劉亞虓 張潘潘 顏偌楠 戚巍瓊 鄧 翀 姜 祎 張化為

陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，陜西 咸陽 712046

蘆根來源于禾本科植物蘆葦PhragmitescommunisTrin.新鮮或干燥的根莖[1]，性味甘、寒，歸肺、胃經(jīng)，具有清熱生津、除煩、止嘔、利尿等作用，常被廣泛用于治療萎縮性胃炎、大葉性肺炎、便秘等疾病[2]，還有用其治療干燥綜合征的報道[3]。近年來，蘆根在預(yù)防炎癥、感冒等方面起到了良好的作用[4]。

發(fā)熱是指機體的體溫調(diào)定點在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)協(xié)調(diào)作用下上移而誘發(fā)的一種適應(yīng)性反應(yīng)，其作用機制是由致熱原的刺激使體溫中樞調(diào)定點上移[5]。發(fā)熱通常是通過一些炎癥因子含量的變化來判斷，而發(fā)熱又使機體內(nèi)炎癥因子和前列腺素產(chǎn)生和釋放增多，引起全身炎癥從而導(dǎo)致體溫升高[6]。常用的致熱原有：脂多糖、2,4-二硝基酚、干酵母等[7]。本研究將通過干酵母致熱小鼠實驗并密切關(guān)注小鼠體溫變化，同時采用ELISA試劑盒測定發(fā)熱炎癥因子含量的變化來探討蘆根對小鼠發(fā)熱模型的解熱作用，以初步探討其解熱的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物 昆明種雄性小鼠60只，體重18～22 g，成都達碩實驗動物有限公司，動物許可證編號：SCXK(川)2020-030。實驗前置于溫度為20 ℃左右的環(huán)境中，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。

1.2 藥材與試劑 蘆根，市場購買(批號：20200401)，經(jīng)過陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院顏永剛教授鑒定其為禾本科植物蘆葦PhragmitescommunisTrin.的干燥根莖，0.9%氯化鈉注射液(國藥準字號H20196626)、IL-1β試劑盒、TNF-α試劑盒、cAMP試劑盒、PGE2試劑盒(上海優(yōu)選生物科技有限公司、批號：20200418)、高活性干酵母(安琪酵母股份有限公司)、對乙酰氨基酚片(成都恒瑞制藥有限公司)。

1.3 儀器 高速冷凍離心機(TG-16)、酶標儀(MULTISKAN GO)、電子體溫計(歐姆龍有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 樣品制備 稱取蘆根藥材約1 kg，以10倍量、8倍量的水煎煮提取兩次，提取時間2 h、1.5 h，合并兩次煎煮液，減壓回收溶劑，得到流浸膏，備用[8]。

1.4.2 發(fā)熱小鼠模型的制備 實驗前先適應(yīng)3 d，從第4 d開始測量小鼠體溫，將電子體溫計測溫探頭插入小鼠肛門內(nèi)2 cm記錄直腸體溫，每天按時測量1次，連續(xù)測量7 d。剔除體溫變化異常的小鼠，將檢測合格的60只小鼠隨機分為6組：空白組、模型組、陽性組、水樣(低、中、高劑量)組。每組10只[9-10]。

實驗采用灌胃給藥方式[11]，空白組和模型組給等體積的生理鹽水，陽性組給對乙酰氨基酚溶液，給藥組按蘆根水樣部位低、中、高劑量依次灌胃，連續(xù)7 d。造模前需要先禁食10 h，除空白組以外，其余組均在小鼠背部皮下注射20%酵母混懸液10 mL/kg，在注射酵母混懸液后1、2、3、4 h依次測量各組小鼠體溫[12]。

1.5 用ELISA試劑盒測量發(fā)熱小鼠下丘腦組織中發(fā)熱介質(zhì)含量

1.5.1 血樣采集 在上述6組小鼠測溫后，立即眼眶靜脈取血，在4 ℃，3500 r/min的條件下離心20 min，取上清液，置-20℃冰箱保存、待測[13]。

1.5.2 取下丘腦組織 上述6組小鼠眼眶靜脈取血后立即處死，于冰上操作取下丘腦，將取下的下丘腦放入1.5 mL離心管中，放到冰上，待全部取完后，將每組下丘腦組織用生理鹽水1∶9比例制備成10%的組織勻漿液，4 ℃，2000 r/min,離心10 min，后用移液槍取上清液，置-20℃冰箱保存、待測[14]。

1.5.3 相關(guān)發(fā)熱介質(zhì)含量測定 按照試劑盒操作規(guī)范，嚴格操作，測定數(shù)據(jù)[15]。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠體溫變化 如表1、圖1所示，在造模之前各組小鼠的體溫接近，除空白組外其余各組用20%酵母混懸液造模。除模型組體溫持續(xù)上升外，其余各組小鼠體溫在3 h達峰值，之后具有下降趨勢。

表1 各組干酵母所致發(fā)熱小鼠的體溫差值

圖1 各小鼠體溫變化折線圖

2.2 酵母混懸液致熱各組小鼠血清發(fā)熱介質(zhì)含量的比較 造模后，4 h取血清及下丘腦測定各發(fā)熱介質(zhì)含量，發(fā)現(xiàn)在IL-1β、TNF-α、cAMP、PGE2四個指標中模型組發(fā)熱介質(zhì)含量明顯升高且與空白組有顯著性差異，表明造模成功；而陽性組發(fā)熱介質(zhì)含量明顯下降，與模型組有顯著性差異，給藥組發(fā)熱介質(zhì)含量相對模型組均有不同程度的降低，但不同炎癥因子與劑量之間無明顯相關(guān)性，說明蘆根對干酵母致熱小鼠具有明顯的解熱作用。

表2 發(fā)熱介質(zhì)含量

3 討論

蘆根始載于《名醫(yī)別錄》，味甘性寒，具有清熱生津等作用，可用于熱病煩渴等癥的治療。臨床上外感發(fā)熱患者在處方配伍中可適當(dāng)加入蘆根，清熱生津而不傷人體正氣，有益于疾病愈后身體機能的恢復(fù)。

實驗以皮下注射酵母混懸液致熱小鼠為研究對象，對蘆根的解熱作用和清熱機制進行探討。通過對炎癥小鼠的體溫變化和體內(nèi)各炎癥因子水平的測定。分析發(fā)現(xiàn)，酵母混懸液致熱后，小鼠體溫在3 h左右達到峰值，之后體溫開始有下降趨勢，與文獻[16]中記載的嚙齒類動物體溫在6～8 h之間達到峰值不同。在實驗中通過連續(xù)給藥的方式使小鼠體溫下降，說明蘆根水提液具有解熱作用。為了測得小鼠體內(nèi)炎癥因子的變化，在給藥4 h后測定血清中IL-1β、TNF-α、cAMP及小鼠下丘腦中PGE2的含量。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)IL-1β分泌量過多時，會作用于下丘腦使機體發(fā)熱[17]；TNF-α通過直接刺激下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞或刺激巨噬細胞釋放白細胞介素-1(IL-1)而引起機體發(fā)熱[18]；cAMP可調(diào)節(jié)機體生理功能及物質(zhì)代謝，當(dāng)cAMP激活時，會導(dǎo)致心肌收縮，提供能量供給，使機體體溫上升[19]。當(dāng)以上三種炎癥因子水平降低時，機體可產(chǎn)生解熱作用。PGE2也是非常強的致熱物質(zhì)之一，能引起體溫上升，而清熱藥的作用位點是下丘腦的熱量控制中心，通過抑制環(huán)氧合酶的活性而減少前列腺素的合成，從而達到降低體溫的作用[20]。

低、中、高劑量組的蘆根水提取液對不同的炎癥因子含量變化規(guī)律不盡一致，這可能與中藥本身因劑量不同的雙向調(diào)節(jié)有關(guān)，與文獻[21]研究結(jié)果一致。本實驗結(jié)果表明，高劑量組的蘆根水提液使IL-1β、TNF-α及PGE2的含量明顯降低；中劑量組的蘆根水提液使cAMP的含量明顯降低，但整體而言，各個指標與模型組相比均有顯著性差異且呈下降趨勢，這與IL-1β、TNF-α、cAMP及PGE2上文所述的作用機制一致。

綜上所述，中藥蘆根確有解熱作用，其清熱作用機制與抑制機體內(nèi)的IL-1β、TNF-α、cAMP的表達有關(guān)，并且通過抑制下丘腦體溫中樞內(nèi)的環(huán)氧合酶，進而降低PGE2的釋放，也是蘆根產(chǎn)生清熱作用的機制之一。