侯慧文

（天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心 300192）

隨著物質(zhì)生活水平的提高，消費(fèi)者對(duì)畜牧產(chǎn)品的需求量日益增加，推動(dòng)了飼料工業(yè)向著規(guī)模化和現(xiàn)代化方向發(fā)展，我國(guó)飼料工業(yè)產(chǎn)量位居世界前列。但動(dòng)物源性食品安全問(wèn)題頻繁爆出，嚴(yán)重威脅老百姓的生命健康，其中飼料安全是造成動(dòng)物源性食品安全問(wèn)題的因素之一。飼料品質(zhì)不僅會(huì)影響采食畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育和健康水平，也會(huì)間接影響畜禽食用者的生命安全，快速檢測(cè)技術(shù)不僅能在最短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出飼料產(chǎn)品中是否有違禁添加劑、病原微生物或重金屬等物質(zhì)的污染，其對(duì)檢測(cè)人員的專(zhuān)業(yè)技術(shù)食品和環(huán)境沒(méi)有較高的難度，因此，是適合我國(guó)飼料工業(yè)發(fā)展的安全檢測(cè)技術(shù)。

1 快速檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

1.1 縮短檢測(cè)時(shí)間

飼料快速檢測(cè)技術(shù)可以有效縮短樣品前處理、試劑配置、試驗(yàn)操作和數(shù)據(jù)分析等環(huán)節(jié)的時(shí)間。僅通過(guò)幾分鐘到幾小時(shí)就能從樣品制備到樣品檢測(cè)結(jié)果解讀，是用時(shí)最短的飼料安全檢查技術(shù)。和傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，飼料中的微生物快速檢測(cè)時(shí)長(zhǎng)縮短1/3～1/2，理化試驗(yàn)縮短至2h，酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)僅通過(guò)3～4h 即可完成檢測(cè)。

1.2 儀器設(shè)備要求簡(jiǎn)單

飼料快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)檢測(cè)設(shè)備和儀器的要求不高，許多樣品前處理都屬于粗篩，不需要復(fù)雜的儀器和設(shè)備，隨著便攜式核酸提取儀和熒光定量?jī)x器的應(yīng)用可直接進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。

1.3 人員技能要求不高

飼料快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)試驗(yàn)操作人員的專(zhuān)業(yè)技能要求不高，由于快速檢測(cè)試驗(yàn)環(huán)節(jié)少，操作簡(jiǎn)單，工作人員只需參照試驗(yàn)說(shuō)明完成操作即可，相對(duì)復(fù)雜的檢測(cè)技術(shù)通過(guò)短期的培訓(xùn)也可以熟練掌握，且其試驗(yàn)結(jié)果的可讀性比較高，不需要通過(guò)復(fù)雜的軟件計(jì)算或辨別，因此，不同專(zhuān)業(yè)水平的人員也可以進(jìn)行飼料快速檢測(cè)操作。

1.4 檢測(cè)環(huán)境要求低

飼料快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的級(jí)別要求不高，稍微復(fù)雜的技術(shù)可能需要低溫或無(wú)菌環(huán)境，大多數(shù)試驗(yàn)可以在室內(nèi)或露天完成，因此，飼料快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)檢測(cè)環(huán)境要求較低。

2 飼料行業(yè)的快速檢測(cè)方法

2.1 快速檢測(cè)試紙法

快速檢驗(yàn)紙片法主要用于大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門(mén)氏菌、霉菌等飼料微生物的檢測(cè)?？焖贆z驗(yàn)紙片法利用細(xì)菌繁殖過(guò)程中分泌的酶或代謝產(chǎn)物，恒溫培養(yǎng)18～24h 即可判定飼料微生物種類(lèi)，快速檢驗(yàn)紙片法的檢測(cè)結(jié)果和傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)結(jié)果具有較強(qiáng)的相關(guān)性。富國(guó)文等（2017）利用微生物快速檢測(cè)試紙條檢測(cè)飼料主要原料中的沙門(mén)氏菌和霉菌，并和微生物標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法（《GB 13078-2001 飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》）進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，微生物快速檢測(cè)試紙條的檢測(cè)結(jié)果和檢測(cè)方法結(jié)果差異不顯著，標(biāo)準(zhǔn)方法耗時(shí)2～5d，而微生物快速檢測(cè)試紙條不到1d 就可判定結(jié)果[1]，同時(shí)快速檢測(cè)試紙條還具有檢測(cè)準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)單、價(jià)格便宜等優(yōu)點(diǎn)，因此，適合飼料中微生物的快速檢測(cè)。

2.2 免疫學(xué)技術(shù)

免疫學(xué)技術(shù)主要檢測(cè)飼料中的生物毒素和各類(lèi)藥物殘留，具有選擇性強(qiáng)、檢測(cè)速度快、特異性強(qiáng)和靈敏度高的特點(diǎn)。免疫學(xué)技術(shù)有免疫沉淀法（IP）、化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）、放射免疫分析（RIA）和酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）等，其中ELISA技術(shù)是應(yīng)用最廣的免疫學(xué)技術(shù)，即在抗原（或抗體）固相化和抗原（或抗體）的酶標(biāo)記的基礎(chǔ)上，加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化呈有色產(chǎn)物，由于待檢測(cè)物質(zhì)的量和該有色產(chǎn)物的量有相關(guān)性，因此，不僅可以對(duì)檢測(cè)物質(zhì)進(jìn)行定性判斷，還可根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)回歸方程進(jìn)行定量分析。ELISA 分析方法包括夾心法、間接法和競(jìng)爭(zhēng)法，夾心法主要用于檢測(cè)大分子抗原，間接法主要檢測(cè)抗體，競(jìng)爭(zhēng)法主要用于檢測(cè)小分子抗原。李泳寧等（2020）通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫技術(shù)對(duì)飼料中的呋喃西林進(jìn)行快速檢測(cè)，飼料樣品中的呋喃西林平均回收率為87.5%～96.0%，該方法通過(guò)人工合成的抗原和飼料中的呋喃西林進(jìn)行特異性結(jié)合，有望進(jìn)行飼料呋喃西林等呋喃類(lèi)藥物的大量篩查[2]。

2.3 熒光檢測(cè)卡法

熒光檢測(cè)卡法主要用于飼料中的重金屬、生物毒素、抗生素及其他藥物殘留等物質(zhì)的檢測(cè)，即將酶標(biāo)記于抗原（或抗體）上，待檢測(cè)物沿著毛細(xì)管膜表面運(yùn)送到檢測(cè)區(qū)和標(biāo)記物結(jié)合，肉眼或儀器可識(shí)別顯色結(jié)果。膠體金試紙就是應(yīng)用最廣的一種可便攜式的熒光檢測(cè)卡，主要由底板、樣品墊、吸水紙、硝酸纖維素膜、膠體金墊、檢測(cè)線（T）和控制線（C）構(gòu)成，若C 和T 均顯色為陰性，若C 顯色而T 未顯色為陽(yáng)性，若C 未顯色T 可顯色或未顯色則為無(wú)效。何方洋等（2019）對(duì)谷物中的玉米赤霉烯酮?dú)埩暨M(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膠體金試紙方法對(duì)玉米赤霉烯酮的檢測(cè)限為100ug/kg，檢測(cè)時(shí)間僅需10min，其靈敏度、特異性分別為99%和94%，是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)單方便，且可以進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)飼料檢測(cè)的方法[3]。

2.4 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)（PCR）是基于分子生物學(xué)技術(shù)，將DNA 進(jìn)行解鏈、退火和延伸，最終放大目的DNA 片段，具有簡(jiǎn)單快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，適合于微量樣本或純度低的樣本。阮靖華等（2020）通過(guò)熒光定量PCR 技術(shù)對(duì)進(jìn)境動(dòng)物源性飼料中沙門(mén)氏菌進(jìn)行檢測(cè)，該方法對(duì)基因組DNA 的檢測(cè)靈敏度為17copies/L，熒光定量PCR 方法的檢出率不僅和國(guó)標(biāo)法一致，且檢測(cè)率高達(dá)100%，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，熒光定量PCR是一種檢測(cè)限低、定量準(zhǔn)確、重復(fù)性強(qiáng)、耗時(shí)短的飼料快速檢測(cè)方法，可以有效提高進(jìn)境動(dòng)物源性飼料中沙門(mén)菌檢測(cè)的工作效率和口岸通關(guān)速度[4]。劉彥泓和劉岑杰（2019）利用熒光定量PCR 技術(shù)對(duì)飼料及飼料原料中轉(zhuǎn)基因大豆GTS40-3-2 成分進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該方法不僅操作簡(jiǎn)單，還可以滿足飼料中轉(zhuǎn)基因成分的監(jiān)管需求[5]。

2.5 生物傳感器技術(shù)

生物傳感器技術(shù)是一種對(duì)生物物質(zhì)敏感并將其濃度轉(zhuǎn)換為電信號(hào)進(jìn)行檢測(cè)的儀器。根據(jù)敏感元件不同可以劃分為酶生物傳感器、微生物傳感器和免疫傳感器等。生物傳感器技術(shù)可以從腐敗或半腐敗飼料中檢測(cè)出病原微生物，也可以特異性識(shí)別飼料中的酶、抗體、組織、細(xì)胞等物質(zhì)，具有儀器設(shè)備小且靈敏，成本低且快速等優(yōu)點(diǎn)，尤其是檢測(cè)飼料中的病原微生物檢測(cè)，無(wú)需熱循環(huán)、酶切或電泳等其他復(fù)雜操作，僅用1～2h 即可完成檢測(cè)，但該快速檢測(cè)技術(shù)對(duì)樣品預(yù)處理要求較高。周歷嵐等（2017）利用表面等離子體振諧生物傳感器檢測(cè)飼料中的黃曲霉素，通過(guò)自動(dòng)化分析還可降低試驗(yàn)誤差[6]。

3 結(jié)語(yǔ)

隨著快速檢測(cè)技術(shù)的儀器、設(shè)備和試驗(yàn)方法不斷發(fā)展，飼料快速檢測(cè)技術(shù)也在逐漸完善。和常規(guī)飼料檢測(cè)技術(shù)相比，快速檢測(cè)技術(shù)不僅可以縮短試驗(yàn)檢測(cè)的時(shí)間，其對(duì)試驗(yàn)人員技能和環(huán)境要求不高，便于推廣。在今后研究中，飼料快速檢測(cè)技術(shù)可以降低樣品前處理的難度，其所用的儀器設(shè)備向著模塊化、信息化和小型化的方向發(fā)展，并提高試驗(yàn)的靈敏度和準(zhǔn)確度，這樣才能更好地促進(jìn)快速檢測(cè)技術(shù)在飼料行業(yè)中的應(yīng)用。