亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        PKCα對脂多糖誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠急性肺損傷中細(xì)胞自噬及焦亡的調(diào)節(jié)作用*

        2021-12-06 05:16:52林鵬程蘇珊珊周騰飛施強強李玉蘋
        中國病理生理雜志 2021年11期
        關(guān)鍵詞:小鼠水平

        陳 楊, 林鵬程, 蘇珊珊, 周騰飛, 施強強, 董 年, 董 莉, 李玉蘋

        (溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科,浙江溫州325000)

        急性肺損傷是臨床上常見的危及生命的呼吸系統(tǒng)疾病,發(fā)病率和死亡率均很高,其特點表現(xiàn)為頑固性低氧、氣體交換受損、過度炎癥反應(yīng)和急性呼吸衰竭[1]。雖然現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)、新型抗菌藥物和器官功能支持技術(shù)等被廣泛應(yīng)用,但因其發(fā)病機制復(fù)雜,治療效果尚不理想。蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)是蛋白激酶家族中的經(jīng)典成員,其激活將觸發(fā)下游不同信號級聯(lián)反應(yīng),調(diào)節(jié)各種細(xì)胞功能,如增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)化等,在肺內(nèi)炎癥和肺部腫瘤等疾病中發(fā)揮關(guān)鍵作用[2-3]。近年來,研究顯示PKCα參與急性肺損傷的發(fā)生發(fā)展,例如,短暫性腦缺血/再灌注誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷的發(fā)病與肺組織中PKCα mRNA 和蛋白表達(dá)顯著增加相關(guān)[4]。我們在前期預(yù)實驗中也觀察到脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠和RAW264.7 細(xì)胞中PKCα的磷酸化水平均顯著上調(diào)?;诖?,我們猜測PKCα 是急性肺損傷潛在的治療靶點。此外,PKCα參與調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬及細(xì)胞焦亡過程,例如,在人胚胎腎細(xì)胞相關(guān)研究中,葡萄糖剝奪可誘導(dǎo)自噬水平上調(diào),但抑制PKCα 表達(dá)后,葡萄糖剝奪未能誘導(dǎo)自噬水平上調(diào)[5]。空氣中懸浮顆粒物通過激活PKCα 促進口腔膠質(zhì)細(xì)胞核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎癥小體形成、活化,從而促進炎癥反應(yīng)發(fā)生[6]。但 PKCα 對 LPS 觸發(fā)的急性肺損傷中細(xì)胞自噬及焦亡的調(diào)節(jié)作用尚未可知。因此,本實驗以LPS 構(gòu)建急性肺損傷體內(nèi)外模型,通過PKCα 特異性抑制劑 calphostin C 抑制 PKCα 后檢測細(xì)胞自噬及焦亡水平,探討PKCα在急性肺損傷中的調(diào)節(jié)機制。

        材料和方法

        1 材料

        SPF 級雄性 C57BL/6J 小鼠(6~8 周齡,20~25 g)購自北京維通利華實驗動物技術(shù)公司,許可證號為SXCK(京)2016-0011,飼養(yǎng)于溫州醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心SPF 級實驗動物房。小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7 購自上海中科院細(xì)胞庫。LPS(O55:B5;L2880)和 calphostin C(C6303)購自 Sigma;PKCα(phospho S657)抗體[EPR1901(2)](ab180848)購自Abcam;NLRP3 抗 體(D4D8T)、cleaved caspase-1(Asp296)抗體(E2G2I)、caspase-1 抗體(E2Z1C)、含caspase 募集結(jié)構(gòu)域的凋亡相關(guān)斑點樣蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domian,ASC)/TMS1抗體(D2W8U)、微管相關(guān)蛋白1 輕鏈3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3B,LC3B)抗體、SQSTM1/p62 抗體、β-actin 抗體(13E5)和 GAPDH 抗體(D16H11)XP?購自CST;BCA 蛋白濃度測定試劑盒購自Thermo;ELISA試劑盒及RT-qPCR引物購自上海博蘊生物科技有限公司。

        2 方法

        2.1 小鼠模型 將45 只C57BL/6J 小鼠隨機分為空白(control)組、DMSO 組、DMSO+calphostin C 組、LPS組和LPS+DMSO+calphostin C 組,每組9 只。將calphostin C 溶于DMSO(1 g/L),用PBS 稀釋至0.015 g/L,按0.15 mg/kg 的劑量腹腔注射預(yù)處理4 h。4%水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉后以靜脈留置針經(jīng)口氣管插管,接1 mL 針筒后以水柱隨呼吸上下浮動作為插管成功標(biāo)志。將LPS 以10 mg/kg 的劑量經(jīng)氣道滴入(將LPS 溶解于PBS 中,濃度10 g/L,其余組予等體積的PBS 氣道滴入)刺激24 h 后,安樂死小鼠,獲取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)及肺組織標(biāo)本。

        2.2 細(xì)胞模型 將RAW264.7 細(xì)胞分組如下:control 組、DMSO 組、DMSO+calphostin C 組、LPS 組和LPS+DMSO+calphostin C 組。取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞,經(jīng)細(xì)胞計數(shù)器計數(shù),6 孔板按照每孔8×105密度鋪板,12 孔板按每孔4×105密度鋪板,使用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h。次日倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),長至80%~90%左右時,用calphostin C(100 nmol/L)預(yù)處理細(xì)胞2 h后予LPS(1 mg/L)刺激6 h及24 h,6 h后提取蛋白及RNA 檢測細(xì)胞焦亡水平,24 h 后提取蛋白檢測細(xì)胞自噬水平。

        2.3 BALF 蛋白濃度及炎癥因子測定 BALF 樣本經(jīng)4 ℃、111.8×g離心后獲取上清液。采用BCA 法測定蛋白濃度。采用鼠相應(yīng)ELISA 試劑盒測定炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)濃度。

        2.4 HE染色 經(jīng)留置針向全肺注入0.4 mL多聚甲醛,用細(xì)線結(jié)扎后將完整肺組織浸泡于多聚甲醛中固定,隨后石蠟包埋切片,脫蠟、水化處理,再經(jīng)蘇木素及伊紅染液染色后脫水封片,在顯微鏡下觀察并進行肺損傷病理分級評分(0~4 分制):無損傷=0;損傷25%=1;損傷50%=2;損傷75%=3;彌漫性損傷=4。

        2.5 免疫組化染色 取小鼠石蠟切片,脫蠟、水化、阻斷、抗原修復(fù)、封閉,5% BSA 室溫放置30 min,滴加適量LC3B、p62 和NLRP3 抗體(1∶100)4 ℃孵育過夜。PBS 清洗3 次后,Ⅱ抗37℃孵育60 min。PBS 清洗后,滴加適量DAB 顯色液5~10 min,自來水沖洗5 min。中性樹脂封片后顯微鏡下觀察肺組織中相應(yīng)蛋白的表達(dá)。

        2.6 Western blot 取上述不同實驗干預(yù)后的小鼠肺組織及RAW264.7細(xì)胞,用細(xì)胞裂解液裂解,4 ℃、20 913×g離心 10 min 提取上清液,使用 BCA 測定蛋白濃度。各組分別取30 μg 蛋白進行SDS-PAGE,濕轉(zhuǎn)至PVDF 膜,快速封閉液室溫下封閉10 min,相應(yīng)Ⅰ抗(1∶1 000)4℃孵育過夜,TBST 緩沖液洗膜 10 min×3 次,Ⅱ抗(1∶5 000)室溫孵育1 h,再用TBST 緩沖液洗膜10 min×3次,化學(xué)發(fā)光法顯影條帶。

        2.7 RT-qPCR 按照Trizol 說明書提取上述不同實驗干預(yù)后的RAW264.7 細(xì)胞總RNA,分光光度法測定RNA 質(zhì)量和濃度。取總RNA 2 μg 反轉(zhuǎn)錄為cDNA,再以適量cDNA 為模板進行real-time PCR。反應(yīng)條件為:95 ℃ 30 s;95 ℃ 5 s,60 ℃ 30 s,共 40 個循環(huán)。以 GAPDH 為內(nèi)參照,數(shù)據(jù)以 2-ΔΔCt計算。引物(鼠源)序列如下:GAPDH 的上游引物序列為5′-CACGGCAAATTCAACGGCACAG-3′,下游引物序列為 5′-AGACACCAGTAGACTCCACGACATAC-3′;IL-1β的上游引物序列為5′-CACTACAGGCTCCGAGATGAACAAC-3′,下游引物序列為5′-TGTCGTTGCTTGGTTCTCCTTGTAC-3′;IL-18 的上游引物序列為 5′-AAGAAAGCCGCCTCAAACCTTCC-3′,下游引物序列為 5′-TTGACGCAAGAGTCTTCTGACATGG-3′;NLRP3的上游引物序列為5′-GGAGGAAGAAGAAGAGAGGAGAGGAG-3′,下 游 引 物 序 列 為 5′-CTTGAGAAGAGACCACGGCAGAAG-3′;ASC 的上游引物序列為 5′-GGACGGAGTGCTGGATGCTTTG-3′,下游引物序列為 5′-CATCTTGTCTTGGCTGGTGGTCTC-3′;caspase-1 的上游引物序列為 5′-TGAATACAACCACTCGTACACGTCTTG-3′,下 游 引 物 序 列 為 5′-CCAGATCCTCCAGCAGCAACTTC-3′。

        3 統(tǒng)計學(xué)處理

        采用GraphPad Prism 8.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多組間比較采用單因素方差分析,兩兩組間比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        結(jié) 果

        1 抑制PKCα可減輕LPS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠急性肺損傷,減少BALF中炎癥因子分泌

        肺組織HE 染色及病理分級評分顯示,LPS 組可見顯著的肺泡及間質(zhì)水腫、肺泡塌陷、炎癥細(xì)胞浸潤等(P<0.01),而抑制PKCα 后肺組織病理學(xué)改變明顯好轉(zhuǎn),肺損傷評分顯著降低(P<0.01),見圖1A、B。此外,抑制PKCα可顯著降低BALF中蛋白濃度及IL-1β和TNF-α的分泌(P<0.01),見圖1C~E。

        2 抑制PKCα可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠肺組織自噬水平

        Western blot 及免疫組化結(jié)果顯示,LPS 能顯著誘導(dǎo)小鼠肺損傷中自噬相關(guān)蛋白LC3B 及p62 表達(dá)水平上調(diào)(P<0.01),而 calphostin C 預(yù)處理抑制PKCα 后能部分逆轉(zhuǎn)上升的 LC3B 及 p62 水平(P<0.01),見圖2。

        3 抑制PKCα可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠肺組織焦亡水平

        肺組織免疫組化結(jié)果顯示,與control 組相比,NLRP3 陽性染色程度在LPS 組更顯著(P<0.01),而LPS+DMSO+calphostin C 組較 LPS 組顯著下降(P<0.01),見圖3。

        4 抑制PKCα 可降低LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞自噬及焦亡水平

        如圖4A 所示,與體內(nèi)Western blot 結(jié)果一致,PKCα 抑制劑能部分逆轉(zhuǎn)LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞自噬水平相關(guān)蛋白LC3B 及p62 的上調(diào)(P<0.05)。如圖4B 所示,LPS 組 NLRP3、C-caspase-1 和 ASC 蛋白水平較空白組顯著上調(diào),而calphostin C 能抑制LPS 觸發(fā)的細(xì)胞焦亡(P<0.01)。同樣,RT-qPCR 結(jié)果也顯示抑制PKCα 能降低LPS 誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞NLRP3 炎癥小體相關(guān)mRNA水平(P<0.05),見圖4C。

        討 論

        Figure 1. Inhibition of PKCα attenuated LPS-triggered acute lung injury and secretion of inflammatory mediators in the BALF from C57BL/6J mice. A:histopathological analysis of lung tissues by HE staining(scale bar=100 μm);B:severity of lung injury evaluated by semi-quantitative histological scoring;C:BALF protein levels evaluated by BCA method;D:the level of IL-1β in BALF examined by ELISA;E:the level of TNF-α in BALF examined by ELISA. Mean±SD. n=3;#P<0.05,##P<0.01 vs control group;*P<0.05,**P<0.01 vs LPS group.圖1 抑制PKCα可減輕LPS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠急性肺損傷并減少BALF中炎癥因子分泌

        急性肺損傷的主要病理生理機制為過度炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的氣血屏障功能破壞,繼而引發(fā)肺水腫及氣體交換障礙,其致病因素包括嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、中毒和休克等。LPS是革蘭陰性細(xì)菌細(xì)胞壁主要成分,可激活機體固有免疫系統(tǒng),引起炎癥瀑布效應(yīng),導(dǎo)致全身炎癥反應(yīng)失控,是急性肺損傷常見誘發(fā)因素之一。由于LPS 攻擊模型方法簡單,且與臨床發(fā)病過程類似,故LPS 常用于構(gòu)建急性肺損傷動物或細(xì)胞模型[7]。已知PKCα 是經(jīng)典型激酶成員之一,可被炎癥因子、激素及神經(jīng)遞質(zhì)等激活,在肺損傷過程中細(xì)胞增殖、分化和凋亡等多種病理生理過程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。結(jié)合目前文獻(xiàn)報道細(xì)胞自噬及焦亡也參與急性肺損傷中的病理生理過程,本文擬深入研究PKCα 能否調(diào)節(jié)LPS 觸發(fā)的小鼠急性肺損傷中細(xì)胞自噬及焦亡過程。本實驗以10 mg/kg 的LPS 氣管內(nèi)滴注刺激C57BL/6J小鼠24 h成功構(gòu)建急性肺損傷模型,并以PKCα 特異性抑制劑calphostin C 在體內(nèi)外抑制PKCα 活化后檢測細(xì)胞自噬及焦亡水平。為評估肺屏障功能及肺內(nèi)炎癥,實驗檢測了BALF中蛋白濃度及炎癥介質(zhì)IL-1β和TNFα水平。與空白對照組相比,LPS氣管內(nèi)滴入可明顯破壞小鼠肺內(nèi)皮屏障功能造成肺泡內(nèi)蛋白質(zhì)滲漏,同時誘導(dǎo)過度炎癥反應(yīng)發(fā)生,而抑制PKCα 后肺損傷病理學(xué)改變顯著改善,肺內(nèi)炎癥反應(yīng)減輕。本實驗證實抑制PKCα 在小鼠急性肺損傷中發(fā)揮了抗炎保護效應(yīng)。

        針對PKCα 對LPS 誘導(dǎo)的小鼠肺損傷中細(xì)胞自噬過程的調(diào)節(jié),我們體內(nèi)外實驗結(jié)果顯示LPS 刺激下自噬相關(guān)蛋白表達(dá)水平升高,而抑制PKCα后可逆轉(zhuǎn)LPS 誘導(dǎo)的自噬流變化。已知自噬是細(xì)胞吞噬各種病原體以及胞內(nèi)變性蛋白質(zhì)、受損細(xì)胞器,經(jīng)由溶酶體被降解的分解代謝過程。這個過程主要包括吞噬細(xì)胞膜誘導(dǎo)、吞噬泡形成、自噬體延伸及成熟、吞噬-溶酶體復(fù)合體融合、吞噬物降解[8]。自噬相關(guān)蛋白LC3B-I 向LC3B-II 的轉(zhuǎn)化水平可作為判斷自噬體形成的標(biāo)志物,與自噬活性密切相關(guān)。p62是一種重要的自噬接頭蛋白,可與LC3B-II 結(jié)合,將泛素化的蛋白聚集體或者其它細(xì)胞組分募集到自噬小體中,然后在自噬溶酶體內(nèi)一起被降解[9]。在正常生理條件下,自噬發(fā)生可以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。在應(yīng)激或損傷情況下(如營養(yǎng)剝奪、饑餓和創(chuàng)傷),自噬主要作為細(xì)胞生存的適應(yīng)防御機制而存在。但某些情況下,自噬水平低下或過度或者紊亂均可引發(fā)細(xì)胞死亡和組織損傷等[10]。在本研究中,自噬水平在LPS誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷中顯著上調(diào),但其作為適應(yīng)性反應(yīng)或是致病機制加重?fù)p傷尚未明確。因此,對LPS誘導(dǎo)的自噬水平進行干預(yù),深入研究自噬穩(wěn)態(tài)在急性肺損傷發(fā)生發(fā)展中的作用具有重要意義。另外,關(guān)于PKCα 信號通路調(diào)節(jié)自噬的相關(guān)報道也是相互矛盾。粉防己堿是一種新型PKCα抑制劑,通過抑制PKCα 活性誘導(dǎo)自噬發(fā)生[11]。而我們的研究顯示LPS 誘導(dǎo)小鼠肺組織及RAW264.7 細(xì)胞中LC3B-II/I水平較對照組顯著增加,抑制PKCα后能在體內(nèi)外部分逆轉(zhuǎn)這些自噬流變化,與Choi 等[5]報道的藥物抑制 PKCα 以及 siRNA 轉(zhuǎn)染 PKCα 可以有效地阻止葡萄糖剝奪誘導(dǎo)的LC3B-II 水平的增加結(jié)果相似。此外,本實驗結(jié)果還顯示LPS 誘導(dǎo)下p62 蛋白水平升高,與先前多項研究觀點一致[12-13],我們認(rèn)為p62 上調(diào)可能是自噬流紊亂過程,即自噬體雖然形成,但自噬降解過程受阻導(dǎo)致自噬體積累。積聚的自噬體被擠出胞外引起促炎反應(yīng)從而加重機體炎性損傷。我們的研究結(jié)果表明在LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中自噬流發(fā)生紊亂,而PKCα 參與了該自噬流的調(diào)控過程。

        Figure 2. Inhibition of PKCα reversed LPS-induced autophagy in lung tissue of C57BL/6J mice. A:Western blot was used to observe the protein levels of p-PKCα,LC3B and p62;B:immunohistochemical analysis of the expression of LC3B and p62(scale bar=100 μm). Mean±SD. n=3 to 6.#P<0.05,##P<0.01 vs control group;*P<0.05,**P<0.01 vs LPS group.圖2 抑制PKCα可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠肺組織自噬水平

        Figure 3. Inhibition of PKCα reversed LPS-triggered pyroptosis in lung tissue of C57BL/6J mice(immunohistochemical staining for NLRP3,scale bar=100 μm). Mean±SD. n=3.#P<0.05,##P<0.01 vs control group;*P<0.05,**P<0.01 vs LPS group.圖3 抑制PKCα可逆轉(zhuǎn)LPS誘導(dǎo)的C57BL/6J小鼠肺組織焦亡水平

        目前多項研究提示細(xì)胞焦亡是促進急性肺損傷中過度炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展的重要因素之一,干預(yù)細(xì)胞焦亡可顯著改善肺內(nèi)過度炎癥反應(yīng)。鑒于細(xì)胞焦亡主要發(fā)生于巨噬細(xì)胞,而巨噬細(xì)胞在急性肺損傷發(fā)病的過度炎癥反應(yīng)中也發(fā)揮了重要作用,我們采用了LPS 刺激RAW264.7 巨噬細(xì)胞建立體外模型進行驗證。NLRP3炎癥小體是促進巨噬細(xì)胞焦亡啟動的關(guān)鍵環(huán)節(jié),是由 NLRP3、pro-caspase-1 和 ASC 組裝成的復(fù)合體。該復(fù)合體在識別病原體相關(guān)分子或危險相關(guān)分子后激活caspase-1,從而導(dǎo)致細(xì)胞膜小孔形成,最終細(xì)胞腫脹破裂并釋放IL-1β 和IL-18 等炎癥介質(zhì)參與炎癥反應(yīng)[14-15]。例如,在光氣誘導(dǎo)急性肺損傷小鼠模型中NLRP3 炎癥小體形成及活化,通過抑制 NLRP3 或 caspase-1 表達(dá),下調(diào)了 IL-1β 等炎癥因子釋放水平,有效改善了肺損傷[16]。另外,LPS 誘導(dǎo)的急性肺損傷中,干擾素基因刺激蛋白活化NLRP3 炎癥體而觸發(fā)細(xì)胞焦亡是IL-1β 及IL-18 等炎癥因子過度釋放的重要病因[17]。與上述結(jié)果相似,本研究也證實在LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中NLRP3炎癥小體明顯活化,細(xì)胞焦亡在急性肺損傷過度炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要誘導(dǎo)作用。此外,既往研究已表明PKCα 與NLRP3 炎癥小體形成活化關(guān)系密切。在結(jié)核分枝桿菌感染的巨噬細(xì)胞,磷酸化的PKCα 是介導(dǎo)NLRP3 炎癥小體形成的必要因子,抑制PKCα 表達(dá)明顯抑制了NLRP3 形成及巨噬細(xì)胞相關(guān)炎癥反應(yīng)[18]?;诖?,我們對PKCα 在LPS觸發(fā)的小鼠肺損傷中細(xì)胞焦亡的調(diào)節(jié)機制做了初步探索。在體內(nèi)外實驗?zāi)P椭?,我們觀察到calphostin C 抑制PKCα 表達(dá)后可顯著逆轉(zhuǎn)LPS 誘導(dǎo)的細(xì)胞焦亡水平。結(jié)合以上結(jié)果,我們率先闡明在LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷中,抑制PKCα后的抗炎保護效應(yīng)與其抑制細(xì)胞焦亡過程存在密切聯(lián)系。PKCα-NLRP3 炎癥小體通路參與了LPS 誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷的病理生理過程。

        本研究仍存在一些不足之處:首先,在體外研究中,我們只采用了單一的小鼠RAW264.7 巨噬細(xì)胞進行驗證,未來我們將分離原代巨噬細(xì)胞、原代肺泡上皮及內(nèi)皮細(xì)胞等,以更全面嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕嵌壬钊胙芯?;其次,我們發(fā)現(xiàn)了PKCα 抑制分別對LPS誘導(dǎo)的自噬及焦亡水平所產(chǎn)生的影響,但尚未對自噬及焦亡靶點進行干預(yù),對兩種之間的聯(lián)系,以及PKCα 在其中的調(diào)節(jié)尚未深入探索。既往文獻(xiàn)表明自噬及焦亡之間確實存在著相關(guān)性。例如,在創(chuàng)傷性腦損傷中,自噬激活能下調(diào)IL13/IL-13Rα1 的表達(dá),抑制JAK-1/STAT-1信號通路,從而抑制細(xì)胞焦亡,發(fā)揮神經(jīng)保護作用[19]。在動脈粥樣硬化的體外巨噬細(xì)胞模型中,電刺激激活的自噬能抑制ROS 的產(chǎn)生,從而減少NLRP3活化抑制細(xì)胞焦亡所介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[20]。因此,PKCα-自噬/焦亡軸在急性肺損傷中的潛在調(diào)節(jié)機制是一個值得探索的新方向。

        Figure 4. Inhibition of PKCα reversed LPS-induced autophagy and pyroptosis in macrophages. A:the protein levels of p-PKCα,p62 and LC3B measured by Western blot;B:the protein levels of p-PKCα,NLRP3,cleaved caspase-1(C-caspase-1),caspase-1 and ASC measured by Western blot;C:the mRNA levels of IL-1β,IL-18,NLRP3,caspase-1 and ASC evaluated by RT-qPCR. Mean±SD. n=3 to 6.#P<0.05,##P<0.01 vs control group;*P<0.05,**P<0.01 vs LPS group.圖4 抑制PKCα可降低LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞自噬及焦亡水平

        綜上所述,本研究在體內(nèi)外證實抑制PKCα能降低LPS 觸發(fā)的細(xì)胞自噬及焦亡水平,從而減輕C57BL/6J小鼠肺內(nèi)過度炎癥反應(yīng),對PKCα在LPS誘導(dǎo)小鼠急性肺損傷中的調(diào)節(jié)機制做了初步探索。

        猜你喜歡
        小鼠水平
        張水平作品
        小鼠大腦中的“冬眠開關(guān)”
        作家葛水平
        火花(2019年12期)2019-12-26 01:00:28
        加強上下聯(lián)動 提升人大履職水平
        米小鼠和它的伙伴們
        老虎獻(xiàn)臀
        Avp-iCre轉(zhuǎn)基因小鼠的鑒定
        加味四逆湯對Con A肝損傷小鼠細(xì)胞凋亡的保護作用
        營救小鼠(5)
        營救小鼠(大結(jié)局)
        亚洲天堂av高清在线| 人妻少妇喷水意淫诱惑| 久久久调教亚洲| 精品国产乱来一区二区三区| 日韩一区中文字幕在线| 毛片在线视频成人亚洲| 亚洲精品一品二品av| 日产分东风日产还有什么日产| 天天躁日日躁狠狠躁欧美老妇小说 | 亚洲免费福利视频网站| 夜夜高潮夜夜爽免费观看| 久久精品免费中文字幕| 初尝人妻少妇中文字幕| 性欧美videofree高清精品| 欧美v亚洲v日韩v最新在线| 99在线播放视频| 国产老妇伦国产熟女老妇高清| 女同另类激情在线三区| 精品久久精品久久精品| www夜片内射视频在观看视频| 丰满多毛的大隂户毛茸茸| 三级在线看中文字幕完整版| 亚洲av鲁丝一区二区三区| 高清国产一级毛片国语| 国产一级片内射在线视频| 免费国产不卡在线观看| 亚洲综合av大全色婷婷| 日韩日韩日韩日韩日韩| 欧美肥胖老妇做爰videos| 熟女俱乐部五十路二区av| 国产免费一区二区av| 免费av日韩一区二区| 欧美黑人又大又粗xxxxx| 极品粉嫩小泬无遮挡20p| 国产普通话对白视频二区| 妺妺窝人体色www聚色窝| 久久婷婷夜色精品国产| 久久精品国产亚洲av久按摩| 99无码精品二区在线视频 | 免费a级作爱片免费观看美国| 牛鞭伸入女人下身的真视频|