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        白血病患者T淋巴細胞及免疫球蛋白檢測價值評價

        2021-11-30 09:07:18葉筱穎朱瑜王子峰
        當代醫(yī)學 2021年33期
        關鍵詞:水平檢測

        葉筱穎,朱瑜,王子峰

        (1.江西省上饒市人民醫(yī)院血液科,江西 上饒 334000;2.江西省上饒市人民醫(yī)院檢驗科,江西 上饒 334000)

        白血病患者機體內部克隆性白血病細胞大量分化繁殖導致機體的造血組織出現(xiàn)大量表達而產生的血液系統(tǒng)疾病,可同時累及多種器官,貧血和出血是白血病患者主要臨床現(xiàn)象,據調查顯示,我國每10萬例中就有3~4例為白血病患者,兒童占比較高,目前在惡性腫瘤中排名靠前[1-2]。白血病包括急慢性白血病、淋巴性白血病等,但白血病的具體發(fā)病原因尚未明確[3]。有文獻表明,白血病疾病發(fā)展過程與機體免疫功能發(fā)生變化有關,人體免疫功能狀態(tài)與白血病發(fā)展過程互相影響,與病情發(fā)展具有此消彼長的趨勢[4],T淋巴細胞是在人胸腺傳出的特殊標志細胞,能夠分泌Th1和Th2細胞因子在自身及體液免疫疾病中發(fā)揮抵抗感染作用,并發(fā)現(xiàn)多種腫瘤實體的發(fā)生與T淋巴亞群及Th1和Th2細胞因子有關。淋巴細胞亞群中各類細胞發(fā)揮的作用有較大的區(qū)別,CD3+代表亞群數(shù)量,CD4+是主要細胞能增強細胞的免疫能力,CD8+細胞具有毒細胞作用,表達升高時具有抑制CD4+細胞表達的作用[5-6]。CD4+CD8+保持在一定范圍內具有平衡免疫細胞功能的作用,但是在白血病這種非實體腫瘤疾病的患者的體內水平表達如何,相關文獻較少,本研究對多例白血病患者和健康人Th1及Th2、CD4+CD25+及免疫球蛋白進行檢測,探討期臨床意義價值,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料 選取2015年1月至2019年1月在本院收治的45例初診和12例化療后緩解的急性白血病患者作為白血病組,初診患者男28例,女17例;平均年齡(45.36±7.45)歲;病情緩解者男7例,女5例;平均年齡(46.16±7.65)歲。另選取同期健康體檢者60名,男34名,女26名;平均年齡(45.38±8.69)歲。本研究經過醫(yī)院倫理委員會審核批準。

        1.2 納入及排除標準 納入標準:所有患者均符合2006年NCCN中關于急性白血病中的診斷標準,患者及家屬均簽署知情同意書。排除標準:治療后再次感染而入院治療者;臨床資料不完整者。

        1.3 方法

        1.3.1 血液標本 入院第2天清晨,抽取兩組患者靜脈血5 mL,2 mL靜脈血離心20 min,保留上清液,剩余3 mL放在EDTA無菌抗凝中備用。

        1.3.2 Th1和Th2細胞因子檢測 采取ELISE試劑盒(江蘇寶萊生物)檢測患者血清中白介素-2(IL-2)、干擾素(IFN-γ)及白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)表達,具體操作按照試劑盒說明書進行。

        1.3.3 免疫球蛋白檢測 采用免疫散射比濁法試劑盒(德沃生物科技)檢測患者血清中的免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)的表達。

        1.3.4 T淋巴細胞亞群檢測 抗凝的血樣2 h內采用PBS稀釋1∶1,在DMEM培養(yǎng)基中將淋巴細胞濃度調整為2×106個,30 min加入CD3+、CD4+、CD8+抗體,靜止20 min,離心后PBS緩沖液2次,采用流式細胞儀(美國,貝克曼庫爾特Navios)分析。

        1.3.5 CD4+CD25+T細胞檢測方法 選擇兩只無菌FACS試管,加入20μCD4-FIIC、MouseIGgI-PE試管中,另一只試管中加入20μCD4-FIIC、CD25-PE。加入少量FACS溶血素,離心棄去上清液,PBS搖勻,4℃保存1 h,采用流式細胞儀檢測,結果采用CD4+CD25+T細胞、CD4+CD25+highT細胞占CD4+T細胞的比例。

        1.3.6 乳酸托氫酶(LDH)檢測 血清中LDH采用日歷—7150型全自動生化分析儀(日本)測定。

        1.4 觀察指標 健康組和白血病組患者在初診時及完全緩解時的白血病患者Th1及Th2、CD4+CD25+及免疫球蛋白和LDH因子表達。

        1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據分析,計量資料以“”表示,采用t檢驗,計數(shù)資料以[n(%)]表示,采用χ2檢驗,以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

        2 結果

        2.1 兩組Th1及Th2細胞因子水平比較 白血病組患者Th1細胞中IL-2、IFN-γ表達低于健康組,緩解時白血病患者Th1細胞中IL-2、IFN-γ表達高于初診時,白血病組Th2細胞中IL-4、IL-10水平高于健康組(P<0.05),緩解時白血病患者Th2細胞中IL-4、IL-10表達低于初診時(P<0.05),見表1。

        表1 兩組Th1及Th2細胞因子水平比較Table 1 Comparison of Th1 and Th2 cytokine levels between two groups

        2.2 兩組免疫球蛋白水平比較 初診時白血病患者的免疫球蛋白IgA、IgM高于健康組,IgG低于健康組(P<0.05),緩解時白血病患者免疫球蛋白IgG、IgM水平與健康組水平比較差異無統(tǒng)計學意義,IgA高于健康組(P<0.05),見表2。

        表2 兩組免疫球蛋白水平比較(±s,g/L)Table 2 Comparison of immunoglobulin level between two groups(±s,g/L)

        表2 兩組免疫球蛋白水平比較(±s,g/L)Table 2 Comparison of immunoglobulin level between two groups(±s,g/L)

        注:IgA,免疫球蛋白A;IgG,免疫球蛋白G;IgM,免疫球蛋白M。與健康組比較,a P<0.05;與初診時比較,b P<0.05

        組別健康組白血病組初診時緩解時例數(shù)60 45 12 IgA 1.34±0.79 7.74±0.53a 2.59±0.69ab IgG 9.25±1.97 8.43±1.34a 9.45±1.76b IgM 1.54±0.37 1.79±0.23a 1.47±0.26b

        2.3 兩組T淋巴細胞亞群水平比較 白血病組患者在初診時T淋巴細胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組,CD8+高于健康組(P<0.05),與初診時比較,緩解時白血病患者T淋巴細胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+上升,CD8+下降(P<0.05),見表3。初診時比較,bP<0.05

        表3 兩組T細胞亞群水平比較(±s,%)Table 3 Comparison of T cell subpopulation level between two groups(±s,%)

        表3 兩組T細胞亞群水平比較(±s,%)Table 3 Comparison of T cell subpopulation level between two groups(±s,%)

        注:CD3+,成熟T淋巴細胞;CD4+,誘導性T細胞/輔助性T細胞;CD8+,抑制性T細胞/細胞毒性T細胞。與健康組比較,a P<0.05;與

        組別健康組白血病組初診時緩解時例數(shù)60 45 12 CD3+75.69±6.54 60.89±5.26a 69.32±3.27ab CD4+48.31±7.74 31.47±4.98a 39.77±3.64ab CD8+27.76±5.09 45.17±4.29a 36.26±3.89ab CD4+/CD8+1.84±0.23 1.02±0.18a 1.51±0.26ab

        2.4 兩組患者外周血CD4+CD25+表達比較 白血病組患者外周血CD4+CD25+、CD4+CD25+high高于健康組(P<0.05),緩解時,患者外周血CD4+CD25+、CD4+CD25+high低于初診時(P<0.05),見表4。

        表4 兩組CD4+CD25+表達水平比較(±s)Table 4 Comparison of CD4+CD25+expression level between two groups(±s)

        表4 兩組CD4+CD25+表達水平比較(±s)Table 4 Comparison of CD4+CD25+expression level between two groups(±s)

        注:與健康組比較,a P<0.05;與初診時比較,b P<0.05

        組別健康組白血病組初診時緩解時例數(shù)60 45 12 CD4+CD25+11.46±4.34 16.69±5.15a 14.26±3.48ab CD4+CD25+high 1.86±0.84 4.09±0.98a 2.89±0.93ab

        2.5 乳酸托氫酶(LDH)檢測 白血病患者初診時乳酸托氫酶(LDH)水平高于健康組(P<0.05),緩解時LDH水平低于初診時(P<0.05),見圖1。

        圖1 LDH水平Figure 1 LDH level

        3 討論

        急性白血病屬于非實性惡性腫瘤疾病,與機體內免疫活性細胞的產生、分化和增殖有關,免疫細胞異常會導致腫瘤細胞逃避宿主的免疫監(jiān)視,使外周淋巴細胞發(fā)生質與量的改變,從而形成腫瘤產生。機體內出現(xiàn)腫瘤細胞免與免疫細胞密丟失不可分[7-8]。CD4+能活化T細胞和B細胞,而當T細胞和B細胞活化時會釋放大量的細胞因子能夠促進CD8+T細胞表達增強,B細胞抗體受到影響,多角度多方面增強抗腫瘤細胞的能力。CD8+常在免疫應答后期發(fā)揮作用,在靶細胞過程產生細胞毒性外,還可以促進免疫抑制因子增加,削弱免疫應答能力,并在過程中能阻斷CD4+作用。CD4+/CD8+在一定范圍內能幫助維持免疫環(huán)境穩(wěn)定的功能,反映出免疫反應的調節(jié)能力,但免疫平衡遭到破壞時,可產生繼發(fā)性免疫缺陷。

        本研究結果顯示,白血病組患者Th1細胞中IL-2、IFNγ表達低于健康組,Th2細胞中IL-4、IL-10水平高于健康組(P<0.05)。細胞因子具有直接殺死腫瘤細胞及抵抗腫瘤效應細胞并間接起到抗病毒作用,是人體常見的抵抗腫瘤細胞的組成之一[9]。機體的細胞免疫主要是由Th1細胞因子中的IL-2及IFN-γ參與作用的,機體的體液免疫主要通過Th2細胞因子IL-4、IL-10發(fā)揮作用[10]。楊志剛等[11-12]研究發(fā)現(xiàn),Th1/Th2細胞因子異常是導致腫瘤細胞逃避的主要原因,并發(fā)現(xiàn)急性白血病患者免疫平衡向Th2漂移,使機體內出現(xiàn)腫瘤,但抑制作用無效的主要原因。因此,治療時可糾正Th1/Th2失衡,增強Th1細胞因子的能力,能抑制腫瘤細胞免疫逃竄,與劉曉等[13-14]研究結果一致。

        白血病組患者在初診時免疫球蛋白低于健康組(P<0.05),白血病機體免疫防御系統(tǒng)的組成部分包含Ig,并在抵抗腫瘤逃逸方面發(fā)揮重要作用[15]。本研究發(fā)現(xiàn)白血病患者體內的IgA、IgG和IgM表達低于健康人。伍香玲[16]發(fā)現(xiàn)在急性白血病患者體內發(fā)現(xiàn)Ig水平異常減少而導致患者的免疫功能減退有關,現(xiàn)在國內外對白血病患者Ig血癥尚無統(tǒng)一定論,但多數(shù)認為于B細胞功能失調有關。

        本研究結果顯示,白血病組患者在初診時T淋巴細胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組,CD8+高于健康組(P<0.05),緩解時與初診時相比T淋巴細胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+上升,CD8+下降(P<0.05)。這個現(xiàn)象說明急性白血病機體確實存在機體免疫功能紊亂現(xiàn)象,CD8+占比相對增加而導致機體免疫抑制狀態(tài)在急性白血病發(fā)病過程中存在重要意義。研究發(fā)現(xiàn)急性白血病患者CD4+細胞占比降低,表示患者機體細胞免疫功能下降,CD8+細胞分化增多會使機體收到免疫反應抑制,減少了抵抗白血病細胞的能力,使白血病細胞生長更加長久。

        本研究發(fā)現(xiàn)在白血病患者體內CD4+CD25+表達顯著高于健康人,提示急性白血病患者體內可能存在某種促進、CD4+CD25+Treg生成的產物,能促進機體免疫抑制[17]。Sixi[18]發(fā)現(xiàn)過表達CD4+CD25+Treg時,白血病患者機體內的免疫功能收到抑制,抵抗白血病細胞的能力減退,白血病細胞出現(xiàn)免疫逃逸,從而延長病程。另外,本研究發(fā)現(xiàn)LDH水平在白血病患者初診時水平遠遠高于緩解時和健康人的水平。在白血病初診時表達升高與機體周圍血幼稚細胞數(shù)量呈正比,LDH表達升高主要源于白血病細胞,可代表白血病細胞負荷的物質之一,與張娜等[19]研究結果一致。梁永生等[20]研究表明,在白血病患者細胞中LDH會在瀕臨死亡的細胞中滲出,表達活躍,并在白血病發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

        綜上所述,急性白血病患者免疫球蛋白表達異常,T淋巴細胞變化在急性白血病患者的治療指導具有臨床意義。

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