沈偉濤，蔡高陽，羅 穎，李志楊，林凱煌，辜紅妮，林偉鑫，陳業(yè)晞

(汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院1．檢驗科，2．胃腸外科，3．甲乳疝外科，廣東 汕頭 515041)

結(jié)直腸癌是最為常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率在國內(nèi)外均呈逐年上升趨勢[1-2]。手術(shù)、放療和化療是治療結(jié)直腸癌的三大手段，尤其是化療，可抑制或殺死腫瘤細胞，改善預(yù)后，然而由于細胞毒性作用，化療在殺死腫瘤細胞的同時會產(chǎn)生許多副作用，最常見的是胃腸道反應(yīng)和骨髓抑制，誘發(fā)免疫功能紊亂以及炎癥反應(yīng)[3]。腸道菌群是結(jié)直腸癌的相關(guān)關(guān)鍵因素之一[4-5]，通過益生菌干預(yù)，有助于減輕癌癥治療過程的不利影響[6]。微生態(tài)制劑雙歧桿菌四聯(lián)活菌片已廣泛應(yīng)用于腹瀉、便秘、功能性消化不良、腸炎的臨床治療，它可以穩(wěn)定胃腸道菌群，且尚未報道有明顯不良反應(yīng)。目前國內(nèi)關(guān)于雙歧桿菌四聯(lián)活菌片輔助治療結(jié)直腸癌術(shù)后化療的報道較少。本研究觀察雙歧桿菌四聯(lián)活菌片對結(jié)直腸癌患者化療所致胃腸道毒副作用的防治作用，同時測定化療前后急性時相反應(yīng)蛋白(C反應(yīng)蛋白、白蛋白、纖維蛋白原)、免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、補體C3、C4、外周血白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞計數(shù)的變化，探討雙歧桿菌四聯(lián)活菌片對結(jié)直腸癌患者化療的輔助作用，為結(jié)直腸癌患者化療期間應(yīng)用微生態(tài)制劑輔助治療提供臨床參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2019年12月汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的結(jié)直腸癌患者60例，隨機分為觀察組和對照組，各30例。所有入選病例均經(jīng)病理確診為結(jié)直腸癌，已行結(jié)直腸癌根治術(shù)，出院后至化療前均無服用微生態(tài)制劑和抗生素。排除入組前接受過其他抗腫瘤治療，合并自身免疫性疾病及肝、腎功能不全者。本研究經(jīng)汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院倫理委員會審查批準，入組患者均知情同意。

1.2 試劑和儀器

IgA、IgG、IgM、C3、C4、白蛋白、纖維蛋白原、白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞檢測試劑盒均購自美國貝克曼庫爾特公司，C反應(yīng)蛋白檢測試劑盒購自寧波美康生物公司。AU5400全自動生化分析儀、ACL TOP 700全自動血凝分析儀、IMMAGE 800特定蛋白分析儀、LH 780全自動血細胞分析儀均購自美國貝克曼庫爾特公司。

1.3 方法

對照組采用XELOX化療方案進行化療，觀察組在對照組的基礎(chǔ)上口服雙歧桿菌四聯(lián)活菌片(0.5 g/片，杭州遠大生物制藥有限公司，3次/d，3片/次)至出院停止?；颊叩谝淮稳朐夯熂俺鲈簳r收集糞便，直接涂片，待干燥后進行革蘭氏染色，用油鏡觀察桿菌與球菌比例。判定標準根據(jù)《腸道菌群糞便涂片檢查圖譜》[7]，參考區(qū)間為(73.5～97.5)∶(2.5～26.5)，超出此范圍判定為腸道菌群失調(diào)。觀察記錄患者化療過程中惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、便秘、胃納差等胃腸道反應(yīng)?；颊叩谝淮稳朐夯熂俺鲈簳r于清晨空腹采集靜脈血2 mL于促凝干燥管中，避免溶血，分離血清。采集靜脈血1.8 mL置于1∶9的枸櫞酸鈉抗凝管中，采集靜脈血2 mL置于EDTA鉀抗凝管中，搖勻待檢。分別測定IgA、IgG、IgM、C3、C4、白蛋白、纖維蛋白原、白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞等水平的變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析，符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，組間比較用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)表示，組間比較用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料

觀察組患者年齡44～77(59.93±9.29)歲，對照組年齡24～77(56.90±10.33)歲。兩組年齡、性別、病變部位、TNM分期等一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，見表1。

表1 兩組患者一般資料比較 (例，n=30)

2.2 兩組患者糞便桿菌和球菌比例失調(diào)情況

對照組患者化療后糞便桿菌和球菌比例失調(diào)例數(shù)高于化療前(分別為10例和2例，P＜0.05)?；熀笥^察組桿菌和球菌比例失調(diào)例數(shù)低于對照組(分別為2例和10例，P＜0.05)。

2.3 兩組患者體液免疫指標

兩組患者化療前后及組間IgA、IgG、IgM、C3、C4進行比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，見表2。

表2 兩組患者化療前后體液免疫指標比較 (g/L，±s，n=30)

表2 兩組患者化療前后體液免疫指標比較 (g/L，±s，n=30)

IgG化療前10.91±2.01 11.70±2.16組別觀察組對照組IgA化療前1.85±0.89 2.22±0.97化療后1.81±0.87 2.14±0.94化療后10.65±2.00 11.44±2.13 IgM化療前1.51±0.59 1.30±0.57化療后1.48±0.60 1.25±0.55 C3化療前0.97±0.24 1.08±0.28化療后1.01±0.16 1.08±0.19 C4化療前0.23±0.05 0.24±0.05化療后0.23±0.05 0.23±0.04

2.4 兩組患者炎癥指標

化療后，對照組C反應(yīng)蛋白升高(P＜0.05)，且高于觀察組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而觀察組白蛋白、纖維蛋白原、C反應(yīng)蛋白在化療前后差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，見表3。

表3 兩組患者化療前后炎癥標志物比較 (±s，n=30)

表3 兩組患者化療前后炎癥標志物比較 (±s，n=30)

1)與對照組化療后相比，P＜0.05；2)與對照組化療前相比，P＜0.05。

化療后43.01±3.65 41.18±4.95化療后2.24±1.951)4.47±2.452)組別觀察組對照組白蛋白/(g/L)化療前43.09±3.66 42.26±4.65纖維蛋白原/(g/L)化療前4.04±0.60 4.08±0.64化療后3.88±0.58 3.97±0.63 C反應(yīng)蛋白/(mg/L)化療前2.68±2.28 1.85±1.65

2.5 兩組患者白細胞計數(shù)

觀察組化療前后白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，對照組化療后白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞均降低，且白細胞、淋巴細胞低于觀察組(均P＜0.05)。見表4。

表4 兩組患者化療前后白細胞分類計數(shù)比較 (×109/L，±s，n=30)

表4 兩組患者化療前后白細胞分類計數(shù)比較 (×109/L，±s，n=30)

1)與對照組化療后相比，P＜0.05；2)與對照組化療前相比，P＜0.05。

化療后5.46±1.491)4.52±1.292)組別觀察組對照組白細胞計數(shù)化療前5.85±1.67 6.03±1.81中性粒細胞計數(shù)化療前3.50±1.14 3.63±1.47化療后3.09±1.08 2.58±1.212)淋巴細胞計數(shù)化療前1.66±0.51 1.68±0.57化療后1.51±0.431)1.17±0.372)

2.6 胃腸道反應(yīng)

化療期間，對照組患者腹痛2例、腹瀉3例、胃納差4例、便秘1例，惡心5例、嘔吐3例，胃腸道反應(yīng)合計18例；觀察組胃納差2例、惡心1例、嘔吐2例，胃腸道反應(yīng)合計5例，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

微生態(tài)制劑(益生菌雙歧桿菌四聯(lián)活菌片)含嬰兒雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞腸球菌、蠟樣芽孢桿菌，具有調(diào)節(jié)腸道菌群、抑制腸道致病菌、維持正常腸道菌群生長的作用，臨床上主要用于治療與腸道菌群失調(diào)相關(guān)的腹瀉、便秘、功能性消化不良。結(jié)直腸癌術(shù)后輔助化療可以明顯降低復(fù)發(fā)率，但化療藥物可引起一系列副作用。通過補充益生菌可以加強腸道菌群動態(tài)平衡、減少化療副作用、提高化療效果和改善預(yù)后[6,8]。

化療藥物對腸道上皮細胞產(chǎn)生一定的破壞，能促使腸道菌群的易位，進而導(dǎo)致腸道菌群失調(diào)[9-10]。而補充益生菌，可以在腸道內(nèi)奪氧、占位，形成黏膜屏障，拮抗致病菌，降低腸道內(nèi)pH值，進而調(diào)整腸道菌群失調(diào)，維持腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡[11-12]。本研究結(jié)果顯示對照組患者化療后糞便桿菌和球菌比例失調(diào)例數(shù)高于化療前(P＜0.05)?；熀笥^察組桿菌和球菌比例失調(diào)例數(shù)低于對照組(P＜0.05)，提示雙歧桿菌四聯(lián)活菌片對減輕結(jié)直腸癌患者化療過程所導(dǎo)致的腸道菌群失調(diào)具有一定的作用。

化療能夠誘發(fā)炎癥反應(yīng)[13]，而C反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原、白蛋白是反映機體炎癥狀況的指標，可以用于評估化療過程機體的炎癥反應(yīng)。益生菌具有調(diào)控宿主免疫細胞的抗炎作用[14]。本研究結(jié)果，化療后對照組C反應(yīng)蛋白升高(P＜0.05)，而觀察組C反應(yīng)蛋白、纖維蛋白原、白蛋白在化療后均未升高，提示雙歧桿菌四聯(lián)活菌片可能具有抑制炎癥的作用。

化療藥物常見的副作用之一是引起骨髓抑制，可引起全血細胞減少，甚至危及患者生命[15]。本研究對照組化療后白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞計數(shù)均降低(均P＜0.05)，而觀察組化療前后白細胞、中性粒細胞、淋巴細胞計數(shù)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，提示雙歧桿菌四聯(lián)活菌片有可能起到減輕骨髓抑制的作用。化療藥物的另一個常見副作用是胃腸道反應(yīng)[16]。本研究結(jié)果，對照組患者化療期間胃腸道反應(yīng)18例，而觀察組胃腸道反應(yīng)5例，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。提示補充雙歧桿菌四聯(lián)活菌片可以緩解化療期間的胃腸道反應(yīng)。

此外，本研究兩組患者化療前后及組間IgA、IgG、IgM、C3、C4比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.05)，不排除與本研究觀察時間較短有關(guān)。本研究存在樣本量小等不足因素，因此，后續(xù)需要更多的病例進行實驗觀察，并且盡可能借助高通量測序方法了解腸道菌群結(jié)構(gòu)在此過程的具體變化以及菌群功能、代謝等情況，更好地觀察臨床指標與腸道菌群的相關(guān)性。

綜上所述，微生態(tài)制劑(雙歧桿菌四聯(lián)活菌片)能夠影響結(jié)直腸癌化療患者腸道菌群結(jié)構(gòu)，并能夠緩解患者的胃腸道反應(yīng)，減少炎癥反應(yīng)，提高結(jié)直腸癌患者化療的耐受性。