趙榮榮，張倩

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，早期臨床癥狀較少，往往發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)是晚期，其發(fā)生率在所有腫瘤中排第五，而死亡率在全球排第三。胃癌發(fā)病原因至今仍不明確，但是與幽門螺旋桿菌感染和飲食習(xí)慣等環(huán)境影響以及基因異常表達(dá)有關(guān)，其臨床分期較晚且預(yù)后不良。目前越來越多的人表皮生長因子受體2（HER-2）陽性晚期胃癌病人受益于曲妥珠單抗，因此對于胃癌病人來說，做HER-2 檢查非常有必要。胃癌的檢測方法有很多，而血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物的檢查逐步廣泛應(yīng)用于臨床上，其與胃癌的預(yù)后、轉(zhuǎn)移等密切相關(guān)。然而，目前對于胃癌病人檢測癌胚抗原、糖類抗原125（CA125）、糖類抗原19-9（CA19-9）血清表達(dá)與HER-2、Ki-67蛋白表達(dá)相關(guān)性以及對臨床診斷意義還沒有明確結(jié)論，本研究主要是探索胃癌病人手術(shù)前血清學(xué)生物標(biāo)志物癌胚抗原、CA125 和CA19-9 表達(dá)與HER-2 和Ki-67 蛋白表達(dá)的相關(guān)性，以及與臨床病理特征的相關(guān)性分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2017年10月至2018年12月在安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院高新院區(qū)治療的132例胃癌手術(shù)病人，男性95 例，女性37 例。所有研究對象手術(shù)前均未進(jìn)行化療，手術(shù)切除的腫瘤組織對其進(jìn)行病理檢查，確診為胃癌。病人或其近親屬知情同意，本研究符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》相關(guān)要求。

1.2 方法

1.2.1

血清學(xué)檢測 所有病人術(shù)前空腹抽血3 mL，離心取上清液，保存于-20 ℃環(huán)境中。采用羅氏的全自動生化分析儀E170 模塊和上海酶聯(lián)生物科技有限公司的試劑盒檢測癌胚抗原、CA125、CA19-9水平。正常值范圍：癌胚抗原為0～5.0 μg/L，CA125為0～35.0 kU/L，CA19-9 為0～27.0 kU/L，超出正常范圍視為陽性。

1.2.2

免疫組織化學(xué)檢測 病人手術(shù)取下的組織立即用固定液固定，取材，脫水，包埋，制片，蘇木精-伊紅（HE）染色，鏡下觀察選取具有代表性的腫瘤組織蠟塊，再切片（3 μm），進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色（IHC）。IHC 檢測使用的儀器購自羅氏公司，使用的一抗均是羅氏公司購買的即用型抗體，HER-2（4B5）和Ki-67（30-9）。

1.2.3

免疫組織化學(xué)判讀 HER-2：細(xì)胞膜表達(dá)呈棕黃色，當(dāng)未染色或膜染色＜10% 腫瘤細(xì)胞時(shí)為（0）；當(dāng)≥10% 腫瘤細(xì)胞膜弱染色或部分細(xì)胞膜染色時(shí)為（+）；當(dāng)≥10% 腫瘤細(xì)胞弱至中度的基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜染色時(shí)為（2+）；當(dāng)≥10% 腫瘤細(xì)胞基底側(cè)膜、側(cè)膜或完全膜強(qiáng)染色為（3+）。Ki-67：細(xì)胞核表達(dá)呈棕黃色，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，陽性腫瘤細(xì)胞比例≤10% 者為陰性，＞10%～25% 為弱陽性，＞25%～50%判為中度陽性，＞50%則為強(qiáng)陽性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)使用SPSS 16.0 軟件統(tǒng)計(jì)，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或者百分比表示，組間比較采用

χ

檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法，等級資料指標(biāo)兩組間比較采用Wilcoxon 秩和檢驗(yàn)，HER-2 和Ki-67 的相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman 相關(guān)性分析。

P

＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌胚抗原、CA125、CA19-9與HER-2表達(dá)的相關(guān)性

HER-2蛋白在胃癌中表達(dá)于細(xì)胞膜，Ki-67蛋白表達(dá)于細(xì)胞核。132 例胃癌病人中，癌胚抗原陽性率為34.8%（46/132）；CA125 陽性率為15.2%（20/132）；CA19-9 陽性率為10.6%（14/132）；HER-2（0）陽性率為37.2%（49/132），（+）為34.8%（46/132），（2+）為15.9%（21/132），（3+）為12.1%（16/132）；Ki-67 陰性為1.5%（2/132），弱陽性為0.8%（1/132），中度陽性為47.7%（63/132），強(qiáng)陽性為50%（66/132）。癌胚抗原與HER-2 表達(dá)無相關(guān)性（

P

＞0.05）；CA125、CA19-9與HER-2表達(dá)有相關(guān)性（

P

＜0.05）。見表1。

表1 胃癌132例癌胚抗原、CA125、CA19-9與HER-2表達(dá)的相關(guān)性/例

2.2 癌胚抗原、CA125、CA19-9 與臨床病理特征的相關(guān)性

癌胚抗原表達(dá)與年齡（

P

=0.016）、腫瘤大?。?p>P

=0.046）以及腫瘤分期（

P

=0.03）有關(guān)，CA125 表達(dá)與脈管侵犯有關(guān)（

P

=0.026）。見表2。

表2 胃癌132例癌胚抗原、CA125、CA19-9與臨床病理特征的相關(guān)性/例

2.3 HER-2 和Ki-67 表達(dá)的相關(guān)性

132 例胃癌標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)，HER-2 與Ki-67 蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（

r

=-0.274，

P

=0.007），詳情見表3。

表3 胃癌132例HER-2和Ki-67表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

胃癌屬于消化道腫瘤，其發(fā)生主要受環(huán)境和基因改變影響。在我國胃癌是僅次于肺癌和肝癌的三大惡性腫瘤之一，男性發(fā)病多見于女性。胃癌早期，常見的腫瘤標(biāo)志物未發(fā)生明顯的表達(dá)異常，所以目前還沒有用于胃癌特異性診斷的腫瘤標(biāo)志物。但是早日發(fā)現(xiàn)胃癌特異性腫瘤標(biāo)志物對于其診斷以及后期治療具有重要意義。

本研究首先主要探討癌胚抗原、CA125、CA19-9三種腫瘤標(biāo)志物在胃癌病人手術(shù)前血清中的表達(dá)情況，以及與臨床病理特征的相關(guān)性。癌胚抗原在正常情況下產(chǎn)生于胚胎時(shí)期，出生后水平逐漸降低。成人癌胚抗原體內(nèi)水平穩(wěn)定且微量。但是大多數(shù)腫瘤病人癌胚抗原表達(dá)增高，其被認(rèn)可為廣譜性腫瘤標(biāo)志物，濃度異常增高多見于消化系統(tǒng)腫瘤和肺癌。本研究數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，132 例胃癌病例中，術(shù)前血清癌胚抗原表達(dá)陽性率為34.8%。有研究發(fā)現(xiàn)，在消化道腫瘤中癌胚抗原水平升高時(shí)，肝臟轉(zhuǎn)移、腹膜轉(zhuǎn)移的機(jī)會明顯升高，其表達(dá)與腫瘤分化類型（尤其是差分化）明顯相關(guān)。而本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌胚抗原表達(dá)陽性病人中，年齡高于65歲者明顯多于年齡低于65歲者，腫瘤最大徑大于5 cm者多于小于5 cm 者，且進(jìn)展期病人多于早期病人，這表明越是晚期的胃癌病人癌胚抗原表達(dá)陽性率越高。CA19-9是一種新的腫瘤標(biāo)志物，且是胰腺癌敏感性最高的標(biāo)志物，消化道炎癥時(shí)輕度升高，但是明顯升高時(shí)多見于消化道腫瘤。有文獻(xiàn)研究報(bào)道，對胃癌病人分別進(jìn)行術(shù)前和術(shù)后癌胚抗原和CA19-9 抽血檢測，發(fā)現(xiàn)手術(shù)前后其表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且癌胚抗原和CA19-9表達(dá)水平升高與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和pTNM分期等臨床病理特征有關(guān)。本研究結(jié)果顯示CA19-9 的陽性表達(dá)率為10.6%，與臨床病理特征無相關(guān)性，可能是樣本數(shù)量的局限性。CA125表達(dá)異常也是與多種惡性腫瘤有關(guān)，其是一種與腫瘤相關(guān)的糖蛋白抗原。對于進(jìn)展期和根治術(shù)后胃癌病人，血液檢測發(fā)現(xiàn)CA125 水平升高，常提示發(fā)生腹膜轉(zhuǎn)移和胃癌預(yù)后不良。本研究結(jié)果表明，CA125 陽性胃癌病人的脈管侵犯率要高于陰性者。 大量文獻(xiàn)表明，癌胚抗原、CA125、CA19-9 腫瘤標(biāo)志物聯(lián)測檢測對于胃癌臨床診斷、病理特征以及腫瘤復(fù)發(fā)與預(yù)后有著重要的影響意義。 本研究結(jié)果也證實(shí)了癌胚抗原和CA125 的血清學(xué)檢測與胃癌臨床病理特征密切相關(guān)，這對于胃癌病人的預(yù)后和復(fù)發(fā)有重要指導(dǎo)意義。

胃癌是起源于正常胃黏膜上皮，經(jīng)過逐步發(fā)展不斷演變的一個(gè)慢性過程。在胃癌的早期，由于臨床癥狀不明顯以及沒有高效率的檢測方法，導(dǎo)致很多病人在確診時(shí)已經(jīng)進(jìn)入了進(jìn)展期，不再適合手術(shù)治療。近年來隨著生物醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，越來越多的胃癌病人獲益于鉑類和曲妥珠單抗藥物。但是研究發(fā)現(xiàn)在對胃癌病人使用曲妥珠單抗藥物之前，對病人腫瘤組織中HER2 表達(dá)進(jìn)行檢測對于后期臨床治療效果至關(guān)重要，對于接受曲妥珠單抗治療的HER2 陽性病人與陰性病人相比，生存期更長。Ki-67 檢測用來評估腫瘤細(xì)胞的增殖情況。因此，在國際指南中均建議對胃癌病人進(jìn)行HER2檢測。而胃癌病人的血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物檢測與HER-2 蛋白相關(guān)性分析仍不明確。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌病人血清標(biāo)志物CA125、CA19-9 表達(dá)與HER-2 蛋白表達(dá)有關(guān)，這也為胃癌病人在使用鉑類和曲妥珠單抗之前提供了參考因素。同時(shí)HER-2 與Ki-67 的蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，這表明在使用鉑類和曲妥珠單抗藥物之前，檢測HER-2 和Ki-67 的表達(dá)是十分有必要的，除了藥物的使用效果外，腫瘤細(xì)胞的增殖狀態(tài)對于后期治療也是至關(guān)重要的。

綜上所述，胃癌病人的血清學(xué)標(biāo)志物癌胚抗原與年齡、腫瘤大小、腫瘤分期有關(guān)，CA125 與脈管侵犯有關(guān)，而CA125、CA19-9 表達(dá)與HER-2 的蛋白表達(dá)有關(guān)，HER-2 表達(dá)與Ki-67 表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。胃癌病人的標(biāo)志物癌胚抗原、CA125、CA19-9、HER-2、Ki-67 檢測對于病人臨床用藥和病理特征分析具有重要意義。