辛雅萍 李天天 祝藝涵 張 琦

鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450003

糖尿病合并周圍神經(jīng)病變（diabetic peripheral neuropathy，DPN）是2 型 糖 尿 ?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者常見慢性并發(fā)癥之一，可累及感覺、運(yùn)動(dòng)和自主神經(jīng)，是導(dǎo)致糖尿病足部潰瘍的主要原因［1］。脂肪因子補(bǔ)體C1q 腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1（complement C1 tumor necrosis factor-related protein 1，CTRP1）是一種主要由脂肪基質(zhì)細(xì)胞分泌的糖蛋白，可參與T2DM 發(fā)病中的糖/脂代謝調(diào)控和炎癥反應(yīng)等多個(gè)環(huán)節(jié)［2-4］。在T2DM 的慢性炎癥狀態(tài)下，CTRP1 可作為促炎因子引起炎癥反應(yīng)的放大，但與DPN 的發(fā)生尚未明確。本研究通過病例對(duì)照研究分析脂肪因子CTRP1 與炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6 及炎癥趨化因子MCP-1 的關(guān)系，進(jìn)一步明確CTRP1 在DPN 發(fā)生過程中的作用，旨在為臨床診斷、治療和預(yù)防DPN 提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 對(duì)象和方法

1.1 研究對(duì)象選取2017-08—2020-11 鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院確診的T2DM患者116例為研究對(duì)象，其中單純T2DM患者58例（T2DM組），DPN 患者58 例（DPN 組），并以60 例健康體檢者作為對(duì)照組（HC組）。所有研究對(duì)象進(jìn)行常規(guī)檢查，包括血壓、血糖、血脂和HbA1c等。所有2 型糖尿病患者診斷標(biāo)準(zhǔn)均按空腹血糖≥7.0 mmol/L（126 mg/dL），口服葡萄糖耐量試驗(yàn)2 h血糖≥11.1 mmol/L（200 mg/dL），或經(jīng)臨床診斷［5］。DPN診斷符合以下5項(xiàng)檢查中2 項(xiàng)或以上異常者即可診斷：（1）神經(jīng)傳導(dǎo)速度（NCV）有2 項(xiàng)或以上減慢；（2）振動(dòng)感覺異常；（3）溫度感覺異常；（4）踝反射消失；（5）足部感覺減退［6-7］。排除標(biāo)準(zhǔn)：所有其他病因引起的周圍神經(jīng)病變，如腦血管疾病后遺癥、甲狀腺疾病、嚴(yán)重肝腎功能不全、感染性多發(fā)性神經(jīng)炎等；足部潰瘍、感染及雙足明顯浮腫；雙下肢外傷及手術(shù)史等。

1.2 血清樣本采集于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取受試者肘靜脈血約6 mL，靜置2 h，使用離心機(jī)以2 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，吸取上層血清保存至2 mL凍存管，并標(biāo)記患者住院號(hào)、姓名后保存于80 ℃冰箱待檢。

1.3 臨床相關(guān)數(shù)據(jù)記錄研究對(duì)象的年齡、身高、體質(zhì)量等一般情況。采用標(biāo)準(zhǔn)公式［體質(zhì)量（kg）/身高（m2）］計(jì)算體重指數(shù)（BMI）。在靜息狀態(tài)下用標(biāo)準(zhǔn)血壓計(jì)測(cè)量坐位收縮壓和舒張壓。用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定空腹血糖（FPG）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）。

1.4 試驗(yàn)方法采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中脂肪因子CTRP1，炎癥相關(guān)因子TNF-α、IL-1β、IL-6 及炎癥趨化因子MCP-1的水平。脂肪因子CTRP1試劑由上海江萊生物公司提供，其余相關(guān)試劑由北京索萊寶科技有限公司提供，相關(guān)試驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書要求進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 20.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)用均值和標(biāo)準(zhǔn)差描述，不同組間分類資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，多樣本定量資料的比較采用方差分析，計(jì)量資料相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson 相關(guān)分析，DPN 的危險(xiǎn)因素采用Logistic回歸分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料和生化指標(biāo)對(duì)比DNP 組BMI較HC組明顯升高（P=0.039），而空腹血糖和糖化血紅蛋白水平均顯著高于T2DM 組（P＜0.01）。3 組間相關(guān)生化指標(biāo)分析，T2DM 組和DPN 組TG 水平明顯高于HC 組（P=0.021），而DPN 組HDL-C 水平顯著低于HC 組和T2DM組（P=0.002），其余指標(biāo)未見異常（表1）。

表1 3組一般資料和生化指標(biāo)分析Table 1 Analysis of general data and biochemical indicators in three groups

2.2 血清CTRP1 水平及相關(guān)炎癥因子組間對(duì)比血清相關(guān)結(jié)果顯示（圖1），HC組、T2DM組和DNP組CTRP1水平逐漸升高，且T2DM組和DNP組間比較有顯著差異（P＜0.01）。DNP組TNF-α和炎癥趨化因子MCP-1均顯著高于T2DM 組（TNF-α：P＜0.01；MCP-1：P＜0.01），其余T2DM組和DNP組炎癥因子IL-1β和IL-6均高于HC 組（IL-1β：T2DM 組，P＜0.01，DNP組，P＜0.01；IL-6：T2DM組，P=0.001，DNP組，P＜0.01），但2組間無顯著差異（P＞0.05）。

圖1 血清CTRP1和相關(guān)炎癥因子組間對(duì)比Figure 1 Comparison of serum CTRP1 and related inflammatory factors among three groups

2.3 DPN 患者相關(guān)危險(xiǎn)因素分析T2DM 組和DNP 組的116 例研究對(duì)象中，各指標(biāo)Pearson相關(guān)性分析顯示，空腹血糖、糖化血紅蛋白和HDL-C與DNP的發(fā)生相關(guān)（空腹血糖：r=0.423，P＜0.01；糖化血紅蛋白：r=0.520，P＜0.01；HDL-C：r=1，P=0.049），而炎癥相關(guān)指標(biāo)中CTRP1、TNF-α和MCP-1 也與DNP 的發(fā)生密切相關(guān)（CTRP1：r=1，P＜0.01；TNF-α：r=1，P＜0.01；MCP-1：r=1，P＜0.01）。將上述炎癥相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行Logistic 分析顯示，CTRP1、TNF-α和MCP-1 均是DNP 發(fā)生的影響因素（表2）。

表2 DPN患者危險(xiǎn)因素的Logistic分析Table 2 Logistic analysis of risk factors in DPN patients

2.4 2型糖尿病患者血清CTRP1的相關(guān)性分析血清CTRP1 相關(guān)性分析顯示（表3），CTRP1 與空腹血糖和糖化血紅蛋白均呈正相關(guān)，與HDL-C 呈負(fù)相關(guān)。而與炎癥因子相關(guān)分 析 顯 示，血 清CTRP1 水 平 與TNF-α 和MCP-1均呈正相關(guān)。

表3 2型糖尿病患者血清CTRP1與各因素的Pearson相關(guān)性分析Table 3 Pearson correlation analysis of serum CTRP1 and various factors in patients with type 2 diabetes

3 討論

DPN 是T2DM 患者常見的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，也是嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量的原因之一。研究報(bào)道，T2DM的病程以及糖代謝異常程度與DPN 的發(fā)生相關(guān)［8-9］。本研究也發(fā)現(xiàn)，DPN組空腹血糖和糖化血紅蛋白顯著高于T2DM組，且相關(guān)性分析也顯示其與DPN呈正相關(guān)，提示T2DM 的病程時(shí)間長短及血糖控制的程度是DPN 發(fā)生的重要影響因素。然而，DPN發(fā)生的相關(guān)機(jī)制，以及與T2DM炎癥狀態(tài)的關(guān)聯(lián)尚未明確。

CTRP1是一種分泌型糖蛋白，主要由脂肪基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，參與調(diào)控葡萄糖、脂肪酸代謝和炎癥等多個(gè)環(huán)節(jié)［10-11］。本團(tuán)隊(duì)以往研究發(fā)現(xiàn)，T2DM 患者CTRP1 水平升高，且與TNF-α水平相關(guān)，但DPN 患者血清CTRP1 水平未見報(bào)道［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，血清CTRP1 水平在HC組、T2DM 組和DNP 組逐漸升高，且DPN 患者CTRP1 水平明顯高于T2DM 組。相關(guān)性分析及多因素分析顯示，CTRP1 與DPN 的發(fā)生相關(guān)，且是其發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。

研究報(bào)道，DPN的發(fā)生與炎癥因子表達(dá)上調(diào)相關(guān)，一方面可通過激活NF-κB通路，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；另一方面，可調(diào)節(jié)、刺激神經(jīng)細(xì)胞的自我保護(hù)和修復(fù)系統(tǒng)，分泌抗炎因子及神經(jīng)影響因子［8，12-15］。本研究發(fā)現(xiàn)，T2DM 組和DPN組患者TNF-α、IL-1β、IL-6 及炎癥趨化因子MCP-1 水平均高于HC 組，但僅DPN 組患者TNF-α和MCP-1水平顯著高于T2DM組，且二者是T2DM 患者發(fā)生DPN 的影響因素。還有研究發(fā)現(xiàn)，痛性DPN 患者的TNF-α和IL-6 水平顯著高于非痛性DPN患者［16-18］，提示上述炎癥因子不但參與DPN 的發(fā)生，可能還與DPN的疾病進(jìn)展相關(guān)［19-22］。

T2DM 患者高表達(dá)的CTRP1，即可被炎癥因子誘導(dǎo)高表達(dá)，也可作為促炎因子放大炎癥反應(yīng)，如將脂多糖注入大鼠體內(nèi)引發(fā)炎癥反應(yīng)，可通過TNF-α 誘導(dǎo)脂肪組織CTRP1 mRNA高表達(dá)［12，23-26］。TNF-α還可上調(diào)脂肪細(xì)胞乃至前體脂肪細(xì)胞CTRP1 的表達(dá)，提示炎癥狀態(tài)與CTRP1關(guān)系密切［4，27-29］。CTRP1可能通過促炎反應(yīng)影響DPN 的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)，T2DM組和DPN組患者血清CTRP1水平與TNF-α和MCP-1 均呈正相關(guān)關(guān)系。以往研究發(fā)現(xiàn)，CTRP1 也是一種敏感的促炎因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞-平滑肌細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化［14-16］，如重組CTRP1蛋白腹腔注射明顯促進(jìn)ApoE-/-小鼠動(dòng)脈粥樣硬化形成。該作用在CTRP1-/-和ApoE-/-雙敲小鼠中明顯改善，并可觀察到血管黏附分子、磷酸化p38以及TNF-α持續(xù)減低，巨噬細(xì)胞浸潤減少。更值得關(guān)注的是，炎癥細(xì)胞因子及CTRP1蛋白自身強(qiáng)烈誘導(dǎo)CTRP1 產(chǎn)生，形成正反饋調(diào)節(jié)，并在人類內(nèi)皮細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞、THP-1 細(xì)胞上引發(fā)濃度依賴的黏附蛋白和炎癥標(biāo)志表達(dá)。研究提示，T2DM患者高表達(dá)的CTRP1 可能通過促炎反應(yīng)上調(diào)炎癥因子TNF-α和炎癥趨化因子MCP-1 的表達(dá)，誘導(dǎo)DPN的發(fā)生［29-30］。

DPN是T2DM患者常見的并發(fā)癥，其發(fā)生與T2DM病程及血糖控制程度相關(guān)。T2DM患者高表達(dá)的脂肪因子CTRP1可能是DPN的始動(dòng)因素，其通過促炎反應(yīng)上調(diào)炎癥因子TNF-α 和炎 癥趨化因子MCP-1，共同參與DPN的發(fā)生。