烷備用。

向上述備用液中加入5.0mL丙酮+正己烷(10+90)混合溶液充分振蕩，通過先后用5.0mL丙酮+正己烷(10+90)和5.0mL正己烷預淋洗、條件化的弗羅里矽柱，進行吸附、凈化于另一旋蒸瓶中，重復2次，然后將盛有洗脫液的旋蒸瓶，再次放到旋轉蒸發(fā)儀上蒸發(fā)至近干，最后，加入5.0mL的正己烷在漩渦混合器上混勻，分別移入2mL自動進樣器的樣品瓶中待測。

2 結果和分析

在上述條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針丙溴磷標準工作溶液，直至相鄰2針標液的保留時間相差在±0.05min內，響應值(峰面積)相對變化小于10%，說明該實驗條件穩(wěn)定。

2.1 圖譜分析

待儀器穩(wěn)定后，分別依次取0.10ug/mL丙溴磷的正己烷溶劑標、番茄基質標、蘋果基質標、白菜基質標的順序進行上機測定，即可得丙溴磷標樣溶劑標和各試樣基質標色譜圖[3]，見圖1、2、3、4。

圖1 正已烷溶劑標色譜圖

圖2 番茄基質標色譜圖

圖3 白菜基質標色譜圖

圖4 蘋果基質標色譜圖

色譜圖顯示：依據(jù)色譜圖特點，丙溴磷信號時間保留在24.5min左右，相差在±0.05min內，是一種較穩(wěn)定、分離效果較好的一種農(nóng)藥。

2.2 標準曲線和基質效應

分別用0.01ug/mL，0.05ug/mL，0.10ug/mL，0.20ug/mL和0.50ug/mL五個梯度的正己烷溶劑標、番茄基質標，白菜基質標和蘋果基質標進行檢測，即可得丙溴磷溶劑標和各試樣基質標標準曲線，見圖5、6、7、8。

圖5 正已烷溶劑標的標準曲線

圖6 番茄基質標的標準曲線

圖7 白菜基質標的標準曲線

圖8 蘋果基質標的標準曲線

由圖可見：根據(jù)4種丙溴磷標準溶液的濃度和峰面積得到線性方程和相關系數(shù)。具體如下：見表1、表2。

表1 4種丙溴磷標準溶液的濃度和峰面積

表2 4種丙溴磷標準溶液的線性方程和相關系數(shù)

表1、表2顯示：濃度在0.01～0.50ug/mL范圍內，標準溶液濃度的相關系數(shù)均≥0.999，說明改該溶液的濃度和峰面積線性關系良好。

基質效應是指提取共洗脫組分對目標化合物電離的影響，使待測物在儀器上的響應發(fā)生增強或減弱的現(xiàn)象，從而影響化學分析的準確性?；|效應是通過基質配標校準曲線斜率和溶劑配標校準曲線斜率的比值來確定的，計算方程式見公示(1)

基質效應=(1-基質配標校準曲線斜率/溶劑配標校準曲線斜率)×100%(1)

基質效應被分為3個等級：-20%～20%為輕微的基質增強或減弱，在可接受范圍內；-50%～50%為中等程度的基質效應；<-50%或>50%，視為嚴重的基質效應。結果顯示：番茄、白菜、蘋果的基質效應分別是-1.56%、-1.84%、-0.41%，三者均在-2%～2%范圍內，可視為無基質效應[4]。

2.3 回收率和精密度

分別稱取20.00g的番茄、白菜和蘋果試樣各6份，再向這些試樣中添加0.200mL，濃度為10ug/mL的丙溴磷農(nóng)藥標準儲備液，混勻后依照上述實驗步驟，則可配制成濃度為0.1ug/mL的加標，用每種樣品的6個平行加標分別進行檢測，得到結果與0.1ug/mL丙溴磷溶劑標的(n=6)重復測定的平均值(表3)依據(jù)《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》NY/T761-2008中第2部分定量計算方法做對比分析(表4)。

表3 0.1ug/mL丙溴磷溶劑標的6次重復測定值和平均值(峰面積)

表4 3種丙溴磷添加樣的回收率和精密度

結果顯示：在加標回收的實驗中可以看出，這三種添加量為0.10ug/mL丙溴磷的試樣平均回收率在83.73%～99.56%范圍內，并且RSD≤0.90%，二者皆滿足平均回收率介于70%～120%，RSD≤20%要求。

3 結論

由于丙溴磷的結構中含有溴原子、氯原子，增強了該物質的電負性，所以選擇電子捕獲檢測器ECD進行檢測，本研究參照標準《NY/T761-2008》中第2部分，蔬菜和水果中有機氯類、擬除蟲菊酯類農(nóng)藥多殘留的測定方法，前處理由原來的靜置分層≥30min改為離心分層2min的方法，不僅可以縮短時間，還可使有機相和水相的分層更明顯，另外采用SPE小柱(弗羅里矽柱Florisil)凈化，有效除去了色素、有機酸、糖類等干擾物質，從而消除了基質效應，相比丙溴磷的傳統(tǒng)做法，不僅提高了效率還提高了準確率。此方法的線性相關系數(shù)好，回收率和精密度高，滿足實驗要求，可以做番茄、白菜和蘋果等果蔬中丙溴磷殘留檢測技術參考。