陶淵喆，于曉琨，劉蘭花，朱志杰*

（通化金馬藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司·吉林通化·134003）

琥珀酸是松屬植物的樹脂久埋于地下而形成的琥珀為原料材,經(jīng)過提取濃縮純化后制備而成。琥珀酸為無色結(jié)晶;分子式為C4H5O4。相對(duì)密度1.572(25/4℃),熔點(diǎn)188℃,在235℃時(shí)分解;在減壓下蒸餾可升華;能溶于水,微溶于乙醇、乙醚和丙酮中。

1 儀器與試藥

富馬酸（百靈威）；琥珀酸（TRC）；琥珀酸（南京化學(xué)試劑股份有限公司210118010C）；沃特世高效液相色譜儀；電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Dikma Diamonsil Plus C18（4.6mm×250mm,5μm）；流動(dòng)相：0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液；流速：1.0 ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)：195nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣量20μl。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

琥珀酸對(duì)照品適量,精密稱定,加水定量制成0.2mg·ml-1的溶液,作為琥珀酸對(duì)照品貯備液；富馬酸對(duì)照品適量,精密稱定,加水定量制成0.1 mg·ml-1的溶液,作為富馬酸對(duì)照品貯備液；取琥珀酸對(duì)照品貯備液與富馬酸對(duì)照品貯備液適量,加水定量制成每1ml中含琥珀酸20g、富馬酸1g的溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

2.2.2.1供試品溶液1取本品約20mg,精密稱定置20ml量瓶中,加水溶解并稀釋制成1mg·ml-1的溶液,搖勻,即得；

2.2.2.2供試品溶液2取本品約400mg,精密稱定置20ml量瓶中,加水溶解并稀釋制成20 mg·ml-1的溶液,搖勻,即得。

2.2.2.3空白溶劑

實(shí)驗(yàn)用水。

2.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

分別取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和空白溶劑各20μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖。由圖1可知,在本文建立的色譜條件下,琥珀酸的保留時(shí)間10.262min、琥珀酸中各對(duì)照品和其他組分達(dá)到了完全分離,空白溶劑無干擾。

圖1 和空白溶劑（A）、對(duì)照品溶液（B）、樣品溶液（C）（D）色譜圖

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密吸取富馬酸對(duì)照品貯備液1ml、琥珀酸對(duì)照品貯備液10ml,置500ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻,作為線性溶液1；精密吸取富馬酸對(duì)照品貯備液1.2ml、琥珀酸對(duì)照品貯備液25ml,置500ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻,作為線性溶液2；精密吸取富馬酸對(duì)照品貯備液1ml、琥珀酸對(duì)照品貯備液10ml,置100ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻,作為線性溶液3；精密吸取富馬酸對(duì)照品貯備液1.5ml、琥珀酸對(duì)照品貯備液15ml,置100ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻,作為線性溶液4；精密吸取富馬酸對(duì)照品貯備液2ml、琥珀酸對(duì)照品貯備液20ml,置100ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻,作為線性溶液5；精密量取20μl,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,以峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,琥珀酸在3.987～39.876μg·ml-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,其線性回歸方程為A=669.27C+208.73（r=0.9992）；結(jié)果表明對(duì)照品在相應(yīng)濃度范圍內(nèi),樣品濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液,日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣3次和日間進(jìn)樣3次（連續(xù)3天,每天1次）,記錄色譜圖的峰面積。結(jié)果表明日內(nèi)、日間精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取供試品溶液,分別于0、1、3、6、12h,注入液相色譜儀,記錄色譜圖的峰面積,RSD為0.43%,結(jié)果表明供試品溶液放置12h穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取批號(hào)為210118010C的琥珀酸6份,按供試品溶液制備方法制備并測(cè)定,記錄色譜圖的峰面積,RSD為0.46%。

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的琥珀酸400mg,共6份,依次按照2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。取6份供試品溶液1ml精密加入濃度為0.199mg·ml-1琥珀酸對(duì)照品貯備液1ml,進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1。

表1 琥珀酸回收率測(cè)定結(jié)果

3 討論

高效液相色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)試驗(yàn)的液相條件下,琥珀酸與富馬酸的分離良好,雜質(zhì)含量均符合要求,且空白溶劑無干擾,表明此方法可行、可滿足實(shí)驗(yàn)要求。