梁愛珍

（防城港市第一人民醫(yī)院，廣西 防城港，538000）

2019年12月發(fā)生發(fā)熱、肺部感染和咳嗽為主要癥狀的急性呼吸道傳染病，經(jīng)證實(shí)是由COVID-19所引起。WHO于2020年2月1日將其定為2019年冠狀病毒病，且宣布是突發(fā)的公共衛(wèi)生事件，為應(yīng)對(duì)COVID-19的流行，快速、準(zhǔn)確適宜的檢測(cè)技術(shù)對(duì)疾病診斷具有重要意義[1]。針對(duì)COVID-19診斷方式有病毒基因組測(cè)序、核酸檢測(cè)與特異性抗體檢驗(yàn)，核酸檢測(cè)是目前首選的檢測(cè)方式，其具有窗口期短，檢測(cè)靈敏度高等特點(diǎn)，最為廣泛的是熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（rRT-PCR）技術(shù)，擴(kuò)增位點(diǎn)針對(duì)病毒基因組中3段保守序列，即、核殼蛋白（N）、即開放讀碼框lab（ORF lab）、包膜蛋白基因（E）[2-3]。在能夠保證樣本治療與檢驗(yàn)質(zhì)量的前提下，核酸檢測(cè)存在特異性強(qiáng)、敏感度高的特點(diǎn)，常用樣本有、肺泡灌洗液、痰液、咽拭子、鼻拭子[4]。目前，COVID-19核酸檢測(cè)需求量大，需要提升其效率，擴(kuò)大檢測(cè)范圍，故推薦混采檢測(cè)和稀釋混合檢測(cè)，其中，混合檢測(cè)相對(duì)較優(yōu)，不但大大提高了檢測(cè)效率，還降低了檢測(cè)成本。本文現(xiàn)對(duì)混合檢測(cè)進(jìn)行綜述。

1 混合樣本的檢測(cè)背景

混合樣本主要指將多個(gè)不同人的樣本混合采集之后，若結(jié)果呈陰性，表示每個(gè)人的樣本均是陰性，若為陽性則說明其中有人血樣為陽性，之后分別對(duì)該人群樣本進(jìn)行逐個(gè)檢測(cè)。混合樣本時(shí)建立在比較成熟的檢驗(yàn)方式上，即采集、保存、混合檢測(cè)，最大程度避免了非實(shí)驗(yàn)因素變化所帶來的影響[5]。在進(jìn)行該項(xiàng)操作時(shí)要考慮幾個(gè)因素，樣品混合后不可相互干擾，以免產(chǎn)生假陽性或是假陰性。比如，不同血型血液混合后出現(xiàn)凝集反應(yīng)，導(dǎo)致標(biāo)本性質(zhì)的改變，再對(duì)血細(xì)胞檢測(cè)，故所得結(jié)果將不準(zhǔn)確；稀釋混樣后，可使待測(cè)物濃度低，導(dǎo)致假陰性結(jié)果，其次是需要有足夠靈敏的技術(shù)支持[6]。相關(guān)研究表示[7]，混合檢測(cè)有效提高檢測(cè)效率，節(jié)省了醫(yī)療資源。一項(xiàng)國(guó)外研究[8]中證實(shí)了該檢測(cè)方式，通過對(duì)糞便蠕蟲進(jìn)行檢測(cè)，以獨(dú)立檢測(cè)和混合檢測(cè)對(duì)比，后者敏感性特異性較高，同時(shí)減少耗材。

2 COVID-19核酸的混合樣本檢測(cè)

在早期的核酸檢測(cè)中，均以單檢方式，該方式比較穩(wěn)定、可靠、不易出現(xiàn)漏檢等優(yōu)勢(shì)。但缺點(diǎn)也較為明顯，其效率較低，在檢測(cè)任務(wù)重的情況之下，不能有效滿足大范圍群體快速篩查。為鞏固疫情防控成果，維護(hù)群眾的健康混合樣本的實(shí)施在其中起到重要作用[9]。一項(xiàng)北京市疾病預(yù)控混合檢測(cè)中[10]，對(duì)北京市民多以這種1:5混合檢測(cè)模式。另一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室中取不同樣本混合提取核酸，從而5份樣本中取40ul組成200ul混合提取核酸，但因有一定的稀釋效果，故對(duì)地病毒載量樣本具有假陰性的可能。同時(shí)考慮到混合檢測(cè)是針對(duì)地位人群的篩查，因此，對(duì)節(jié)約資源與加大人群篩查具有顯著優(yōu)勢(shì)。所以，國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)發(fā)布《關(guān)于印發(fā)新冠病毒核酸 篩查稀釋混樣檢測(cè)技術(shù)指引的通知》和《關(guān)于印發(fā)新冠病毒核酸10合1混采檢測(cè)技術(shù)規(guī)范的通知》，由此加快篩查診斷速度，減少傳播與節(jié)約社會(huì)成本[11]。在我國(guó)疫情中后期防控工作中，各地區(qū)疫情再次來臨之時(shí)，多地使用該項(xiàng)檢測(cè)用于全人群進(jìn)行大范圍的核酸檢測(cè)工作。

3 混合檢測(cè)質(zhì)量和應(yīng)用思考

混合樣本檢測(cè)依據(jù)混合時(shí)機(jī)分采樣混合和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)混樣檢測(cè)，采樣混合在核酸檢測(cè)中已明確使用。國(guó)內(nèi)已有研究或是指南證實(shí)使用1:5、1:10、1:48的混合比均可顯示理想的敏感性[12]。但在實(shí)際應(yīng)用中還要考慮到試劑敏感性問題，混合池內(nèi)樣本量越大，對(duì)試劑敏感性要求也較為嚴(yán)格，目前我國(guó)核酸檢測(cè)試劑盒靈敏度能夠達(dá)到500～600copy/ml，急性期陽性樣本中病毒拷貝數(shù)在104～164copy/ml，能夠滿足稀釋后樣本檢出的要求。另外，從技術(shù)層進(jìn)行分析，感染的初期利用咽拭子樣本行獨(dú)立核酸檢測(cè)，rRT-PCR閾值為18～22，我國(guó)常用的為40循環(huán)，若是依據(jù)樣本每稀釋2倍Ct值升高1估算，Ct在30左右樣本即使使用1:256混合比依然可保證其敏感性。而最終決定混合樣本量是臨床操作，即，采樣方便、安全和操作等。樣本的質(zhì)量直接關(guān)系到混檢結(jié)果，所以要對(duì)采集樣本人員標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)，同時(shí)，采集樣本前要充分的震蕩樣本管，實(shí)驗(yàn)室檢行混樣檢測(cè)的步驟較多，故注意滅活，以免產(chǎn)生院內(nèi)感染[13]。此外，不可一步法提取，推薦以磁珠法、柱提法，從而獲取較高濃度的核酸，減少對(duì)擴(kuò)增體系的干擾。

4 小結(jié)

總而言之，混合檢測(cè)與獨(dú)立檢測(cè)的敏感性方面相當(dāng)，特異性未受到影響，特別適于群體檢測(cè)，對(duì)此，該項(xiàng)檢測(cè)為新型冠狀病毒核酸篩查提供了快捷有效的方案。