王莉，趙媛

1.西安市第八醫(yī)院肝病科，陜西 西安 710061；2.延安市人民醫(yī)院感染科，陜西 延安 716000

慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B，CHB）是消化內(nèi)科及感染科的常見(jiàn)病，是導(dǎo)致肝硬化、慢性肝病及肝癌等的主要原因[1]。CHB早期癥狀不典型，加上確診CHB的金標(biāo)準(zhǔn)主要為病理學(xué)活檢，這種侵入性操作并不利于早期診斷，因此近年來(lái)血清學(xué)指標(biāo)在CHB中的診斷價(jià)值得到重視?，F(xiàn)有研究表明，炎性介質(zhì)、免疫細(xì)胞與乙型肝炎病毒（HBV）清除及肝臟炎性損傷有關(guān)[2]。血管黏附蛋白-1（VAP-1）主要由肝臟產(chǎn)生，可水解為可溶性血管黏附蛋白-1（sVAP-1），發(fā)揮促炎效果[3]。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1（DNMT1）為體細(xì)胞內(nèi)豐富的甲基轉(zhuǎn)移酶，可維持DNA甲基化。以往的研究發(fā)現(xiàn)，肝組織中DNMT1表達(dá)與CHB、腫瘤復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移等臨床病理特征有關(guān)[4]。T淋巴細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim-3）是T淋巴細(xì)胞免疫球蛋白家族中的重要一員，在多種生命活動(dòng)中起到重要調(diào)節(jié)作用[5]。既往研究尚未完全明確sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平對(duì)CHB的作用機(jī)制，本研究就此展開(kāi)分析，旨在指導(dǎo)臨床診療工作。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2018年4月至2020年7月西安市第八醫(yī)院肝病科收治的93例CHB患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有患者診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年版）》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）患者及其家屬知情本研究且簽署了同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）患有自身免疫性肝炎、脂肪肝、酒精性肝炎等肝病者；（2）其他病毒引起的肝炎患者；（3）妊娠或哺乳期婦女；（4）合并腫瘤疾病者；（5）合并心肺腎等重要臟器功能受損者。將患者分為HBV DNA陽(yáng)性組（n=53，HBV DNA＞1.0×103copy/mL）和HBV DNA陰性組（n=40，HBV DNA≤1.0×103copy/mL）。HBV DNA陽(yáng)性組中男性32例，女性21例；年齡35～68歲，平均（45.69±3.28）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）21～28 kg/m2，平均（24.59±0.87）kg/m2。HBV DNA陰性組中男性27例，女性13例；年齡33～69歲，平均（45.28±2.96）歲；BMI為21～27 kg/m2，平均（24.36±0.72）kg/m2。另選取同期來(lái)我院體檢的健康志愿者50例作為對(duì)照組。對(duì)照組受試者入組前兩周未出現(xiàn)炎癥性疾病，各項(xiàng)生命體征指標(biāo)均為正常。對(duì)照組中男性35例，女性15例；年齡32～71歲，平均（46.29±3.37）歲；BMI為21～30 kg/m2，平均（24.26±0.79）kg/m2。三組受檢者的性別、年齡和BMI比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究獲得我院倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行。

1.2 檢測(cè)方法對(duì)照組受檢者于體檢當(dāng)天，HBV DNA陽(yáng)性組和HBV DNA陰性組患者于入院次日抽取清晨空腹靜脈血5 mL，以離心半徑12 cm、3 500 r/min的速率離心12 min，收集上清液置于冰箱中保存待測(cè)。血清sVAP-1、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、DNMT1、Tim-3、白介素-4（IL-4）水平采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自南京賽泓瑞生物科技有限公司。采用貝克曼DXC800全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定患者的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、白蛋白（Alb）、總膽紅素（TBIL）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）及HBV DNA水平，檢測(cè)中所用試劑盒購(gòu)自上海江萊生物科技有限公司。操作均嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)完成。

1.3 觀察指標(biāo)比較三組受檢者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平及肝功能指標(biāo)及炎癥因子水平；分析患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平與肝功能指標(biāo)及炎癥因子的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS20.0軟件行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析及LSD-t檢驗(yàn)。經(jīng)Pearson線性相關(guān)性分析血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平與肝功能指標(biāo)及炎癥因子的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受檢者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平比較HBV DNA陽(yáng)性組、HBV DNA陰性組患者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平明顯高于對(duì)照組，且HBV DNA陽(yáng)性組明顯高于HBV DNA陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 三組受檢者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平比較（±s）

表1 三組受檢者的血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與HBV DNA陰性組比較，bP＜0.05。

組別對(duì)照組HBV DNA陰性組HBV DNA陽(yáng)性組F值P值例數(shù)50 40 53 sVAP-1（ng/mL）184.64±54.19 493.13±93.11a 762.75±102.05ab 23.482 0.001 DNMT1（μg/L）25.66±3.18 38.59±4.24a 51.37±5.29ab 30.472 0.003 Tim-3（%）5.16±0.93 13.28±2.35a 24.58±4.39a 24.582 0.001b

2.2 三組受檢者的肝功能指標(biāo)及炎癥因子比較HBV DNA陽(yáng)性組、HBV DNA陰性組患者的TNF-α、IL-4、ALT、AST、TBIL較對(duì)照組高，且HBV DNA陽(yáng)性組較HBV DNA陰性組高，Alb水平較對(duì)照組低，且HBV DNA陽(yáng)性組明顯低于HBV DNA陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表2。

表2 三組受檢者的肝功能指標(biāo)及炎癥因子比較（±s）

表2 三組受檢者的肝功能指標(biāo)及炎癥因子比較（±s）

注：與對(duì)照組比較，aP＜0.05；與HBV DNA陰性組比較，bP＜0.05。

組別對(duì)照組HBV DNA陰性組HBV DNA陽(yáng)性組F值P值例數(shù)50 40 53 TNF-α（pg/mL）15.18±2.77 23.24±2.68a 31.53±2.87ab 18.237 0.005 IL-4（ng/L）4.72±0.93 13.56±3.41a 21.29±4.43ab 16.485 0.007 ALT（U/L）18.38±3.09 38.25±5.26a 52.96±9.32ab 27.493 0.001 Alb（g/L）66.89±6.12 51.57±5.25a 39.43±4.05ab 28.462 0.001 AST（U/L）16.19±3.23 35.68±5.17a 49.31±6.06ab 25.753 0.001 TBIL（μmol/L）9.23±2.25 19.71±4.36a 37.29±3.25ab 21.374 0.002

2.3 患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平與肝功能指標(biāo)及炎癥因子的相關(guān)性經(jīng)Pearson線性相關(guān)性分析結(jié)果顯示，sVAP-1、DNMT1、Tim-3與AST、TNF-α、ALT、IL-4、TBIL呈正相關(guān)，而與Alb呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 患者血清sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平與肝功能指標(biāo)及炎癥因子的相關(guān)性

3 討論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球范圍內(nèi)有過(guò)HBV感染經(jīng)歷者約有20億人，且目前世界范圍的CHB患者約有3.5億人[7]。而有關(guān)CHB的早期檢測(cè)一直存在困難，因此，尋找能夠早期發(fā)現(xiàn)及判斷CHB病情的血清生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)改善CHB患者預(yù)后意義重大。CHB在失代償期后會(huì)逐漸發(fā)展為肝硬化，而肝細(xì)胞的持續(xù)受損也可導(dǎo)致肝纖維化，從而導(dǎo)致患者肝功能下降，但是僅僅依據(jù)單純的肝功能水平檢測(cè)并無(wú)法徹底的判斷CHB患者病情嚴(yán)重程度[8-9]。既往也有研究表明，炎癥反應(yīng)激活在CHB的病情進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[10]。HBV在反復(fù)感染肝細(xì)胞過(guò)程中，可引起巨噬細(xì)胞對(duì)其的清除和巨噬，同時(shí)巨噬細(xì)胞還會(huì)分泌炎癥因子如TNF-α、IL-4等，從而介導(dǎo)肝細(xì)胞炎癥反應(yīng)及死亡[11]。VAP-1具有致炎效應(yīng)，常以水解形式sVAP-1參與著炎性反應(yīng)的發(fā)生機(jī)制[12]，但有關(guān)sVAP-1在CHB中的作用報(bào)道相對(duì)較少。DNMT1為催化DNA甲基化的重要調(diào)控分子，在肝癌中過(guò)表達(dá)，其中肝癌發(fā)病的主要原因與HBV感染有關(guān)，故DNMT1在CHB中的作用也被廣泛關(guān)注[13]。Tim-3為近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類負(fù)性免疫調(diào)控因子，Tim-3水平增加可誘導(dǎo)Thl細(xì)胞凋亡，而Thl/Th2平衡與CHB患者病情程度的關(guān)聯(lián)性具有重要意義[14]。

本研究結(jié)果顯示，CHB患者中肝功能異常，TNF-α、IL-4存在異常升高情況。Alb是反映肝臟代謝功能的重要指標(biāo)，ALT、AST、TBIL是反映肝臟炎性損傷的重要指標(biāo)。CHB患者中炎性因子被激活，可產(chǎn)生大量氧自由基，而氧自由基的過(guò)度生成又可攻擊肝細(xì)胞，促進(jìn)肝臟炎癥反應(yīng)發(fā)生，影響肝細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)及基因表達(dá)，加劇肝細(xì)胞炎性損傷，降低患者肝功能[15]。本次研究結(jié)果還顯示，CHB患者中的sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平存在異常升高，可見(jiàn)上述三種指標(biāo)均參與著CHB的疾病進(jìn)展。有研究表明炎癥可導(dǎo)致sVAP-1水平明顯升高，血清sVAP-1水平可能是炎癥性肝病疾病活動(dòng)度的潛在標(biāo)志物[16]。Tim-3是一種T淋巴細(xì)胞負(fù)性共刺激性因子，高西陽(yáng)等學(xué)者的研究表明，CHB患者外周血單核細(xì)胞Tim-3表達(dá)上調(diào)，且Tim-3/galectin-9通路能夠促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)的單核細(xì)胞的炎癥因子的分泌[17]。表觀遺傳是指在未改變基因序列的情況下改變基因表達(dá)，在細(xì)胞的增殖、生長(zhǎng)中可以穩(wěn)定傳遞給子代。DNA甲基化為表觀遺傳學(xué)研究最多的機(jī)制之一，而DNA甲基化可通過(guò)調(diào)節(jié)DNMT1影響疾病進(jìn)展。以往的研究證實(shí)HBV感染可以上調(diào)DNMT1表達(dá)[18]。本研究Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，sVAP-1、DNMT1、Tim-3與TNF-α、IL-4、ALT、AST、TBIL呈正相關(guān)，而與Alb呈負(fù)相關(guān)。肝臟的主要功能有物質(zhì)代謝、排泄、分泌、生物轉(zhuǎn)化等，肝細(xì)胞一旦受損，則影響肝臟功能，ALT、AST、TBIL、Alb可有效反映肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的儲(chǔ)備功能及肝細(xì)胞慢性損傷發(fā)生的嚴(yán)重程度。TNF-α、IL-4可有效反映CHB患者炎癥嚴(yán)重程度，而sVAP-1、DNMT1、Tim-3與肝功能、炎癥指標(biāo)均存在相關(guān)性，可見(jiàn)sVAP-1、DNMT1、Tim-3均可能參與了肝臟炎性病理?yè)p傷過(guò)程，可考慮作為CHB診斷的血清學(xué)指標(biāo)。

綜上所述，CHB患者的sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平、肝功能指標(biāo)及炎癥因子指標(biāo)存在異常升高，且sVAP-1、DNMT1、Tim-3水平與肝功能指標(biāo)及炎癥因子指標(biāo)具有相關(guān)性，三者有望成為監(jiān)測(cè)CHB患者病情的有效指標(biāo)。