劉秀華，楊韻，杜永媚

廈門市海滄醫(yī)院病理科 (福建廈門 361000)

隨著對腫瘤發(fā)病機制的深入研究，分子靶向治療有望成為腫瘤的根治方法，并越來越受到國內外學者的關注，且尋找合適的靶點已經成為腫瘤研究的重點。有研究證明，HOXD9在人類多種腫瘤中呈高表達[1-3]，同時HOXD9的高表達還可能與腫瘤的侵襲、轉移及進展密切相關[4-5]。P13K/AKT信號傳導通路在多種腫瘤的侵襲轉移過程中發(fā)揮重要作用，其下游重要的負調控因子PTEN在多種腫瘤中表達缺失[6]，與腫瘤的侵襲轉移密切相關[7]。鑒于此，本研究通過免疫組織化學法檢測HOXD9和PTEN在結直腸癌中的表達，探討其臨床病理意義及在結直腸癌轉移過程中的作用，以期為結直腸癌的分子靶向治療提供新的靶點，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1一般材料

收集2015年1月至2020年5月我院病理科存檔的正常結直腸組織(結直腸癌切除標本的陰性切緣)30例和浸潤至結直腸漿膜層癌組織154例[年齡46～79歲；男86例，女68例；淋巴結轉移79例，無淋巴結轉移75例；病理分級(WHO 2010版結直腸癌分級)，Ⅰ級21例，Ⅱ級89例，Ⅲ級44例]。所有組織病例在取材前均未接受放化療、免疫及分子靶向治療。

1.2試劑

濃縮型兔抗人HOXD9單克隆抗體(購自Bioss公司)、濃縮型鼠抗人PTEN單克隆抗體(購自Bioss公司)、EnVision免疫組化反應試劑盒(購自北京中杉金橋生物技術公司)。

1.3方法

選取組織切片，于顯微鏡下定位，在對應蠟塊位置采集芯片組織并放置于芯片模具內，2次包埋后制成組織芯片微陣列，3 μm連續(xù)切片，采用免疫組織化學EnVision兩步法染色，抗HOXD9一抗工作濃度為1︰500，抗PTEN工作濃度為1︰300，PBS代替一抗做陰性對照，嚴格按照試劑盒說明書完成染色步驟。

1.4結果判斷

HOXD9陽性定位于細胞質中，出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞，每例組織隨機計數(shù)500個以上細胞，陽性細胞數(shù)<10%記為陰性，≥10%記為陽性；PTEN陽性表達定位于細胞核，結果判讀同上。

1.5統(tǒng)計學處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，相關性采用Pearson相關分析，檢驗水準α=0.05，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

HOXD9和PTEN免疫組化染色如圖1～2所示。HOXD9在正常結直腸組織中陽性表達率低于浸潤至結直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；組織分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級陽性表達率逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；HOXD9在淋巴結轉移組陽性表達率高于無淋巴結轉移組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1～2。PTEN在正常結直腸組織中陽性表達率高于浸潤至結直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；組織分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級陽性表達率逐漸降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；PTEN在淋巴結轉移組陽性表達率低于無淋巴結轉移組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1～2。HOXD9的表達與PTEN的表達呈負相關(rs=-3.128，P<0.05)，見表3。

表1 HOXD9和PTEN在結直腸癌中的表達

表2 HOXD9和PTEN在浸潤至結直腸漿膜層癌組織的表達

表3 HOXD9和PTEN在結直腸癌中表達的相關性

3 討論

3.1HOXD9的表達與結直腸癌侵襲轉移的關系

本研究結果顯示，HOXD9在正常結直腸組織中陽性表達低于浸潤至結直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；組織分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級陽性表達率逐漸增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；HOXD9在淋巴結轉移組陽性表達率高于無淋巴結轉移組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，表明HOXD9參與結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展以及腫瘤的侵襲轉移過程。Liu等[8]通過組織實驗、細胞培養(yǎng)等體內外研究發(fā)現(xiàn)，相較于正常結直腸組織，HOXD9在結直腸癌組織中呈高表達，且與組織分化、淋巴結轉移等密切相關，其高表達提示預后差。Lin等[4]同樣通過體內外實驗研究發(fā)現(xiàn)，HOXD9在胃癌組織中呈高表達，通過敲除HOXD9可以有效地抑制胃癌細胞的增殖、遷移和侵襲。本研究結果與上述研究結果均相符，表明HOXD9參與腫瘤的侵襲轉移過程，其高表達能促進腫瘤的侵襲轉移并預示患者預后不良。

3.2PTEN的表達與結直腸癌侵襲轉移的關系

隨著臨床對腫瘤發(fā)病機制的深入研究，有研究表明，P13K/AKT信號傳導通路在多種腫瘤的侵襲、轉移、上皮間質轉化等過程中發(fā)揮重要作用，其下游重要的負調控因子PTEN在多種腫瘤中表達缺失，參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[9]。本研究結果顯示，PTEN在正常結直腸組織中陽性表達率高于浸潤至結直腸漿膜層癌組織，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；組織分級Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級陽性表達率逐漸降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；PTEN在淋巴結轉移組陽性表達率低于無淋巴結轉移組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與萬焱華等[10]研究結果相似，表明PTEN的表達抑制腫瘤的分化、侵襲及轉移過程。

3.3HOXD9與PTEN的相關性分析

腫瘤的發(fā)生及發(fā)展是多基因參與、多步驟協(xié)同完成的過程。本研究結果顯示，HOXD9的表達與PTEN的表達呈負相關，表明HOXD9的高表達抑制了PTEN的功能，進而促進癌組織的侵襲、轉移。但HOXD9在P13K/AKT信號傳導通路中如何抑制PTEN的表達來促進腫瘤的侵襲、轉移還需分子生物學的進一步研究。

綜上所述，HOXD9、PTEN在結直腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，并且兩者相互作用促進腫瘤的侵襲轉移，提示HOXD9可作為結直腸癌治療的潛在靶點。