黎海靈 黃艷萍 陳旭冰 谷文超 周游 張德全 周濃

摘 要 目的：建立同時(shí)測(cè)定重慶地區(qū)不同基原崖桑皮和桑白皮中7種活性成分含量的方法，為完善崖桑皮和桑白皮的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)以及比較兩者質(zhì)量等同性提供參考。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定58批崖桑皮和桑白皮藥材中新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素的含量，色譜柱為Diamonsil C18，流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液-乙腈（梯度洗脫），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。利用SPSS 22.0軟件，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、主成分分析和聚類(lèi)分析方法分析58批崖桑皮和桑白皮藥材中上述7種活性成分的含量差異。結(jié)果：上述7種活性成分在各自質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好（r≥0.999 0），精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性、耐用性和加樣回收率試驗(yàn)的RSD均小于3%。崖桑皮中新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素的平均含量分別為0.304、22.462、1.730、1.308、1.593、2.842、0.657 mg/g，而桑白皮中上述7種活性成分的平均含量分別為0.305、22.995、2.486、2.438、2.916、4.158、1.264 mg/g。獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，崖桑皮和桑白皮的上述7種活性成分中只有山柰酚的含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;主成分分析和聚類(lèi)分析結(jié)果均顯示崖桑皮中上述7種活性成分的含量與桑白皮無(wú)明顯差別。結(jié)論：所建HPLC法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確度高，可為完善崖桑皮和桑白皮的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。崖桑皮和桑白皮在主要活性成分上具有一定的質(zhì)量等同性，以華桑和雞桑為來(lái)源的崖桑皮可作為桑白皮的代替品使用。

關(guān)鍵詞 崖桑皮;桑白皮;新綠原酸;桑皮苷A;綠原酸;紫云英苷;山柰酚;桑辛素;異槲皮素;含量;基原

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish a method for the simultaneous determination of 7 active components in Mori Australis Cortex and Mori Cortex from different sources in Chongqing area， so as to provide reference for improving the quality control standards of Mori Australis Cortex and Mori Cortex and comparing the equivalence of their quality. METHODS： HPLC method was used to determine the contents of neochlorogenic acid， mulberroside A， chlorogenic acid， astragalin， kaempferol， morusin and isoquercetin in 58 batches of Mori Australis Cortex and Mori Cortex. The chromatographic column was Diamonsil C18 with mobile phase consisted of 0.1% formic acid solution-acetonitrile （gradient elution） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 280 nm， column temperature was 30 ℃， and the injection volume was 10 μL. Using SPSS 22.0 software， independent sample t-test， principal component analysis and cluster analysis were used to analyze the content difference of the above-mentioned 7 active components in Mori Australis Cortex and Mori Cortex. RESULTS： There was a good linear relationship between the peak area and the concentration of the above 7 active components （r≥0.999 0）. The RSDs of precision， stability （24 h）， repeatability， durability and recovery were less than 3%. The average contents of neochlorogenic acid， mulberroside A， chlorogenic acid， astragalin， kaempferol， morusin and isoquercetin in Mori Australis Cortex were 0.304， 22.462， 1.730， 1.308， 1.593， 2.842 and 0.657 mg/g， respectively. Those of Mori Cortex were 0.305， 22.995， 2.486， 2.438， 2.916， 4.158 and 1.264 mg/g， respectively. The results of independent sample t-test showed that only the content of kaempferol in the above 7 active components of Mori Australis Cortex and Mori Cortex had significant difference （P<0.05）. The results of principal component analysis and cluster analysis showed that there was no significant difference in the contents of above 7 active components between Mori Australis Cortex and Mori Cortex. CONCLUSIONS： The established HPLC method is simple， sensitive and accurate， which can provide a reference for improving the quality control standard of Mori Australis Cortex and Mori Cortex. Mori Australis Cortex and Mori Cortex have certain quality equivalence in main active components， and the Mori Australis Cortex from M. australis and M. cathayana can be used as a substitute for the Mori Cortex.

KEYWORDS Mori Australis Cortex; Mori Cortex; Neochlorogenic acid; Mulberroside A; Chlorogenic acid; Astragalin; Kaempferol; Morusin; Isoquercitrin; Content; Source

桑白皮為?？浦参锷orus alba L.的干燥根皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，用藥歷史悠久。據(jù)2020年版《中國(guó)藥典》（一部）記載，桑白皮性味甘、寒，歸肺經(jīng)，入藥可用于治療肺熱喘咳、水腫脹滿、尿少、面目肌膚浮腫等疾病[1-2]。崖桑皮為?？浦参镫u桑M.australis Poir.或華桑M.cathayana Hemsl.的干燥根皮，入藥具有與桑白皮相似的功效，主要在重慶、四川、貴州、廣西等地作為地方習(xí)用品使用，收載于2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》[3]。隨著中藥材產(chǎn)業(yè)的發(fā)展和市場(chǎng)對(duì)中藥材需求的日益擴(kuò)大，中藥材多基原利用在一定時(shí)期內(nèi)對(duì)擴(kuò)大藥源、保障臨床用藥需求具有重要意義。但不同基原的藥材往往成分不同、品質(zhì)參差不齊，難以用統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)控制其質(zhì)量和保證臨床療效，嚴(yán)重影響了中藥材的安全性、有效性和可控性。

桑屬植物的根皮主要含有黃酮類(lèi)、芪類(lèi)、生物堿類(lèi)和香豆素類(lèi)等化學(xué)成分[4-6]。其中，黃酮類(lèi)化合物是桑白皮的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，芪類(lèi)化合物被認(rèn)為是植物抗毒素物質(zhì)[7-9]。在2020年版《中國(guó)藥典》和2010年版《四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中，僅以外觀性狀、顯微鑒別和薄層鑒別作為桑白皮和崖桑皮的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，未對(duì)其有效成分含量測(cè)定項(xiàng)進(jìn)行相關(guān)規(guī)定。陳志永等[10]對(duì)桑白皮有效成分新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、桑根酮C和桑辛素進(jìn)行了含量測(cè)定;魏敏等[11]測(cè)定了桑白皮中桑皮苷A、氧化白藜蘆醇、桑色素、桑根酮D、桑黃酮G、桑皮酮H和桑辛素的含量;袁婷等[12]利用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定了桑白皮中綠原酸、二氫桑色素、氧化白藜蘆醇、桑辛素O、桑根酮C的含量。本研究在前人研究基礎(chǔ)上，采用HPLC法同時(shí)測(cè)定重慶地區(qū)不同基原桑白皮和崖桑皮中新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素等7種活性成分的含量（其中崖桑皮中活性成分的含量測(cè)定是首次報(bào)道）;同時(shí)，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、主成分分析和聚類(lèi)分析方法對(duì)桑白皮和崖桑皮中7種活性成分的含量進(jìn)行評(píng)價(jià)，比較其含量差異性，以期為完善桑白皮和崖桑皮的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)及討論其入藥質(zhì)量等同性提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有LC-20AT型HPLC儀（日本Shimadzu公司）、SB-5200DTN型超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）、TDZ5-WS型多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司）、ML204型電子分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司，精度0.000 1 g]、CP225D型電子天平（德國(guó)Sartorius公司，精度0.000 01 g）、DZF-6050MBE型電熱恒溫真空干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）。

1.2 主要試劑

本研究所用的主要試劑有新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素、異槲皮素對(duì)照品（成都德斯特生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為DST190124- 015、DST190408-068、DST180504-21、DST190312-001、DST160928-056、DST180729-069、DST180108-006，純度均大于98%），乙腈（色譜純，德國(guó)Merck公司）;其他試劑均為分析純，水為娃哈哈牌純凈水。

1.3 藥材

1.3.1 樣品藥材 53批崖桑皮和桑白皮樣品藥材于2018年10月采集于重慶市部分區(qū)縣（表1中編號(hào)Y1～Y44、S2～S10，其中Y代表崖桑皮樣品、S代表桑白皮樣品），經(jīng)重慶三峽學(xué)院生物與食品工程學(xué)院周濃教授鑒定分別為桑科植物雞桑M. australis Poir.、華桑M. cathayana Hemsl.或桑M. alba L.的干燥根皮。另有3批崖桑皮樣品藥材（編號(hào)Y45～Y47）于2018年10月購(gòu)于成都、重慶的藥材市場(chǎng)，經(jīng)周濃教授鑒定為?？浦参镫u桑M. australis Poir.或華桑M. cathayana Hemsl.的干燥根皮。將上述藥材于45 ℃烘干至恒質(zhì)量，粉碎，過(guò)80目篩，密封儲(chǔ)存于4 ℃環(huán)境中，待用。

1.3.2 對(duì)照藥材 桑白皮對(duì)照藥材（編號(hào)S1，批號(hào)DST181226-004）、崖桑皮對(duì)照藥材（編號(hào)Y48，批號(hào)DST190115-135）均購(gòu)自成都德斯特生物技術(shù)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素對(duì)照品各適量，置于同一量瓶中，用70%甲醇溶液溶解并配制成上述成分質(zhì)量濃度分別為0.287、0.466、0.148、0.118、0.058、0.328、0.185 mg/mL的混合對(duì)照品溶液，用0.22 ?m微孔濾膜濾過(guò)，備用。

2.1.2 供試品溶液 精密稱(chēng)取藥材粉末0.5 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇溶液25 mL，混勻，稱(chēng)定質(zhì)量，在室溫條件下超聲（功率300 W，頻率40 kHz，下同）提取30 min，冷卻至室溫，用70%甲醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，以4 000 r/min離心10 min，取上清液，用0.22 ?m微孔濾膜濾過(guò)，即得供試品溶液。

2.1.3 陰性樣品溶液 精密量取70%甲醇溶液25 mL，置于具塞錐形瓶中，按“2.1.2”項(xiàng)下“稱(chēng)定質(zhì)量……用0.22 ?m微孔濾膜濾過(guò)”步驟操作，制得陰性樣品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱為Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫（洗脫程序如表2所示），流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別精密吸取“2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液（編號(hào)Y41）和陰性樣品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，所得色譜圖如圖1所示。結(jié)果，理論板數(shù)按桑辛素峰計(jì)算大于8 000，各待測(cè)成分峰與相鄰峰之間的分離度均大于1.5;陰性樣品溶液對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.3.2 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.1.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，用70%甲醇溶液稀釋得到系列對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件依次進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以各對(duì)照品峰面積（y）與其相應(yīng)的質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果如表3所示。由表3可知，7種活性成分的r均不小于0.999 0，表明線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取同一混合對(duì)照品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果，新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素峰面積的RSD分別為2.81%、2.78%、2.33%、2.50%、2.79%、2.52%和0.77%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（編號(hào)Y41）適量，分別在室溫下放置0、2、4、8、12、16、24 h時(shí)按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果，新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素峰面積的RSD分別為1.61%、1.89%、2.80%、2.14%、2.39%、0.74%和1.01%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品（編號(hào)Y41）粉末0.5 g，平行6份，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中7種活性成分的含量。結(jié)果，新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素含量的RSD分別為2.92%、1.82%、2.62%、2.73%、1.06%、2.18%和2.69%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收率試驗(yàn) 取“2.3.5”項(xiàng)下已知含量的樣品（編號(hào)Y41）粉末0.25 g，精密稱(chēng)定，加入混合對(duì)照品溶液1 mL，平行6份，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素的平均加樣回收率分別為100.56%、101.36%、101.31%、103.85%、104.38%、104.43%和101.46%，RSD分別為2.13%、2.79%、2.34%、2.80%、1.86%、2.90%和2.23%（n=6），表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.3.7 耐用性試驗(yàn) 精密稱(chēng)取樣品（編號(hào)Y41）粉末適量，按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件分別以不同色譜儀（Shimadzu LC-20AT、Agilent 1260）、不同色譜柱（Diamonsil C18、Venusil ASB C18、Inertsustain C18）、不同流速（0.8、1.0、1.2 mL/min）、不同柱溫（25、30、35 ℃）進(jìn)行測(cè)定，各條件平行操作3次，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算樣品中7種活性成分的含量，結(jié)果如表4所示。由表4可知，7種活性成分含量的RSD均小于3.0%，表明該方法耐用性良好。

2.4 樣品測(cè)定

取58批崖桑皮和桑白皮藥材粉末各適量，分別按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并按外標(biāo)法計(jì)算藥材中7種活性成分的含量，每批藥材平行測(cè)定3次。采用SPSS 20.0軟件對(duì)含量結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，比較不同基原崖桑皮和桑白皮藥材中7種活性成分的含量差異性，結(jié)果如表5、表6所示。

由表5、表6可知：（1）不同批次崖桑皮或不同批次桑白皮中7種活性成分的含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（2）崖桑皮中新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸、紫云英苷、山柰酚、桑辛素和異槲皮素的平均含量分別為0.304、22.462、1.730、1.308、1.593、2.842、0.657 mg/g，平均總含量為30.896 mg/g;桑白皮中上述7種活性成分的平均含量分別為0.305、22.995、2.486、2.438、2.916、4.158、1.264 mg/g，平均總含量為36.562 mg/g。無(wú)論是單一成分含量還是總含量，桑白皮均高于崖桑皮。編號(hào)為S5的桑白皮的總含量最高（達(dá)到64.144 mg/g），編號(hào)為Y45的崖桑皮的總含量最低（僅為2.272 mg/g）。（3）從總體上看，大部分崖桑皮樣品藥材中新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸和桑辛素的含量高于其對(duì)照藥材，而紫云英苷（編號(hào)Y36樣品除外）、山柰酚、異槲皮素的含量均低于其對(duì)照藥材。桑白皮樣品藥材中新綠原酸、綠原酸和桑辛素（編號(hào)S2樣品除外）的含量高于其對(duì)照藥材，而桑皮苷A（編號(hào)S5樣品除外）、紫云英苷（編號(hào)S2樣品除外）、山柰酚（編號(hào)S4樣品除外）和異槲皮素的含量低于其對(duì)照藥材。

2.5 獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)

采用SPSS 22.0軟件對(duì)崖桑皮和桑白皮藥材中7種活性成分的含量數(shù)據(jù)進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，分析崖桑皮與桑白皮之間7種活性成分含量的差異性。結(jié)果表明，崖桑皮與桑白皮中山柰酚的含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而其他6種活性成分的含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），如表7所示。

2.6 主成分分析

采用SPSS 22.0軟件對(duì)崖桑皮和桑白皮藥材中7種活性成分進(jìn)行主成分分析，結(jié)果提取到了3個(gè)特征值>1的主成分。其中，主成分1的特征值為2.443，特征貢獻(xiàn)率為34.906%;主成分2的特征值為1.499，特征貢獻(xiàn)率為21.416%;主成分3的特征值為1.004，特征貢獻(xiàn)率為14.349%;3個(gè)主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率為70.671%。主成分1主要反映了紫云英苷、山柰酚、桑辛素、異槲皮素的信息;主成分2主要反映了新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸的信息;主成分3主要反映了桑辛素的信息。

對(duì)提取的主成分1、2、3分別計(jì)算得分和排序，計(jì)算公式為：

F1=0.104X1-0.041X2+0.136X3+0.337X4+0.357X5+0.035X6+0.369X7

F2=0.422X1+0.418X2+0.434X3-0.950X4-0.640X5+0.316X6-0.114X7

F3=-0.375X1+0.349X2-0.440X3+0.135X4+0.610X5+0.717X6+0.570X7

上式中，F(xiàn)1、F2、F3分別表示第1、2、3個(gè)主成分得分，X1～X7分別表示7種活性成分的標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)。再以3個(gè)主成分所對(duì)應(yīng)的特征貢獻(xiàn)率和累計(jì)貢獻(xiàn)率的比值為權(quán)重，進(jìn)行綜合得分計(jì)算和排序，計(jì)算公式為F綜=0.494F1+0.303F2+0.203F3，可得出：編號(hào)Y48藥材的主成分1得分最高，為2.908;編號(hào)S5藥材的主成分2得分最高，為3.309;編號(hào)S4藥材的主成分3得分最高，為3.754。此外，編號(hào)S4藥材的綜合得分最高，為1.555，表明該藥材樣品的品質(zhì)較其他藥材樣品的品質(zhì)更高[13]。

根據(jù)3個(gè)主成分的得分繪制散點(diǎn)圖，可將58批藥材分成5組（圖2），其中編號(hào)Y48藥材為第1組，編號(hào)S5藥材為第2組，編號(hào)Y14藥材為第3組，編號(hào)Y41藥材為第4組，其余54組藥材聚在一起歸為一大組，即第5組。此結(jié)果說(shuō)明主成分分析未能將崖桑皮與桑白皮藥材區(qū)分開(kāi)來(lái)。

2.7 聚類(lèi)分析

以崖桑皮和桑白皮藥材中7種活性成分的含量為依據(jù)，采用SPSS 22.0軟件以歐氏距離法進(jìn)行聚類(lèi)分析，結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，當(dāng)歐氏距離小于15時(shí)，58批藥材可分為5大類(lèi)——第Ⅰ類(lèi)：Y48、S1;第Ⅱ類(lèi)：S5;第Ⅲ類(lèi)：S4;第Ⅳ類(lèi)：Y12、Y14;第Ⅴ類(lèi)：剩余批次藥材。同時(shí)，7種活性成分含量相近或相同的崖桑皮和桑白皮的距離大多比較接近，因此不能將崖桑皮和桑白皮進(jìn)行區(qū)分。此結(jié)果與主成分分析結(jié)果大體一致。崖桑皮中7種活性成分的含量與桑白皮無(wú)明顯差別，這一結(jié)論為崖桑皮代替桑白皮使用提供了理論支持。

3 討論

3.1 所測(cè)指標(biāo)成分的選擇

桑屬植物中主要活性成分為黃酮類(lèi)和芪類(lèi)物質(zhì)，本研究結(jié)合崖桑皮和桑白皮的臨床藥效以及前人研究?jī)?nèi)容，最終選擇了黃酮類(lèi)化合物異槲皮素、紫云英苷、山柰酚、桑辛素，苯丙素類(lèi)化合物綠原酸、新綠原酸和芪類(lèi)化合物桑皮苷A作為桑白皮和崖桑皮的有效成分含量測(cè)定指標(biāo)。其中，綠原酸和新綠原酸具有抗病毒、抗腫瘤、抗菌、解熱、抗血栓等功效[12，14-16];桑皮苷A在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化為氧化白藜蘆醇，發(fā)揮降糖作用[17-18];紫云英苷和異槲皮素具有消炎、鎮(zhèn)痛、抗菌、抗過(guò)敏、抗肝毒等藥理作用[19-21];桑辛素具有抑制血小板聚集、抗超氧化自由基形成、降血糖等作用[22-23];山柰酚對(duì)腦缺血、中風(fēng)、腫瘤等有明顯的治療作用[24-25]。

3.2 提取方法的選擇

在供試品溶液的制備過(guò)程中，本研究分別考察了不同提取方式（超聲、回流）、提取溶劑（體積分?jǐn)?shù)分別為30%、50%、70%、80%、100%的甲醇和乙醇溶液）、提取時(shí)間（15、30、45、60 min）、料液比[1 ∶ 30、1 ∶ 50、1 ∶ 70、1 ∶ 200 （g/mL）]和提取次數(shù)（1、2、3次）對(duì)崖桑皮和桑白皮中7種活性成分含量的影響。結(jié)果顯示，提取方式為超聲提取、提取溶劑為70%甲醇溶液、提取時(shí)間為30 min、料液比為1 ∶ 50（g/mL）、提取1次的提取效果最佳。

3.3 活性成分測(cè)定結(jié)果分析

雖然從整體上看，上述7種活性成分無(wú)論是單一成分含量還是總含量，桑白皮均高于崖桑皮，但獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，7種活性成分中只有山柰酚的含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;主成分分析和聚類(lèi)分析結(jié)果也表明，崖桑皮與桑白皮中7種活性成分的含量無(wú)明顯差別。以上結(jié)果顯示，除山柰酚外，崖桑皮和桑白皮在主要活性成分上具有一定的質(zhì)量等同性，因此在抗病毒、抗菌、解熱等藥理活性方面，以華桑和雞桑為來(lái)源的崖桑皮可作為桑白皮的代替品使用。

對(duì)照藥材是一種中藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，具有高度均勻性、量值準(zhǔn)確性以及良好的穩(wěn)定性[26]。本研究以崖桑皮和桑白皮對(duì)照藥材的含量為參考標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)大部分崖桑皮樣品中新綠原酸、桑皮苷A、綠原酸和桑辛素的含量均高于其對(duì)照藥材，但紫云英苷（編號(hào)Y36樣品除外）、山柰酚、異槲皮素的含量均低于其對(duì)照藥材;而桑白皮樣品中僅有新綠原酸、綠原酸和桑辛素（編號(hào)S2樣品除外）的含量高于其對(duì)照藥材。這表明所采集的重慶地區(qū)不同來(lái)源崖桑皮和桑白皮的藥材樣品低于對(duì)照藥材的含量標(biāo)準(zhǔn)，入藥需結(jié)合各有效成分的藥效學(xué)做進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，本研究采用HPLC法對(duì)重慶地區(qū)不同基原崖桑皮和桑白皮中7種活性成分的含量進(jìn)行了測(cè)定，測(cè)定指標(biāo)涵蓋了上述2種藥材的主要有效成分。該方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確度高，可為完善上述2種藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。測(cè)定結(jié)果顯示，崖桑皮和桑白皮在主要活性成分上具有一定的質(zhì)量等同性，以華桑和雞桑為來(lái)源的崖桑皮可作為桑白皮的代替品使用。此外，本研究存在一些不足，首先是藥材的采集產(chǎn)地比較單一，僅能反映重慶地區(qū)崖桑皮和桑白皮中7種有效成分的質(zhì)量等同性;其次是測(cè)定的芪類(lèi)成分較少。因此，為了全面評(píng)價(jià)崖桑皮和桑白皮的質(zhì)量，下一步將采集其他地區(qū)的樣品，測(cè)定包括黃酮類(lèi)、芪類(lèi)、核苷類(lèi)、三萜酸類(lèi)、多糖類(lèi)等多種活性成分的含量，以期進(jìn)一步對(duì)不同基原崖桑皮和桑白皮的藥材品質(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

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（收稿日期：2020-12-23 修回日期：2021-06-10）

（編輯：胡曉霖）