馬秀珍

(青海省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)中心，青海 西寧 810000)

農(nóng)藥殘留是指在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)過程中為提高生產(chǎn)效益直接或間接施用在蔬菜、水果、食用菌、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品和土壤中，由于使用后一個(gè)時(shí)期內(nèi)沒有被分解而殘留的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。根據(jù)文獻(xiàn)論述[1-2]農(nóng)產(chǎn)品殘留量超標(biāo)將直接危害人和牲畜的健康，殘留的農(nóng)藥會(huì)在人體內(nèi)積累，誘發(fā)一些慢性疾病，甚至引起“三致”(致癌、致畸、致突變)，嚴(yán)重致死級(jí)農(nóng)藥可致人畜死亡；農(nóng)藥殘留也會(huì)危害環(huán)境，其滲入土壤造成環(huán)境污染，進(jìn)入水體毒害水中生物的繁殖和生長(zhǎng)，在殺死害蟲的同時(shí)，毒害益蟲，產(chǎn)生新的害蟲群體，破壞生態(tài)平衡。因此，農(nóng)殘檢測(cè)異常重要，尤其是檢測(cè)方法的探索決定整個(gè)檢測(cè)行業(yè)的發(fā)展。

自2008年以來，LC-MS農(nóng)殘前處理方法以GB/T20769-2008[3]為主，2021年9月GB23200.121-2021[4]頒布，為驗(yàn)證兩種前處理方法結(jié)果間的差別，現(xiàn)以黃瓜為樣品，以多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒為檢測(cè)參數(shù)，利用液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)兩種方法比較分析。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與設(shè)備

液相色譜(島津LC-30AD)—串聯(lián)質(zhì)譜儀(AB4500);制樣機(jī)：離心管；分析天平(感量0.01)；均質(zhì)儀；高速離心機(jī)(4000r/min)；0.22um有機(jī)系針孔濾膜過濾器；渦旋儀以及實(shí)驗(yàn)室常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備。

1.2 試劑與材料

多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液100ug/mL(農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心)；乙腈(德國(guó)Merk公司，質(zhì)譜純)；甲醇(德國(guó)Merk公司，質(zhì)譜純)；甲酸；復(fù)合型氨基固相萃取柱；硫酸鈉;氯化鈉(分析純)；PSA無水硫酸鎂。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液(100ug/mL)用甲醇稀釋至10ug/mL，待用。

1.3.2樣品制備

根據(jù)NY/T789-2004[5]要求制備黃瓜樣品，具體為除去黃瓜梗，切碎、打碎、密封、標(biāo)記，置于0～4℃冷藏保存。

1.3.3樣品提取與凈化

1.3.3.1第一組為將1.3.2制備的樣品準(zhǔn)確稱取20g(精確至0.01)于50mL離心管中，稱取2份(一份為基質(zhì)對(duì)照組，一份為添加組)，加入40mL乙腈，用均質(zhì)儀勻漿提取2min，加入氯化鈉5～6g，繼續(xù)勻漿提取2min，在4000r/min離心機(jī)上離心5min，取上清液10mL(相當(dāng)于試樣5g),在37℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至1mL，待凈化。采用復(fù)合型固相氨基柱凈化，將凈化柱放在下接平底燒瓶的固定架上，用乙腈+甲苯(3+1)預(yù)洗凈化柱，當(dāng)液面達(dá)到填料頂部時(shí)迅速將濃縮液轉(zhuǎn)移至凈化柱中，并更換平底燒瓶。再用5mL乙腈+甲苯(3+1)分次洗滌樣品瓶三次，并將洗滌液轉(zhuǎn)移至凈化柱中，再用15mL乙腈+甲苯(3+1)洗脫農(nóng)藥，合并于平底燒瓶中，并在37℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至近干燥，加入1mL甲醇+水(70+30)混勻，經(jīng)0.22um濾膜過濾后待上機(jī)測(cè)定。

1.3.3.2第二組為將1.3.2制備的樣品準(zhǔn)確稱取10g(精確至0.01)與50mL離心管中，共稱取2份(一份為基質(zhì)對(duì)照組，一份為添加組)，加入10mL乙腈和陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩1分鐘，依次加入4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉，劇烈震蕩1min，在4℃、5000r/min條件下離心5min,吸取4mL上清液轉(zhuǎn)入另一個(gè)50mL的離心管中，依次加入600mg無水硫酸鎂，200mgPSA,，渦旋震蕩1min，5000r/min離心5min，取上清液過0.22um濾膜，供LC-MS測(cè)定。

1.3.4液相色譜與質(zhì)譜條件

色譜柱為C183um,150×2.1mm;流動(dòng)相為乙腈-0.1%(體積分?jǐn)?shù))甲酸水溶液，流速為0.3mL/min,柱溫為40℃，進(jìn)樣體積1ul,進(jìn)樣梯度程序見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫表

質(zhì)譜條件選擇電噴霧離子源，ESI正離子電離；氣簾氣40psi；離子化電壓4500V；離子源溫度為550℃；輔助加熱氣為50psi；噴霧氣為50psi;以(MRM)離子對(duì)進(jìn)行定性分析，包括1個(gè)母離子和2個(gè)子離子，其中以母離子和響應(yīng)最高的子離子進(jìn)行參數(shù)的定量分析；具體母離子、子離子、去簇電壓(V)、碰撞氣能量(V)、碰撞室出口電壓(V)見表2。

表2 質(zhì)譜條件表

2 結(jié)果與分析

2.1 基質(zhì)效應(yīng)、檢出限和定量限

2.1.1基質(zhì)效應(yīng)

為消除基質(zhì)對(duì)參數(shù)的影響，提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度，分別用甲醇和黃瓜基質(zhì)配制0.1ug/mL、0.2ug/mL的多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒標(biāo)準(zhǔn)溶液，上機(jī)檢測(cè)，對(duì)比分析兩個(gè)濃度下三種參數(shù)的甲醇溶劑標(biāo)液色譜圖峰面積和黃瓜基質(zhì)標(biāo)液色譜圖峰面積，發(fā)現(xiàn)甲醇溶劑嘧菌酯峰面積大于黃瓜基質(zhì)的峰面積，說明黃瓜基質(zhì)對(duì)三種參數(shù)有抑制作用，為了消除這種抑制作用，選擇被測(cè)樣品的空白樣品進(jìn)行前處理，得到空白樣品基質(zhì)溶液，配置基質(zhì)標(biāo)，采取基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行結(jié)果計(jì)算分析。

2.1.2檢出限和定量限

用黃瓜基質(zhì)配制多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒系列濃度混合標(biāo)液，上機(jī)檢測(cè)，當(dāng)信噪比S/N≥3時(shí)得到多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒檢出限為0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.003mg/kg，當(dāng)信噪比S/N≥10時(shí)得到多菌靈、吡蟲啉、啶蟲脒定量限都為0.01mg/kg，滿足檢測(cè)要求。

2.2 方法的線性關(guān)系

用基質(zhì)將1.3.1配制的儲(chǔ)備液稀釋25倍，配制成0.4ug/mL標(biāo)液，再用基質(zhì)配制為0.05ug/mL、0.08ug/mL、0.1ug/mL、0.2ug/mL、0.4ug/mL的系列濃度，上機(jī)檢驗(yàn)。以待測(cè)物濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程和相關(guān)系數(shù)見表3，結(jié)果顯示兩種前處理方法相關(guān)系數(shù)均大于0.9990，可知線性關(guān)系良好。

表3 線性方程和相關(guān)系數(shù)

2.3 方法回收率和精密度

在樣品中添加0.1mg/kg標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)6次，從基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜以及加標(biāo)樣品圖譜中得出兩種前處理方法下，三個(gè)參數(shù)重復(fù)性、峰形及分離度都良好，回收率均在78.0%以上，具體結(jié)果見表4。

表4 三種參數(shù)的回收率、精密度

3 結(jié)論

通過QuEChERS和SPE兩種前處理方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，SPE法前處理過程繁瑣，實(shí)驗(yàn)成本大，并且危害實(shí)驗(yàn)人員的健康，但是回收率較高。QuEChERS法實(shí)驗(yàn)周期短、效率高、安全，回收率雖略低于SPE，但該方法仍然符合我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)要求，精密度良好，滿足實(shí)驗(yàn)要求，且該方法頒布時(shí)間短，隨著今后實(shí)驗(yàn)的不斷熟練、摸索、開發(fā)，回收率也會(huì)逐漸提高，因此，QuEChERS可用作農(nóng)藥殘留檢測(cè)的可靠選擇。