李 君 梁 曉

1.湘潭醫(yī)衛(wèi)職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102；2桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，廣西 桂林 541199

百合為百合科植物卷丹(LiliumlancifoliumThunb.)、百合(LiliumbrowniiF.E．Brown var. viridulum Baker)或細(xì)葉百合(LiliumpumilumDC.)的干燥肉質(zhì)鱗葉，是典型的“藥食兩用”植物。百合主要分布于湖南、湖北、浙江、江蘇安、河南等省區(qū)?！吨袊幍洹穂1]和《中華本草》[2]中均有收錄。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為百合味甘，性寒，歸心、肺經(jīng)；具有養(yǎng)陰潤肺，清心安神之功效。臨床常用于陰虛燥咳、勞嗽咳血、虛煩驚悸、失眠多夢、精神恍惚?，F(xiàn)已從百合藥材中分離鑒定多種化學(xué)成分，其中薯蕷皂苷為百合藥材中有效成分之一?，F(xiàn)代藥理學(xué)實驗[3-6]證實，百合藥材中的薯蕷皂苷具有抗抑郁、抗疲勞、抗氧化、提高機(jī)體免疫力等多種藥理活性。藥材合理的采收時間對藥材本身的質(zhì)量有直接影響，一般認(rèn)為百合藥材為栽植后第2年8月初采收，但8月初采收是否能保證百合中薯蕷皂苷的含量最高，目前尚未見此方面的研究報道。

隨著國家的“振興鄉(xiāng)村”政策，廣大村民種植中藥材產(chǎn)業(yè)業(yè)已成為不少農(nóng)村農(nóng)民脫貧致富的好途徑。百合作為臨床常用中藥，其合理的采收期對保證藥品臨床療效有直接的關(guān)系。為了更好地開發(fā)利用這一藥材資源，筆者對百合藥材中薯蕷皂苷的含量動態(tài)積累規(guī)律進(jìn)行了研究。

1 儀器和材料

1.1 儀器 Waters 600型高效液相色譜儀(含Waters 468型紫外檢測器，Watres PC 800型色譜工作站，美國Waters公司)。HS6150D型超聲波清洗器(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)，HP-01型無油真空泵(天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)，BS2242 型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)。

1.2 藥材 研究所用百合藥材樣品分別在國內(nèi)4個省區(qū)(湖南省邵陽市隆回縣，湖南省湘西土家族苗族自治州龍山縣，浙江省衢州市常山縣，河南省洛陽市欒川縣)采集，共32份，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)劉塔斯教授鑒定，所采集樣品均為百合科(Liliaceae)植物百合(LiliumbrowniiF. E. Brown var. viridulum Baker)的肉質(zhì)鱗葉。2020年7月-2020年9月采收百合的肉質(zhì)鱗葉，洗凈，曬干。

1.3 材料 薯蕷皂苷對照品(批號：111539-200612，中國食品藥品檢驗研究院)，乙腈(批號：20200715，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、甲醇(批號：20200614，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司)、異丙醇(批號：20200712天，津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及適應(yīng)性試驗 色譜柱：Phenomenex ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液(95∶5)；流速1 mL/min；柱溫為25 ℃ ；檢測波長為204 nm。在此條件下，理論板數(shù)按木犀草素峰計算應(yīng)不低于5000。

2.2 對照品溶液制備 取薯蕷皂苷對照品1.0 mg，精密稱量，置于10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 百合藥材供試品溶液制備 取百合干燥樣品粉末(過三號篩)10.0 g，精密稱定，將藥材粉末置具塞錐形瓶中，置具塞錐形瓶中，精密加入75%乙醇50 mL，稱定重量，超聲(功率500 W，頻率40 kHz)處理45 min，放冷，再次稱定重量，用75%乙醇補(bǔ)足減失的重量，過濾。濾液回收乙醇后，得浸膏，加適量蒸餾水溶解，用飽和正丁醇萃取3次，每次20 mL，回收正丁醇，得浸膏，用甲醇溶解，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 測定法 分別精密吸取薯蕷皂苷對照品溶液與百合供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜，測定，即得，結(jié)果如圖1、圖2所示。

圖1 薯蕷皂苷對照品溶液色譜圖

圖2 百合供試品溶液色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.2”項下的薯蕷皂苷對照品1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度為10、20、30、40、50 μg/mL系列濃度的薯蕷皂苷對照品溶液，按“2.1”項下的色譜條件依次注入高效液相色譜儀，進(jìn)行HPLC分析，以測得的峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，薯蕷皂苷濃度(X)為橫坐標(biāo)，得回歸方程為：Y=164533X+9098.6，r=0.9998。表明薯蕷皂苷溶液在10～50 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)對照品的峰面積和濃度線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液20 μL，按“2.1”項色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行HPLC分析，測得各次峰面積，并計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)值，結(jié)果RSD為1.08%，表明要求的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取百合藥材粉末10.0 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于0、4、8、12、16、20、24 h依次進(jìn)樣20 μL，注入高效液相色譜儀，進(jìn)行HPLC分析，測得每個時間點百合藥材供試品溶液的峰面積，并計算得RSD為1.09%，表明樣品在24 h內(nèi)較為穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 取百合藥材粉末10.0 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，平行制備樣品溶液6份，分別進(jìn)樣20 μL，進(jìn)行HPLC分析，測定樣品含量，并其計算RSD得1.84%，表明方法較為穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的百合藥材樣品粉末6份，各約5.0 g，精密稱定。分別精密加入濃度為0.106 mg/mL的薯蕷皂苷對照品溶液1.0 mL，按 “2.3”項下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣20 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 薯蕷皂苷的加樣回收率試驗

2.10 樣品測定 不同采收期、取不同產(chǎn)地百合藥材藥材適量，精密稱定，“2.3”項下方法制備供試品溶液。取薯蕷皂苷對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀，測定，計算百合藥材中薯蕷皂苷的含量，結(jié)果見表2。

表2 不同采收期、不同產(chǎn)地百合藥材中的含量

3 結(jié)論

薯蕷皂苷易溶于甲醇，故在實驗中選擇甲醇作為提取溶劑[7-8]。在實驗中對流動相的比例(體積)進(jìn)行了充分的考察，先后選用甲醇-0.1%甲酸水溶液(95∶5)、甲醇-0.1%甲酸水溶液(90∶10)、乙腈-水(95∶5)等作流動相，薯蕷皂苷的分離度和理論塔板數(shù)均達(dá)不到要求。經(jīng)過多次、反復(fù)摸索實驗條件，發(fā)現(xiàn)采用乙腈-0.1%磷酸水溶液(95∶5)為流動相，薯蕷皂苷可以與相鄰成分達(dá)到基線分離，且峰形較好，符合要求。

分別對不同采收期和不同產(chǎn)地的百合藥材中薯蕷皂苷的含量進(jìn)行了測定。研究結(jié)果表明：不同產(chǎn)地的百合藥材在同一采收期薯蕷皂苷的含量無明顯差異；不同產(chǎn)地百合藥材中薯蕷皂苷的含量呈規(guī)律性變化，其中7月初到8月初百合藥材中薯蕷皂苷的含量呈上升趨勢，8月中旬薯蕷皂苷的含量較高，隨后百合藥材中薯蕷皂苷的含量逐漸下降。故建議每年8月上中旬份作為百合藥材的最佳采收期。