李佳 王謀琛

摘要：目的： 建立鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液實驗室轉(zhuǎn)移的細菌內(nèi)毒素方法學(xué)確認。方法：采用《中國藥典》細菌內(nèi)毒素檢查法-凝膠法。結(jié)果：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液稀釋最大濃度為0.625mg/ml時，對鱟試劑檢查無干擾作用。結(jié)論：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液在實驗室轉(zhuǎn)移后，按此方法進行細菌內(nèi)毒素檢查法是可行的。

關(guān)鍵詞：鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液;細菌內(nèi)毒素檢查法;干擾試驗

【中圖分類號】R97 【文獻標識碼】A 【文章編號】2107-2306（2021）14-01

一、目的

根據(jù)《鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液》質(zhì)量標準【細菌內(nèi)毒素】檢查項下規(guī)定，進行實驗室轉(zhuǎn)移的細菌內(nèi)毒素方法學(xué)確認，確定樣品對不同廠家鱟試劑的最小不干擾倍數(shù)或最大不干擾濃度，以及樣品日常檢驗的稀釋倍數(shù)或稀釋濃度。

二、試驗方案：

1、試驗依據(jù)：《鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液》質(zhì)量標準

《中國藥典》細菌內(nèi)毒素檢查法-凝膠法

2、限值：L=0.6 EU/mg

3、方法：選擇兩個廠家的鱟試劑分別進行鱟試劑靈敏度復(fù)核、干擾試驗預(yù)實驗、干擾試驗、細菌內(nèi)毒素試驗，試驗溫度：37±1℃，試驗保溫時間60±2min。

4、儀器和試藥：

恒溫水浴鍋、漩渦混合器、無熱原吸頭、移液槍、0.25 EU/ml鱟試劑（湛江安度斯生物有限公司、福州新北生化工業(yè)有限公司）、細菌內(nèi)毒素工作標準品、細菌內(nèi)毒素檢查用水（BET）（均為湛江安度斯生物有限公司）、3批樣品（規(guī)格：100ml：左氧氟沙星0.5g與氯化鈉0.9g）。

三、試驗操作及結(jié)果：

1、靈敏度復(fù)核試驗

取細菌內(nèi)毒素工作標準品用BET水溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，分別加入兩廠家鱟試劑中，結(jié)果兩廠家鱟試劑靈敏度測定值λC均為0.25EU/ml，均在0.5～2.0λ之間，鱟試劑靈敏度復(fù)核合格，可用于細菌內(nèi)毒素檢查。

2、干擾試驗預(yù)試驗

2.1樣品有效稀釋（MVC）的計算

公式MVC=λ/L

其中：L為樣品限值L=0.6 EU/mg，λ為鱟試劑標示靈敏度，取目前市售鱟試劑最小靈敏度λ=0.03EU/ml，確定最大稀釋倍數(shù)不得超過MVD=cL/λ0.03=100。

2.2試驗操作

取細菌內(nèi)毒素標準品，加樣品溶液稀釋，制成含2λ的供試品原液陽性對照溶液;另取樣品，加BET水制成稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的樣品溶液（NPC組1、NPC組2），分別取原液、稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍的樣品溶液，分別加入1.0EU/ml內(nèi)毒素標準品溶液，即得含2λ的稀釋2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍的樣品陽性對照溶液（PPC組1、 PPC組2）。采用兩個廠家的鱟試劑分別進行試驗，同時加BET水作陰性對照（NC），加2λ濃度內(nèi)毒素標準品溶液作陽性對照（PC），結(jié)果見表1。

由表1可見，樣品1的最大不干擾濃度為0.625mg/ml，在該濃度下樣品對鱟試劑檢查無干擾作用，可進行正式干擾試驗。

3、干擾試驗

取3批樣品，根據(jù)干擾預(yù)試驗結(jié)果，將樣品稀釋終濃度為0.625mg/ml做為3批樣品溶液。分別用兩廠家鱟試劑進行干擾試驗，將細菌內(nèi)毒素工作標準品用0.625mg/ml樣品溶液溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，每個濃度平行做4管，作為干擾試驗系列（Et系列）;另將細菌內(nèi)毒素工作標準品用BET水溶解稀釋，制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四個濃度的內(nèi)毒素標準溶液，每個濃度平行做4管，作為鱟試劑標示靈敏度的對照系列（Es系列）;2管作為供試品溶液檢查（S），另外2管作為陰性對照（NC），結(jié)果見表2。

由表2可見，ES=0.25，在0.5λ～2.0λ之間，Et也在0.5 ES～2.0 ES之間，認為樣品在該濃度時對細菌內(nèi)毒素檢查無干擾作用，符合細菌內(nèi)毒素檢查有效性的要求，可以確定樣品的最大不干擾濃度為0.625mg/ml。

4、細菌內(nèi)毒素檢查

取樣品3批，分別加BET水稀釋成濃度為0.625mg/ml的溶液，進行細菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果樣品和陰性對照均為陰性，樣品陽性和陽性對照均為陽性，表明實驗有效。樣品管均為陰性，表明3批樣品中均未檢出細菌內(nèi)毒素，與干擾試驗結(jié)果一致。

四、結(jié)論：

經(jīng)以上試驗結(jié)果確定，樣品在最大不干擾濃度為0.625mg/ml的濃度下對兩個廠家鱟試劑不干擾。實驗室轉(zhuǎn)移后，鹽酸左氧氟沙星氯化鈉注射液按此方法進行細菌內(nèi)毒素檢測和質(zhì)量控制是可行的。

參考文獻：

[1]《中國藥典》細菌內(nèi)毒素檢查法

[2]《中國藥品檢驗標準操作規(guī)范》細菌內(nèi)毒素檢查法