葉雨東
(廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院,廣西 柳州,545005)
結(jié)核病屬于臨床較為常見的傳染性疾病,主要由于機(jī)體感染致病菌(結(jié)核分枝桿菌)所致,可累及至機(jī)體多個臟器,其中以肺部感染結(jié)核最為多見[1]。肺結(jié)核患者主要臨床表現(xiàn)包括咳嗽、咳痰、低熱(午后顯著)、咯血、胸痛及胸悶或呼吸困難等[2]。結(jié)核病是由T細(xì)胞介導(dǎo)的保護(hù)性免疫反應(yīng)與病理學(xué)免疫反應(yīng)調(diào)控失衡所引發(fā)的免疫疾病,人體免疫功能特別是細(xì)胞免疫狀態(tài)對本病發(fā)生起到一定誘導(dǎo)作用,并在病程進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[3]。故通過檢測結(jié)核感染T細(xì)胞變化情況可為臨床疾病診斷提供一定依據(jù)。本研究對我院肺結(jié)核患者開展結(jié)核感染T細(xì)胞檢測,并探討其臨床診斷價值,內(nèi)容如下。
1.1 一般資料 選取2019年9月~2020年9月我院115例疑似肺結(jié)核患者與98例非結(jié)核患者;甲組男女比例68:47,年齡18~65歲,均值(41.54±3.65)歲;乙組男女比例58:40,年齡 19~64歲,均值(41.56±3.62)歲,以上一般資料(P>0.05),此項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]:均符合肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn);所有受檢者均知情同意參與本次實(shí)驗。排除標(biāo)準(zhǔn):檢測不合格者;合并其他病毒性感染者;入組前應(yīng)用免疫抑制劑者。
1.2 方法 所有受檢者均接受痰涂片抗酸染色鏡檢:抗酸桿菌染色嚴(yán)格依據(jù)《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》開展相關(guān)操作,試劑由珠海貝索公司提供。隨后開展T-SPOT.TB檢測:嚴(yán)格按照購自廣州迪澳醫(yī)療科技有限公司的T-SPOT.TB試劑盒相關(guān)說明書執(zhí)行規(guī)范操作,測定方法為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法。采集受檢者靜脈血4mL,室溫(18~22℃)放置4h內(nèi)完成分離,標(biāo)本內(nèi)加入生理鹽水混勻后再加至淋巴細(xì)胞分離液內(nèi),于22℃、1800g離心20min后分離得到單個核細(xì)胞(PBMCs);提取PBMCs細(xì)胞層,使用RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ)齊至12mL進(jìn)行10min離心,棄上清、再補(bǔ)齊至5mL經(jīng)吹打沉淀重懸后開展10min離心,棄上清、加入1mL無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。重懸細(xì)胞沉淀后,取10μL細(xì)胞懸液加入0.4%臺盼藍(lán)染液中,混勻后取混合液加入血球計數(shù)板,顯微鏡下計數(shù);無血清培養(yǎng)基配置至少400μL的細(xì)胞懸液(濃度為2.5×106個/ml)待用。
1.3 觀察指標(biāo) (1)T-SPOT.TB陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn):參照試劑盒說明書對抗原A和(或)抗原B孔內(nèi)反應(yīng)結(jié)果實(shí)施判定,①陰性對照孔沒有或不超過10個斑點(diǎn)而陽性對照孔斑點(diǎn)數(shù)超過20個;②陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)為0~5時且(抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù))-(陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù))≥6;③陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)為6~10個時,待測樣本應(yīng)為抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)≥2倍的陰性對照孔的斑點(diǎn)數(shù),符合以上標(biāo)準(zhǔn)判斷為陽性,即有反應(yīng)性[5]。其中6~10個斑點(diǎn)數(shù)表示輕度陽性、11~50個表示明顯陽性、>50個表示超強(qiáng)陽性。(2)敏感度=真陽性/(真陽性+假陰性)*百分比;特異性=真陰性/(真陰性+假陽性)*百分比;診斷準(zhǔn)確率=(真陽性+真陰性)*百分比[6]。
1.4 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用統(tǒng)計軟件SPSS 21.0計算數(shù)據(jù),[n(%)]表示計數(shù)資料,行χ2檢驗,P<0.05為差異有意義。
2.1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較 甲組受檢者T-SPOT.TB檢測A抗原及B抗原陽性率顯著高于乙組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),如表1所示:
表1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較[n(%)]
2.2 兩種檢驗方式與金標(biāo)準(zhǔn)比對 痰涂片檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對得出真陽性81例,假陽性6例,真陰性8例,假陰性20例;T-SPOT.TB檢測結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對得出真陽性93例,假陽性1例,真陰性13例,假陰性8例,如表2、3所示:
表2 痰涂片檢查與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對結(jié)果
表3 T-SPOT.TB檢測與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對結(jié)果
2.3 不同檢驗方法的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值 T-SPOT.TB檢測的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值均高于痰涂片檢查,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),如表4所示:
表4 兩種檢驗方式的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值比較[n(%)]
既往采用的抗酸染色盡管具有良好的特異度,但其陽性率偏低。臨床所有肺結(jié)核患病群體中涂陰肺結(jié)核占比可達(dá)40%-60%,如何早期明確診斷、及時對涂陰肺結(jié)核開展針對性治療成為目前控制結(jié)核病傳播的關(guān)鍵[7]。穿刺病理組織檢測存在有創(chuàng)性、患者耐受性差、病變部位等問題,導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到一定限制;且與其他肉芽腫病變的鑒別難度也較大。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)存在耗時過長的弊端,例如羅氏培養(yǎng)至少需要8周才可明確標(biāo)本是否為陽性,嚴(yán)重影響臨床治療的開展。故積極探索更為科學(xué)且高效的檢查方法以明確臨床診斷顯得尤為必要。
研究指出,肺結(jié)核患者疾病發(fā)生與發(fā)展與機(jī)體T淋巴細(xì)胞比例密切相關(guān);而淋巴細(xì)胞比例失衡可受到多種因素影響,其中激素及免疫抑制藥物應(yīng)用對機(jī)體T細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用,從而破壞外周血T細(xì)胞的動態(tài)平衡[8]。石衛(wèi)武[9]等學(xué)者報道中,T-SPOT.TB在活動性結(jié)核病診斷中具有良好的輔助作用,結(jié)核病陽性率(85.71%)、疑似結(jié)核病陽性率(72.31%)及非結(jié)核病陽性率(28.63%)存在明顯差異。T-SPOT.TB檢測開展期間結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生刺激,促使其大量釋放IFN-T,可重點(diǎn)檢測活細(xì)胞的功能;且刺激原ESAT-6、CFP-IO抗原基因均嚴(yán)格限制于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群及4種非結(jié)核分枝桿菌,一定程度上保證試驗的特異度。本研究結(jié)果顯示,T-SPOT.TB檢測的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值均顯著高于痰涂片檢查,分析原因可能為T-SPOT.TB檢測主要通過刺激致敏淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ,與微孔板上的IFN-γ抗體結(jié)合后借助顯色反應(yīng)后進(jìn)行結(jié)果判定;且該試驗不易受到外界因素(如T淋巴細(xì)胞數(shù)量、非結(jié)核桿菌及卡介苗)的影響、靈敏度較高。本研究中,甲組A抗原及B抗原陽性率均高于乙組,充分說明T-SPOT.TB檢測能夠有效區(qū)分肺結(jié)核與非結(jié)核患者。此外,還有學(xué)者發(fā)現(xiàn),高斑點(diǎn)數(shù)時A抗原陽性率相對較高,其認(rèn)為A抗原斑點(diǎn)數(shù)可能與結(jié)核活動性存在相關(guān)性[10]。不過值得注意的是,T-SPOT.TB檢測活動性結(jié)核病的敏感度及特異度可能受抗酸染色及培養(yǎng)結(jié)果、結(jié)核病灶部位、陳舊性結(jié)核病灶、非結(jié)核分枝桿菌感染等因素影響,故臨床醫(yī)師診斷仍需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析。
綜上所述,T-SPOT.TB檢測在臨床應(yīng)用后獲得滿意效果,不僅能夠顯著提高肺結(jié)核患者的陽性檢出率,且具有較高的敏感度,特異性良好,從而有助于臨床診斷準(zhǔn)確率提高,值得臨床采納與推廣。