杜玉杰 馬生健 黃鑄鋒

摘 要 采用50%乙醇回流法，對海稻86和福建紅兩個紅米品種的大米黃酮含量進行了測定和分析。結(jié)果表明：海稻86大米黃酮含量為0.063%，福建紅大米黃酮含量為0.030%，兩者均屬于高黃酮類稻米資源，但海稻86大米黃酮含量約為福建紅的2倍。因此，在水稻資源黃酮的開發(fā)利用方面，海稻86比福建紅具有更高的研究和利用價值。

關(guān)鍵詞 海稻86;福建紅;大米;黃酮含量;提取率

中圖分類號：S511 文獻標志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.31.027

隨著國民經(jīng)濟水平的提高，稻米已從果腹食品轉(zhuǎn)變?yōu)榧牢丁I養(yǎng)、保健等為一體的復(fù)合性功能食品。稻米具有抗衰老、增強免疫力、預(yù)防糖尿病和促進減肥等保健功能，備受消費者青睞，有較高的研究利用價值和良好的社會效益、經(jīng)濟效益[1]。海稻86（HD86）因谷殼生有細長芒又稱“長毛谷”，1986年首次在廣東湛江市遂溪縣虎頭坡村海灘發(fā)現(xiàn)，有良好的耐鹽堿、抗病蟲害、抗旱澇等特質(zhì)，對解決鹽堿地利用、糧食供給及節(jié)約淡水資源等問題意義重大[2-7]。

HD86大米營養(yǎng)優(yōu)于普通大米，富含礦物質(zhì)、微量元素和膳食纖維，蛋白質(zhì)為普通大米的兩倍，脂類含量相對較高，因此米飯味香口感好[8];HD86大米中所含生物活性物質(zhì)黃酮在消除自由基、提高免疫力、抗菌、抗衰老、降血脂、降血壓、降血糖、消炎和治療心腦血管疾病等方面具有重要作用[9-12]，在藥物、保健品、化妝品、食品及飼料等行業(yè)亦有較高的利用價值。福建紅富含微量元素和黃酮類化合物、生物堿、植物甾醇及胡蘿卜素等功能活性成分，有升高血漿高密度脂肪蛋白膽固醇（HDL）和提高機體抗氧化能力、抑制癌細胞等功效。李清華等[13]對23個紅米品種的大米黃酮含量進行了測定，但未包括HD86和福建紅。近年關(guān)于HD86的研究日益增多，目前已對HD86的生理基礎(chǔ)、光溫反應(yīng)特性、鹽堿耐鹽性鑒定及耐性特征等進行了研究報道[14-17]，但尚未見到對其大米中黃酮等功能活性成分的研究報道。目前尚無關(guān)于福建紅的專題研究報道。

本文通過采用提取率較高的乙醇回流法，對HD86和福建紅大米中的黃酮含量進行測定分析，為進一步發(fā)掘HD86、福建紅的食用價值和保健功能提供科學(xué)依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐。

1 ?材料與方法

1.1 ?試驗材料

本試驗所用HD86種子采集于廣東省湛江市遂溪縣虎頭坡村海灘，后種植于嶺南師范學(xué)院植物園（東經(jīng)110°20′，北緯21°16′）;福建紅種子購自福建本地種子店，也種植于嶺南師范學(xué)院植物園。試驗所用儀器和試劑見表1。

1.2 ?試驗方法

試驗采用乙醇回流提取法，對HD86和福建紅的黃酮含量進行測定分析。利用50%乙醇作為提取劑，蘆丁為對照品，亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色體系，設(shè)置波長510 nm，利用紫外分光光度法測定HD86和福建紅大米的黃酮含量。

1.2.1 ?標準曲線制備

精確稱取6.2 mg蘆丁樣品置于25.0 mL容量瓶中，用50%乙醇定容并振蕩混勻，以獲得0.248 mg·mL-1的蘆丁標準溶液。準備7支試管，用移液槍分別吸取蘆丁標準溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL于6支試管中，最后一個試管不添加蘆丁標準溶液，只加入顯色劑，作為空白對照，然后將0.5 mL的5%亞硝酸鈉溶液添加到每個試管中，搖勻，放置6.0 min，然后添加0.5 mL的10%硝酸鋁溶液，搖勻，放置6.0 min，然后添加5.0 mL的4%氫氧化鈉溶液，最后加蒸餾水定容至12.5 mL，充分搖勻，放置15.0 min，立即用紫外分光光度儀器測量510 nm波長處的吸光度，以吸光度為縱坐標，蘆丁標準溶液的濃度（mg·mL-1）為橫坐標繪制標準曲線（如圖1），得回歸方程y=1.123 3x+0.022 7，相關(guān)系數(shù)為R2=0.998 8，表明曲線已滿足測量要求，且在0.124～0.744 mg·mL-1范圍內(nèi)具有線性關(guān)系。

1.2.2 ?HD86和福建紅的黃酮含量測定

將收割的HD86、福建紅分別置于礱谷機中脫去外殼得到大米，再放入電熱恒溫干燥箱中40 ℃烘干1 h，冷卻至室溫，用固體樣品粉碎機粉碎，過80目網(wǎng)篩，得待測樣品。分別稱取適量樣品于圓底燒瓶中并加入12倍體積的50%乙醇，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀100 ℃回流1 h，然后用高速冷凍離心機4 000 r·min-1離心20.0 min，取上清液于容量瓶中;重復(fù)上述過程進行二次離心，取上清液，用50%乙醇定容至25.0 mL，搖勻。取4支試管，用移液槍從容量瓶中取1.0 mL待測液放入各試管，加入0.5 mL的5%亞硝酸鈉溶液，震蕩混勻，放置6.0 min，再加入0.5 mL的10%硝酸鋁溶液，震蕩混勻，放置6.0 min，然后加入5.0 mL的4%氫氧化鈉溶液，空白對照不添加4%氫氧化鈉溶液，最后加水定容到10.0 mL，震蕩混勻，放置15.0 min。用紫外可見分光光度計測量510 nm處的吸光度。將吸光值代入蘆丁標準曲線回歸方程y=1.123 ?3x+0.022 7，計算樣品的黃酮濃度x（mg·mL-1），進而計算黃酮含量和黃酮浸出率。

黃酮含量=x×V×10-3

黃酮提取率=黃酮含量/大米樣品量×100%

2 ?結(jié)果與分析

稱取HD86和福建紅樣品通過乙醇回流提取，經(jīng)亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色體系進行顯色反應(yīng)，用紫外可見分光光度計測量吸光度，結(jié)果如表2所示?？梢钥闯?，HD86大米黃酮提取率為0.063%，黃酮提取量為0.001 3 g;福建紅大米黃酮提取率為0.030%，黃酮提取量為0.000 6 g。HD86大米黃酮含量約為福建紅大米黃酮含量的2倍，在水稻資源黃酮的開發(fā)利用方面，HD86具有更高的利用價值。

3 ?小結(jié)與討論

本試驗結(jié)果表明，HD86大米的黃酮含量約為福建紅大米的2倍，在水稻資源黃酮的開發(fā)利用方面，HD86具有更高的利用價值。本試驗主要參考涼粉草總黃酮的提取方法和工藝[18-19]，采用12倍體積的50%乙醇作為提取劑，試驗表明當乙醇體積分數(shù)為50%且用量增加到12倍體積時，黃酮的提取量和提取率趨于平衡且可節(jié)約提取成本;采用100 ℃回流2 h，此條件下黃酮提取率最高且可有效減少因浸出不充分而帶來的誤差，提取效果最佳;采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉顯色體系進行顯色反應(yīng)，紫外吸收波長510 nm，可最大限度消除樣品的背景干擾，使樣品測定的結(jié)果更可靠。綜上所述，本試驗測得結(jié)果誤差較小，較準確、可靠。

李清華等[13]對不同環(huán)境條件下種植的23個紅米品種、8個黑米品種和31個白米品種大米黃酮含量進行了研究分析，其中紅米品種大米黃酮含量為0.000～0.097%，平均含量為0.025%;黑米品種大米黃酮含量為0.000～0.185%，平均含量為0.093%;白米品種大米黃酮含量為0.000～0.027%，平均含量為0.007%;這表明黑米黃酮含量極顯著高于紅米和白米，紅米黃酮含量極顯著高于白米。本試驗所測HD86和福建紅2個紅米樣品的黃酮含量分別為0.063%和0.030%，高于23個紅米品種的黃酮含量平均值，介于黑米和白米黃酮含量之間，與李清華等[13]、孫玲等[20-21]所得結(jié)論相符。值得注意的是，各水稻品種大米黃酮含量會因環(huán)境條件不同產(chǎn)生一定的差異。

陳庭木等[22]對985份水稻種質(zhì)資源大米黃酮含量進行了測定分析，將其分為高黃酮、較高黃酮、中等黃酮、低黃酮四類，黃酮含量的等級區(qū)間分別為0.045%～0.074%（樣品數(shù)4）、0.027%～0.045%（樣品數(shù)32）、0.010%～0.027%（樣品數(shù)128）、0～0.010%（樣品數(shù)821），表明高黃酮和較高黃酮含量的水稻資源極少，僅占所測樣品的0.41%和0.32%。本試驗所測HD86和福建紅兩個紅米樣品大米黃酮含量分別屬于高黃酮類和較高黃酮類，豐富了高黃酮水稻種質(zhì)資源庫。

提高稻米營養(yǎng)品質(zhì)對促進我國人民的身體健康有著十分重要的作用，黃酮是稻米保健品質(zhì)研究中的一項重要內(nèi)容。將HD86和福建紅的高黃酮特性與水稻其他優(yōu)質(zhì)資源結(jié)合進行育種，可為免疫力較低者、“三高”患者及肝功能不良者提供理想的膳食原料，達到提高免疫力，調(diào)理血糖、血脂、血壓等養(yǎng)生保健功能。此外，稻米加工過程中的主要副產(chǎn)品米糠中含有大約80%的黃酮含量[13，23]。開展米糠中黃酮的提取方法、提取工藝研究也是稻米綜合開發(fā)利用的重要途徑，可以大幅度提高稻米的經(jīng)濟效益和利用價值。因此，本研究補充和完善了高黃酮水稻品種資源庫，為開展高黃酮含量稻米的選育拓寬了篩選渠道，具有較高的科學(xué)研究和利用價值。

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（責任編輯：易 ?婧）

收稿日期：2021-08-06

基金項目：湛江市科技發(fā)展專項（2020A03006）;嶺南師范學(xué)院自然科學(xué)重點項目（LZ1092）;廣東省科技專項（2020A03027）。

作者簡介：杜玉杰（1982— ），女，河南周口人，碩士，副教授，主要從事生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究。E-mail： xiaoshuidi156@126.com。

為通信作者，E-mail： mashengjian1@163.com。