葉雨東

（廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院，廣西 柳州，545005）

結(jié)核病屬于臨床較為常見的傳染性疾病，主要由于機(jī)體感染致病菌（結(jié)核分枝桿菌）所致，可累及至機(jī)體多個臟器，其中以肺部感染結(jié)核最為多見[1]。肺結(jié)核患者主要臨床表現(xiàn)包括咳嗽、咳痰、低熱（午后顯著）、咯血、胸痛及胸悶或呼吸困難等[2]。結(jié)核病是由T細(xì)胞介導(dǎo)的保護(hù)性免疫反應(yīng)與病理學(xué)免疫反應(yīng)調(diào)控失衡所引發(fā)的免疫疾病，人體免疫功能特別是細(xì)胞免疫狀態(tài)對本病發(fā)生起到一定誘導(dǎo)作用，并在病程進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[3]。故通過檢測結(jié)核感染T細(xì)胞變化情況可為臨床疾病診斷提供一定依據(jù)。本研究對我院肺結(jié)核患者開展結(jié)核感染T細(xì)胞檢測，并探討其臨床診斷價值，內(nèi)容如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年9月～2020年9月我院115例疑似肺結(jié)核患者與98例非結(jié)核患者；甲組男女比例68：47，年齡18～65歲，均值（41.54±3.65）歲；乙組男女比例58：40，年齡 19～64歲，均值（41.56±3.62）歲，以上一般資料（P＞0.05），此項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)[4]：均符合肺結(jié)核臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)；所有受檢者均知情同意參與本次實(shí)驗。排除標(biāo)準(zhǔn)：檢測不合格者；合并其他病毒性感染者；入組前應(yīng)用免疫抑制劑者。

1.2 方法 所有受檢者均接受痰涂片抗酸染色鏡檢：抗酸桿菌染色嚴(yán)格依據(jù)《痰涂片鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》開展相關(guān)操作，試劑由珠海貝索公司提供。隨后開展T-SPOT.TB檢測：嚴(yán)格按照購自廣州迪澳醫(yī)療科技有限公司的T-SPOT.TB試劑盒相關(guān)說明書執(zhí)行規(guī)范操作，測定方法為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法。采集受檢者靜脈血4mL，室溫（18～22℃）放置4h內(nèi)完成分離，標(biāo)本內(nèi)加入生理鹽水混勻后再加至淋巴細(xì)胞分離液內(nèi)，于22℃、1800g離心20min后分離得到單個核細(xì)胞（PBMCs）；提取PBMCs細(xì)胞層，使用RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ)齊至12mL進(jìn)行10min離心，棄上清、再補(bǔ)齊至5mL經(jīng)吹打沉淀重懸后開展10min離心，棄上清、加入1mL無血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。重懸細(xì)胞沉淀后，取10μL細(xì)胞懸液加入0.4%臺盼藍(lán)染液中，混勻后取混合液加入血球計數(shù)板，顯微鏡下計數(shù)；無血清培養(yǎng)基配置至少400μL的細(xì)胞懸液（濃度為2.5×106個/ml）待用。

1.3 觀察指標(biāo) （1）T-SPOT.TB陽性結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：參照試劑盒說明書對抗原A和（或）抗原B孔內(nèi)反應(yīng)結(jié)果實(shí)施判定，①陰性對照孔沒有或不超過10個斑點(diǎn)而陽性對照孔斑點(diǎn)數(shù)超過20個；②陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)為0～5時且（抗原A或抗原B孔的斑點(diǎn)數(shù)）-（陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)）≥6；③陰性對照孔斑點(diǎn)數(shù)為6～10個時，待測樣本應(yīng)為抗原A或抗原B斑點(diǎn)數(shù)≥2倍的陰性對照孔的斑點(diǎn)數(shù)，符合以上標(biāo)準(zhǔn)判斷為陽性，即有反應(yīng)性[5]。其中6～10個斑點(diǎn)數(shù)表示輕度陽性、11～50個表示明顯陽性、>50個表示超強(qiáng)陽性。（2）敏感度=真陽性/（真陽性+假陰性）*百分比；特異性=真陰性/（真陰性+假陽性）*百分比；診斷準(zhǔn)確率=（真陽性+真陰性）*百分比[6]。

1.4 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用統(tǒng)計軟件SPSS 21.0計算數(shù)據(jù)，[n（%）]表示計數(shù)資料，行χ2檢驗，P＜0.05為差異有意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較 甲組受檢者T-SPOT.TB檢測A抗原及B抗原陽性率顯著高于乙組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），如表1所示：

表1 兩組受檢者T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較[n（%）]

2.2 兩種檢驗方式與金標(biāo)準(zhǔn)比對 痰涂片檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對得出真陽性81例，假陽性6例，真陰性8例，假陰性20例；T-SPOT.TB檢測結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比對得出真陽性93例，假陽性1例，真陰性13例，假陰性8例，如表2、3所示：

表2 痰涂片檢查與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對結(jié)果

表3 T-SPOT.TB檢測與組織病理學(xué)檢查結(jié)果比對結(jié)果

2.3 不同檢驗方法的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值 T-SPOT.TB檢測的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值均高于痰涂片檢查，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），如表4所示：

表4 兩種檢驗方式的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值比較[n（%）]

3.討論

既往采用的抗酸染色盡管具有良好的特異度，但其陽性率偏低。臨床所有肺結(jié)核患病群體中涂陰肺結(jié)核占比可達(dá)40%-60%，如何早期明確診斷、及時對涂陰肺結(jié)核開展針對性治療成為目前控制結(jié)核病傳播的關(guān)鍵[7]。穿刺病理組織檢測存在有創(chuàng)性、患者耐受性差、病變部位等問題，導(dǎo)致其臨床應(yīng)用受到一定限制；且與其他肉芽腫病變的鑒別難度也較大。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)存在耗時過長的弊端，例如羅氏培養(yǎng)至少需要8周才可明確標(biāo)本是否為陽性，嚴(yán)重影響臨床治療的開展。故積極探索更為科學(xué)且高效的檢查方法以明確臨床診斷顯得尤為必要。

研究指出，肺結(jié)核患者疾病發(fā)生與發(fā)展與機(jī)體T淋巴細(xì)胞比例密切相關(guān)；而淋巴細(xì)胞比例失衡可受到多種因素影響，其中激素及免疫抑制藥物應(yīng)用對機(jī)體T細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用，從而破壞外周血T細(xì)胞的動態(tài)平衡[8]。石衛(wèi)武[9]等學(xué)者報道中，T-SPOT.TB在活動性結(jié)核病診斷中具有良好的輔助作用，結(jié)核病陽性率（85.71%）、疑似結(jié)核病陽性率（72.31%）及非結(jié)核病陽性率（28.63%）存在明顯差異。T-SPOT.TB檢測開展期間結(jié)核分枝桿菌特異性抗原對T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生刺激，促使其大量釋放IFN-T，可重點(diǎn)檢測活細(xì)胞的功能；且刺激原ESAT-6、CFP-IO抗原基因均嚴(yán)格限制于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群及4種非結(jié)核分枝桿菌，一定程度上保證試驗的特異度。本研究結(jié)果顯示，T-SPOT.TB檢測的準(zhǔn)確率、特異性、敏感度、陽性與陰性預(yù)測值均顯著高于痰涂片檢查，分析原因可能為T-SPOT.TB檢測主要通過刺激致敏淋巴細(xì)胞分泌IFN-γ，與微孔板上的IFN-γ抗體結(jié)合后借助顯色反應(yīng)后進(jìn)行結(jié)果判定；且該試驗不易受到外界因素（如T淋巴細(xì)胞數(shù)量、非結(jié)核桿菌及卡介苗）的影響、靈敏度較高。本研究中，甲組A抗原及B抗原陽性率均高于乙組，充分說明T-SPOT.TB檢測能夠有效區(qū)分肺結(jié)核與非結(jié)核患者。此外，還有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，高斑點(diǎn)數(shù)時A抗原陽性率相對較高，其認(rèn)為A抗原斑點(diǎn)數(shù)可能與結(jié)核活動性存在相關(guān)性[10]。不過值得注意的是，T-SPOT.TB檢測活動性結(jié)核病的敏感度及特異度可能受抗酸染色及培養(yǎng)結(jié)果、結(jié)核病灶部位、陳舊性結(jié)核病灶、非結(jié)核分枝桿菌感染等因素影響，故臨床醫(yī)師診斷仍需結(jié)合臨床進(jìn)行綜合分析。

綜上所述，T-SPOT.TB檢測在臨床應(yīng)用后獲得滿意效果，不僅能夠顯著提高肺結(jié)核患者的陽性檢出率，且具有較高的敏感度，特異性良好，從而有助于臨床診斷準(zhǔn)確率提高，值得臨床采納與推廣。