羅巧華 趙雅潔 李洪琴 顧夕章 丁桂濤 王光花 徐奇友* 劉 匆*

(1.湖州師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，水生動(dòng)物繁育與營(yíng)養(yǎng)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室，浙江省水生生物資源養(yǎng)護(hù)與開發(fā)技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖州 313000；2.新希望六和股份有限公司，成都 610011)

我國(guó)是水產(chǎn)養(yǎng)殖大國(guó)，隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，使得對(duì)魚粉的需求量急劇增加。然而，魚粉需求量的急劇增加、海洋漁業(yè)資源的衰退均導(dǎo)致了魚粉資源的短缺，魚粉價(jià)格不斷上漲。利用合適的蛋白質(zhì)源替代魚粉，是水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要途徑。魚溶漿作為魚粉副產(chǎn)品，成為魚粉的理想替代品。魚溶漿已被用作各種海水養(yǎng)殖物種的飼料成分，包括歐洲鱸(Dicentrarchuslabrax)[1]、南非螺鮑(Haliotismidae)[2]和凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)[3]。研究表明，魚溶漿不僅可以提高蛋白質(zhì)的消化率和生物利用率，還可以增強(qiáng)水生動(dòng)物的免疫機(jī)能和抗應(yīng)激能力[4-6]。王春利等[7]研究表明，飼料中添加5%魚溶漿對(duì)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)速度、飼料利用率和免疫機(jī)能有促進(jìn)作用。魚溶漿中含有溶解于水中的蛋白質(zhì)、小分子多肽、生物胺、牛磺酸、未知生長(zhǎng)因子以及游離氨基酸等成分，可以增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的消化吸收、免疫機(jī)能以及抗應(yīng)激能力[4-6]，但關(guān)于魚溶漿代替魚粉對(duì)羅氏沼蝦(Macrobrachiumrosenbergii)的影響還未見報(bào)導(dǎo)。因此，本研究以羅氏沼蝦為試驗(yàn)對(duì)象，研究不同比例魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦生長(zhǎng)性能、體組成、免疫指標(biāo)和腸道消化酶活性的影響，以期降低飼料中魚粉的使用量，為魚溶漿的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

羅氏沼蝦購(gòu)自江蘇數(shù)豐水產(chǎn)種業(yè)有限公司。試驗(yàn)用魚粉和魚溶漿由某公司提供，魚溶漿化學(xué)組成見表1。魚溶漿折合成12%含水量用于飼料配方，相關(guān)公式為：

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量(以88%干物質(zhì)計(jì))=實(shí)測(cè)值×0.88/(1-魚溶漿含水量)。

對(duì)照組(FM組)飼喂添加30%魚粉的基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組分別飼喂用魚溶漿替代20%(T20組)、40%(T40組)和60%(T60組)魚粉的試驗(yàn)飼料。試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表2。其中，魚粉、豆粕粉碎后過60目篩，磷酸二氫鈣和微量元素預(yù)混料過80目篩，逐級(jí)混勻后，加入豆油、大豆磷脂、魚油以及自來(lái)水再次混勻，經(jīng)雙螺桿擠條機(jī)加工成直徑為1.5 mm的長(zhǎng)條狀，后手動(dòng)搓成飼料顆粒，38 ℃烘干并保存?zhèn)溆谩?/p>

表2 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis) %

試驗(yàn)在湖州師范學(xué)院的室內(nèi)控溫循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)進(jìn)行，暫養(yǎng)1周后挑選平均體重為(4.99±0.19)g羅氏沼蝦160尾，隨機(jī)分成4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10尾蝦。試驗(yàn)期43 d，每天定時(shí)定量投喂(初始投喂量為體重的4%左右，此后根據(jù)攝食情況進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整)，每天投喂2次(07:30和19:30)。并在投食1 h后吸出剩余飼料，防止水質(zhì)惡化。飼養(yǎng)及試驗(yàn)期間控制水溫在20～30 ℃(前4周在26～30 ℃，后2周在20～22 ℃)，24 h連續(xù)沖氧。光照為自然光周期，并且在里面放置隱蔽物，以減少羅氏沼蝦的互相殘殺。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 生長(zhǎng)性能

養(yǎng)殖43 d后，禁食24 h后，撈取各缸羅氏沼蝦，稱重并記錄剩余數(shù)量，以計(jì)算羅氏沼蝦的成活率(survival rate，SR)、增重率(weight gain rate，WGR)、特定生長(zhǎng)率(specific growth rate，SGR)和飼料系數(shù)(feed conversion rate，F(xiàn)CR)，相關(guān)公式如下：

成活率(%)=(試驗(yàn)?zāi)┪r尾數(shù)/試驗(yàn)初蝦尾數(shù))×100；增重率(%)=[(終末體重-初始體重)/初始體重]×100；特定生長(zhǎng)率(%/d)=[(ln終末體重-ln初始體重)/試驗(yàn)天數(shù)]×100；飼料系數(shù)=總耗料量/(終末體重+死亡體重-初始體重)。

1.2.2 體組成

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組留下12只羅氏沼蝦，置于-20 ℃的冰箱中保存，用于測(cè)定羅氏沼蝦體組成。將保存的羅氏沼蝦解凍，水分含量采用105 ℃烘箱干燥法(GB/T 6435—2006/ISO 6496:1999)測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用杜馬斯燃燒法(GB/T 6432—1994)測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 6443—2006/ISO 6492:1999)測(cè)定，粗灰分含量采用550 ℃馬弗爐灼燒法(GB/T 6438—2007/ISO 5984:2002)測(cè)定。

1.2.3 免疫指標(biāo)和腸道消化酶活性

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，每組隨機(jī)取3尾蝦，從頭胸甲處取血液，取肝胰腺，從背部抽取蝦腺，血液收集到離心管中，并放置于4 ℃冰箱中靜置24 h，10 000 r/min離心10 min，并吸取上清液，于-80 ℃的冰箱保存，用于血淋巴免疫指標(biāo)的檢測(cè)。取蝦腸道及肝胰腺，于-80 ℃的冰箱保存，用于肝胰腺免疫指標(biāo)和腸道消化酶活性的檢測(cè)。

免疫指標(biāo)測(cè)定：超氧化物歧化酶(SOD)、堿性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)活性和丙二醛(MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相關(guān)試劑盒進(jìn)行測(cè)定，相應(yīng)操作均參照說明書進(jìn)行。

消化酶活性測(cè)定：淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性采用酶標(biāo)儀進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)使用的試劑盒都購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 24.0軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，差異顯著者采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，以P<0.05為差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

2 結(jié) 果

2.1 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，各組之間羅氏沼蝦的增重率、特定生長(zhǎng)率、成活率和飼料系數(shù)均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表3 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦生長(zhǎng)性能的影響 Table 3 Effects of replacement of fish meal by stickwater on growth performance of Macrobrachium rosenbergii

2.2 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦體組成的影響

由表4可知，各組之間羅氏沼蝦的水分、粗蛋白質(zhì)、粗灰分、粗脂肪含量均無(wú)顯著差異(P>0.05)。

表4 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦體組成的影響Table 4 Effects of replacement of fish meal by stickwater on body composition of Macrobrachium rosenbergii %

2.3 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，各組之間羅氏沼蝦的血淋巴SOD、LZM活性和MDA含量以及肝胰腺ACP活性均無(wú)顯著差異(P>0.05)。T40組的肝胰腺AKP活性顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表5 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦免疫指標(biāo)的影響Table 5 Effects of replacement of fish meal by stickwater on immune indexes of Macrobrachium rosenbergii

續(xù)表5項(xiàng)目Items組別GroupsFM(對(duì)照Control)T20T40T60肝胰腺Hepatopancreas堿性磷酸酶AKP/(金氏單位/gprot)196.91±20.48a175.15±26.68ab106.64±8.19b174.33±29.70ab酸性磷酸酶ACP/(U/gprot)10.52±2.1310.01±3.138.86±1.9110.02±1.79

2.4 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦腸道消化酶活性的影響

由表6可知，各組之間羅氏沼蝦的腸道胰蛋白酶活性無(wú)顯著差異(P>0.05)。T60組的腸道淀粉酶活性顯著高于T20組(P<0.05)。T60組的腸道脂肪酶活性顯著低于對(duì)照組和T20組(P<0.05)。

表6 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦腸道消化酶活性的影響Table 6 Effects of fish meal replacement by stickwater on intestinal digestive enzyme activities of Macrobrachium rosenbergii

3 討 論

3.1 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦生長(zhǎng)性能的影響

魚溶漿中含有小分子多肽、生物胺、?；撬帷⑽粗偕L(zhǎng)因子以及游離氨基酸等成分[4-6]。未知促生長(zhǎng)因子、適量的?；撬帷⑿‰暮偷蛣┝可锇酚写偕L(zhǎng)作用[6-8]。研究表明，在飼糧中補(bǔ)充適量的?；撬峥梢源龠M(jìn)軍曹魚(RachycentroncanadumL.)[9]、大菱鲆(Paralichthysolivaceus)[10]和尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)[11]等的生長(zhǎng)性能。王際英等[12]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加小肽可以促進(jìn)星斑川蝶幼魚(Platichthysstellatus)的生長(zhǎng)。Mendoza等[13]研究發(fā)現(xiàn)，適量的生物胺對(duì)羅氏沼蝦的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。而本研究中，魚溶漿替代20%、40%和60%的魚粉對(duì)羅氏沼蝦的增重率、特定生長(zhǎng)率、成活率和飼料系數(shù)沒有顯著影響?？赡苁且?yàn)楸驹囼?yàn)魚溶漿中牛磺酸、小肽、生物胺為適宜水平，不會(huì)對(duì)其生長(zhǎng)性能產(chǎn)生不利影響。魚溶漿添加水平過高或過低都會(huì)造成試驗(yàn)魚生長(zhǎng)性能降低，王曉艷等[6]和周露陽(yáng)[14]的研究均證明了這一點(diǎn)。結(jié)合本試驗(yàn)研究看來(lái)，魚溶漿的適宜添加水平在不同試驗(yàn)動(dòng)物上是不同的；在本試驗(yàn)中，不同水平魚溶漿替代魚粉不會(huì)對(duì)羅氏沼蝦的生長(zhǎng)性能造成影響。羅氏沼蝦成活率較低是由于羅氏沼蝦有強(qiáng)大的占有欲，常常會(huì)自相殘殺，導(dǎo)致成活率不高，其他研究中羅氏沼蝦成活率也在57.50%～81.25%[15]。而對(duì)照組和T40組飼料系數(shù)大于2，可能是由于羅氏沼蝦的好斗性與護(hù)食性，所以在投喂的時(shí)候?yàn)榱怂形r均能采食到飼料，投喂飼料較多，導(dǎo)致飼料系數(shù)過大。

3.2 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦體組成的影響

3.3 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦免疫指標(biāo)的影響

血液生化指標(biāo)因能直接體現(xiàn)機(jī)體內(nèi)物質(zhì)的代謝過程，所以常被用作判斷疾病的主要依據(jù)之一[18]，從魚類的血清生化指標(biāo)可以得知魚類機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況、代謝情況以及健康狀態(tài)。SOD在生物體內(nèi)起到清除氧自由基的作用，對(duì)機(jī)體氧化與抗氧化平衡中起到重要作用，能修復(fù)受損細(xì)胞，并復(fù)原自由基對(duì)機(jī)體造成的損傷[19]，這是免疫反應(yīng)中重要的一環(huán)。本試驗(yàn)中，各組之間羅氏沼蝦的血淋巴SOD活性無(wú)顯著差異，可能是試驗(yàn)飼料富含豐富的游離氨基酸、小肽、?；撬岬刃》肿游镔|(zhì)，有利于合成與免疫相關(guān)的酶[16]；王春利等[7]研究也證明了這一點(diǎn)。本試驗(yàn)中血淋巴SOD活性較高，表明該試驗(yàn)蝦在應(yīng)激條件下調(diào)節(jié)適應(yīng)能力高，能更好地應(yīng)對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境的變化[7]。同樣作為免疫指標(biāo)的LZM是水解革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌細(xì)胞壁的酶[20]，在水產(chǎn)動(dòng)物抵抗病原微生物感染中起著重要作用，其活性大小可反映出魚體抵抗細(xì)菌侵襲的能力[21-22]。本試驗(yàn)中，各組之間羅氏沼蝦的血淋巴LZM活性和成活率都沒有顯著差異，表明魚溶漿對(duì)蝦的抗菌能力沒有不利影響。

MDA是細(xì)胞脂質(zhì)氧化的代謝產(chǎn)物，常被用來(lái)衡量機(jī)體內(nèi)源性損傷的狀態(tài)[6]。它的產(chǎn)生會(huì)加劇細(xì)胞膜的損傷，當(dāng)機(jī)體的氧化自由基無(wú)法清除，過量的氧自由基則會(huì)產(chǎn)生過氧化物，如MDA損害細(xì)胞，進(jìn)而出現(xiàn)氧化應(yīng)激現(xiàn)象。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組羅氏沼蝦的血淋巴MDA含量均有所增高，可能是由于魚溶漿中含有MDA；在曹小華等[23]的研究中，53個(gè)批次的魚溶漿中MDA含量高于魷魚膏和蝦膏，含量在2.50～24.23 mg/kg；且由于魚溶漿高水分、高脂、高不飽和度特性，使其品質(zhì)在脂肪氧化中更易遭受破壞，而MDA作為脂質(zhì)氧化酸敗的終產(chǎn)物，魚溶漿的酸敗程度會(huì)影響其MDA含量。王曉艷等[6]研究表明，添加了魚溶漿的試驗(yàn)組中的體內(nèi)MDA含量都不同程度地高于對(duì)照組，但具體是否與魚溶漿中含有MDA導(dǎo)致體內(nèi)MDA含量增高，還需進(jìn)一步研究。

AKP與ACP是衡量機(jī)體健康狀況和免疫機(jī)能的重要指標(biāo)[24]。AKP是一種重要的免疫因子，與脂質(zhì)代謝、鈣質(zhì)吸收等有關(guān)，在保證機(jī)體健康中扮演重要的角色[25]。ACP是溶酶體的標(biāo)志酶，與免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞消化代謝等生命活動(dòng)有關(guān)[26]，孫建梅等[27]對(duì)文昌魚(Branchiostomabelcheri)的研究也證明了這一點(diǎn)，所以AKP與ACP也可反映出機(jī)體的免疫情況。本試驗(yàn)中，各組之間羅氏沼蝦的肝胰腺ACP活性沒有顯著差異，T40組的肝胰腺AKP活性顯著低于對(duì)照組，可能是羅氏沼蝦的免疫機(jī)能受損。王婧瑤等[28]研究發(fā)現(xiàn)，豆粕替代魚粉會(huì)使黃金鯽(Carassiusauratus)的腎臟、甲狀腺等受損，從而引起機(jī)體免疫機(jī)能下降，免疫相關(guān)酶活性下降，在齊口裂腹魚幼魚(Schizothoraxprenanti)[29]、牛蛙(Rana(Lithobatescatesbeiana)[30]、點(diǎn)帶石斑魚(Epinepheluscoioiaes)[31]的研究中也證明了這一點(diǎn)。但本試驗(yàn)中，魚溶漿替代60%魚粉組肝胰腺AKP活性又有上升趨勢(shì)，這與AKP在珍珠龍膽石斑魚[6]、凡納濱對(duì)蝦[7]、建鯉(Cyprinuscarpiovar.jian)[32]等的變化趨勢(shì)不同，其具體原因有待進(jìn)一步研究。

3.4 魚溶漿替代魚粉對(duì)羅氏沼蝦腸道消化酶活性的影響

魚溶漿的添加能一定程度上增加腸道絨毛表面積，提高消化酶活性，增強(qiáng)消化和吸收能力，從而促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)[8，14]。在本試驗(yàn)中，腸道淀粉酶活性呈先下降再升高的趨勢(shì)，且T60組腸道淀粉酶活性顯著高于T20組，可能是由于T60組牛磺酸含量高于T20組。凌云[33]研究表明，由于淀粉酶活性在酸性條件下較高，而牛磺酸可提高飼料酸度，從而增強(qiáng)淀粉酶活性，高春生等[34]研究也證明了這一點(diǎn)。而T60組與對(duì)照組相比腸道脂肪酶活性顯著降低，可能是T60組中的?；撬岷繉?duì)其造成的影響，已有研究表明，牛磺酸會(huì)對(duì)腸道消化酶活性產(chǎn)生影響[35]。何明等[36]研究表明，隨著?；撬岬奶砑铀皆黾?，腸道脂肪酶活性會(huì)降低，在李昭林[37]對(duì)黃鱔(Monopterusalbus)的研究中也證明了這一點(diǎn)。本試驗(yàn)中，魚溶漿替代20%、40%和60%的魚粉對(duì)羅氏沼蝦的腸道胰蛋白酶活性沒有顯著影響，飼糧中用魚溶漿替代60%魚粉時(shí)會(huì)降低腸道脂肪酶活性，使羅氏沼蝦的消化能力受影響。

4 結(jié) 論

① 飼料中用20%～60%的魚溶漿替代魚粉不影響羅氏沼蝦的生長(zhǎng)性能和體組成。

② 飼料中用60%的魚溶漿替代魚粉會(huì)降低腸道脂肪酶活性，影響羅氏沼蝦的消化能力。