王建國(guó) 陶耀業(yè) 陳成 徐驍*

肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的發(fā)病率逐年上升，侵襲性與耐藥性均較強(qiáng)，復(fù)發(fā)率較高。目前，手術(shù)切除是肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的主要治療方式［1］，化療、局部治療的療效仍不夠理想［2］。近年來(lái)，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵生物標(biāo)志物為其臨床診療開(kāi)辟了更為有效的研究靶點(diǎn)［3］。研究表明，溶質(zhì)載體家族7 成員11（Recombinant Solute Carrier Family 7，Member 11，SLC7A11）蛋白在膠質(zhì)瘤、胰腺癌等多種惡性腫瘤中過(guò)表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)［4-6］。SLC7A11和SLC3A2 共同組成胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白系統(tǒng) Xc-，轉(zhuǎn)運(yùn)細(xì)胞外的胱氨酸至細(xì)胞內(nèi)，并將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸，促進(jìn)谷胱甘肽的合成，在應(yīng)激條件下促使細(xì)胞維持氧化還原平衡，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化誘導(dǎo)的鐵死亡［7-8］。鐵死亡作為一種新的細(xì)胞死亡機(jī)制，已成為腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，但鐵死亡在膽管癌中的作用尚不明確。本研究采用免疫組化法檢測(cè)SLC7A11 蛋白在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性，初步探索SLC7A11 蛋白與膽管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2013 年1 月至2019 年6 月浙江大學(xué)

醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院的膽管癌手術(shù)切除標(biāo)本113 例，所有標(biāo)本均獲得病理明確診斷。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測(cè)方法 腫瘤組織標(biāo)本離體后采用10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋保存。制作4 μm 厚的石蠟切片，之后進(jìn)行烤片、二甲苯脫蠟，梯度乙醇溶液脫水。0.1 mmol/L 枸櫞酸鹽緩沖液高壓抗原修復(fù)，山羊血清封閉30 min，一抗4 ℃冰箱過(guò)夜，二抗孵育30 min，顯微鏡下觀察，采用DAB 顯色，中性樹(shù)膠封片。使用已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，陰性對(duì)照采用PBS 溶液。

1.3 結(jié)果判定 SLC7A11 均以細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)淡黃色至棕褐色為陽(yáng)性信號(hào)。每個(gè)組織標(biāo)本在高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度計(jì)算分值。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（%），≤10%為1 分，＞10%～50%為2 分，＞50%～80%為3 分，＞80%為4 分。染色程度評(píng)分，陰性為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3分。上述兩項(xiàng)評(píng)分的乘積為最終評(píng)分，分值＜6 分為低表達(dá)，≥6 分為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以n表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；預(yù)后分析應(yīng)用Kaplan-Meier 生存曲線。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達(dá)情況 見(jiàn)圖1。

圖1 SLC7A11蛋白 在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中表達(dá)陰性及陽(yáng)性的免疫組化染色（×20）

2.2 SLC7A11 蛋白表達(dá)與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌臨床病理特征的關(guān)系 SLC7A11 蛋白的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、分化程度、CA-199、CEA 等均不相關(guān)（P＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 膽管癌組織中SLC7A11蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

2.3 SLC7A11 蛋白表達(dá)與膽管癌患者預(yù)后的相關(guān)性 SLC7A11 蛋白低表達(dá)組與高表達(dá)組無(wú)瘤生存期比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.004），SLC7A11 蛋白低表達(dá)組和高表達(dá)組肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者的總體生存時(shí)間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.034）。見(jiàn)圖2。

圖2 SLC7A11蛋白低表達(dá)與高表達(dá)的生存分析

3 討論

膽管癌在臨床上缺乏有效治療策略且極易產(chǎn)生耐藥，是一種具有高致死率的惡性腫瘤［9］。近年來(lái)，鐵死亡研究為膽管癌的治療提供了新思路。鐵死亡是一種具有鐵離子依賴性的細(xì)胞氧化性死亡，而谷胱甘肽是細(xì)胞內(nèi)最重要的抗氧化劑，可抑制鐵死亡發(fā)生［10］。SLC7A11 蛋白介導(dǎo)的胱氨酸攝取，是細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽合成的重要途徑，腫瘤細(xì)胞中SLC7A11 蛋白高表達(dá)可抑制活性氧誘導(dǎo)的鐵死亡，而下調(diào)SLC7A11 蛋白的表達(dá)會(huì)減弱細(xì)胞的抗氧化能力，提高細(xì)胞對(duì)鐵死亡的敏感性［11-12］。SLC7A11 可通過(guò)調(diào)控鐵死亡促進(jìn)腫瘤發(fā)展［13］，通過(guò)調(diào)節(jié)β-catenin 通路，減弱腫瘤細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附，進(jìn)而促進(jìn)食管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移［14］。SLC7A11 高表達(dá)可激活PI3K/Akt 通路，進(jìn)而促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的遷移侵襲能力［15］。由此可見(jiàn)，SLC7A11 蛋白的表達(dá)水平與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，說(shuō)明 SLC7A11 在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

治療抵抗是膽管癌總體生存率低的重要因素。研究證實(shí)，SLC7A11 能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的治療抵抗。YANG等［16］研究報(bào)道，SLC7A11 的過(guò)表達(dá)可增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑、吉西他濱等化療藥物的耐藥性，而靶向SLC7A11 的鐵死亡誘導(dǎo)劑erastin 可以逆轉(zhuǎn)ABCB1 介導(dǎo)的卵巢癌多西紫杉醇耐藥［17］。本研究肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌標(biāo)本中SLC7A11 蛋白低表達(dá)組的總體生存時(shí)間和無(wú)瘤生存期均顯著高于高表達(dá)組，表明肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中的SLC7A11 蛋白可能介導(dǎo)了肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的化療耐藥。另外，還發(fā)現(xiàn)SLC7A11 在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá)與患者不良預(yù)后密切相關(guān)，說(shuō)明SLC7A11 介導(dǎo)的鐵死亡可能是膽管癌進(jìn)展的關(guān)鍵分子。

綜上所述，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)，提示SLC7A11 異常表達(dá)可能在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的侵襲、轉(zhuǎn)移、化療耐藥過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，有望為膽管癌治療提供新的靶點(diǎn)。