孟迪，姚紅玉，于陶晶，田悅*

（通化師范學院·吉林通化·134002）

人參（Panax ginseng C.A.Mey.）有著百草之王的美譽,溫性,根甘而略苦,具有滋補強身、生津止咳、調(diào)氣養(yǎng)血的功效。人參中存在多種化學成分,研究人員認為占據(jù)3%～4%比例的人參皂苷在其中扮演的角色最為矚目。隨著炮制方法的不同,所得產(chǎn)物成分組成也會出現(xiàn)差異[1～2]?，F(xiàn)在的市場中出現(xiàn)頻率較高的炮制品便是紅參,其優(yōu)勢在于和鮮人參比較起來保存更容易,同時將有害于神經(jīng)的田七素含量有效減少[3],還產(chǎn)生了可有助于抗腫瘤的Rh2與Rg3等新的人參皂苷[4]。本文對文獻已報道的紅參炮制工藝進行了檢索,大量研究表明這些有效成分的含量與紅參炮制過程中的蒸制時間、蒸制溫度、烘干時間、烘干溫度等因素條件有著密切的聯(lián)系[5],有許多企業(yè)所采取的不同炮制工藝所得產(chǎn)物的有效成分含量存在很大的差異,因此也導致了市場上紅參有優(yōu)有劣。更有一些企業(yè)過于注重產(chǎn)品表面而忽視了對內(nèi)在質(zhì)量的保證,各企業(yè)間展開的惡性競爭也阻礙了紅參在國際市場上與高麗紅參、西洋紅參的競爭力[6～7]。

本論文通過改用高壓蒸汽滅菌鍋來進行紅參的炮制,以人參總皂苷為檢測指標,選擇正交實驗設計方法,對紅參炮制工藝進行改良,為紅參的炮制及其應用提供參考。

1 實驗儀器與材料

1.1 試藥

鮮人參；人參皂苷Re（純度＞98%,產(chǎn)品批號：2018041501）；甲醇（AR級）；乙酸乙酯（AR級）；冰醋酸；高氯酸；香草醛；正丁醇。

1.2 儀器

紫外可見分光光度計（TU-1901型北京普析通用儀器有限公司）；電子天平（SQP型賽多利斯科學儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（DHG-9245A型上海一恒科學儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（HWS26型上海一恒科學儀器有限公司）；高壓蒸汽滅菌鍋（DSX-18L型上海申安醫(yī)療器械有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 紅參炮制方法

挑選鮮人參,稱重,用毛刷將人參刷凈,控干水分再次稱重。為防止人參出現(xiàn)破裂,用紗布將人參包緊放入高壓蒸汽滅菌鍋中進行蒸制。人參蒸制完成后,取出,在烘箱內(nèi)進烘干,烘干溫度為70℃[6]。

2.2 正交試驗表的設計

經(jīng)過調(diào)查與研究,紅參炮制過程中影響紅參中有效成分的因素有很多,本實驗采用三因素四水平的正交實驗進行紅參炮制工藝優(yōu)化,以已有的炮制工藝與文獻資料為依據(jù)[7～8],改用高壓蒸汽滅菌鍋進行炮制,在改進工藝時選擇的因素包括烘干時長、蒸制溫度與蒸制時間,設計L9（34）正交實驗表,因素水平見表1,正交試驗詳見表2。

表1 因素水平

表2 正交試驗

2.3 供試品溶液的制備

分別稱取2g紅參細粉加入錐形瓶,加入甲醇（AR）20mL,放至超聲波儀器中進行超聲處理15min,過濾,將濾液放在水浴60℃中揮干溶劑,加入20mL蒸餾水溶解進行除雜處理,將溶液放至分液漏斗中,首先加入20mL乙酸乙酯（AR）進行第一次萃取除雜,將下層液放出再次放至分液漏斗中,加入20mL水飽和正丁醇進行第二次萃取除雜。棄掉下層液,上層溶液從上口倒出保存,在90℃水浴中揮干溶劑,通過甲醇溶解溶質(zhì),并定容至10mL,備用[9～10]。

2.4 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷Re對照品,加甲醇制成每1mL含1.836mg的溶液,搖勻,即得。

2.5 測定波長的選擇

量取適量對照品溶液至具塞試管中,加入0.8mL高氯酸溶液、0.2mL5%香草醛-冰醋酸溶液,混勻,60℃水浴加熱15min,2min冰浴處理,加入5mL冰醋酸,混勻后室溫中靜置。在400～800nm波長下展開掃描,最終發(fā)現(xiàn),當波長在540nm時人參皂苷Re對照品液吸收最大,所以確定540nm為人參皂苷Re的最佳檢測吸收波長。詳見圖1。

圖1 人參皂苷紫外可見光譜吸收曲線

2.6 標準曲線的繪制

在帶刻度具塞試管中分別加入0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL人參皂苷Re對照品液,蒸餾水補充至1mL,加入0.8mL高氯酸溶液與0.2mL5%香草醛-冰醋酸溶液,混勻,在60℃水浴中加熱15min,進行冰浴處理2min,加入5mL冰醋酸,混勻后在室溫中靜置?？v坐標為吸光度值A(chǔ),橫坐標為人參皂苷Re,展開回歸方程擬合,所得結(jié)果為y=28.131x+0.0149（R2=0.9994）,詳見圖2,其結(jié)果顯示在0.0100～0.0267mg·mL-1濃度中時有著較好的線性關(guān)系。

圖2 人參總皂苷標準曲線

2.7 供試品處理測定

分別取9組供試品液,加入0.8mL高氯酸溶液與0.2mL5%香草醛-冰醋酸溶液,混勻,60℃水浴加熱15min,冰浴處理2min,加入5mL冰醋酸,混勻后在室溫中靜置。以蒸餾水為空白對照,在波長540nm時進行測定。

2.8 正交實驗結(jié)果

將9組紅參樣品進行測量并計算含量,結(jié)果見表3。

表3 紅參中人參總皂苷的含量

2.9 正交實驗方差分析

根據(jù)表3、表4、表5能夠發(fā)現(xiàn),人參總皂苷與蒸制時長存在著較為明顯的關(guān)聯(lián)（P＜0.01）,因素蒸制溫度有一定影響（P≤0.05）,三種不同因素影響為A＞B＞C。以均值為研究視角出發(fā),烘干時長水平的影響程度為水平2＞3＞1,蒸制溫度水平的影響程度為水平1＞3＞2,蒸制時長水平的影響程度為水平3＞1＞2。反映出對于不同水平而言,A3B1C2為最佳工藝水平,即蒸制時間5h,蒸制溫度102℃,烘干時間10h時紅參中人參總皂苷質(zhì)量分數(shù)最高。

表4 人參總皂苷的均值與R值分析

表5 人參總皂苷的方差分析

2.10 驗證實驗

根據(jù)本實驗的最佳炮制工藝進行三批紅參的驗證實驗,數(shù)據(jù)反映出實驗改進的工藝具備較好的效果,結(jié)果見表6。

表6 3批紅參炮制工藝驗證實驗結(jié)果

從上表可知本實驗的最佳炮制工藝穩(wěn)定可行,紅參中人參總皂苷含量最高。

3 結(jié)論與討論

紅參是人們生活中經(jīng)常用到的調(diào)養(yǎng)保健類藥品,也作為一種中藥經(jīng)常被用到藥物制劑當中去。經(jīng)過炮制的人參會產(chǎn)生多種新成分,這些成分在某些方面具有較好的藥理活性,而且紅參相比鮮人參而言更容易保存,人參之所以不如紅參更容易得到消費者的青睞可能正因為這些原因。

本實驗的最佳炮制工藝為:102℃下蒸制5小時,在70℃下烘12h,干燥溫度一般認為50～70℃能最大程度減少有效成分的損失[11]。本實驗的創(chuàng)新在于使用高壓蒸汽滅菌鍋來進行紅參炮制,其優(yōu)點是通過高壓的方法對紅參進行炮制,能使溫度均勻快速地傳遞,從而達到最佳工藝效果。

市場上的紅參炮制工藝仍多種多樣[12]。建議在今后的紅參炮制中可依據(jù)不同人群的不同需求采用不同的炮制方法,達到充分利用紅參或達到最大藥效發(fā)揮的目的,同時制定明確的法律法規(guī)來約束企業(yè)的不良行為,為改善中國的紅參市場打下基礎(chǔ)。