潘英瀟， 郭大偉， 李新， 盧恕來

1.青島大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，山東 青島（266011）； 2.青島大學(xué)附屬青島市市立醫(yī)院口腔醫(yī)療中心，山東 青島（266011）

口腔扁平苔蘚（oral lichen plants，OLP）是一種常見的，由T 細(xì)胞介導(dǎo)的慢性黏膜炎癥性疾病［1］，其臨床表現(xiàn)為左右對稱的，由小丘疹連成的白色或灰白色的條紋，其發(fā)病機制尚不明確［2］。Micro RNAs（miRNAs）是一組由約22 個核苷酸組成的單鏈非編碼RNA，它們通常調(diào)控轉(zhuǎn)錄后的基因表達(dá)，在人體的生長發(fā)育，免疫防御，細(xì)胞的增殖與凋亡等生物過程中發(fā)揮重要的作用［3］。目前發(fā)現(xiàn)miR?NAs 在炎性反應(yīng)，自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用。本文根據(jù)對OLP 的不同影響，將miRNAs 進(jìn)行分類為與OLP 發(fā)病、嚴(yán)重程度及癌變風(fēng)險相關(guān)的miRNAs 作一綜述。

1 miRNA 簡介

miRNA 是由內(nèi)源基因編碼的小非編碼核糖核苷酸序列，長度約為22 個核甘酸，能調(diào)節(jié)靶基因信使RNA（mRNA）的翻譯，是內(nèi)源表觀遺傳學(xué)基因表達(dá)調(diào)節(jié)劑。研究發(fā)現(xiàn)它們能夠以組合的方式調(diào)節(jié)大約30%的蛋白質(zhì)編碼基因的表達(dá)，已經(jīng)成為基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)控因子。哺乳動物中miRNA 產(chǎn)生可以分成以下四步：①在細(xì)胞核內(nèi)，編碼miRNA 的基因轉(zhuǎn)錄成pri?miRNA；②由Drosha 和DiGeorge 綜合征染色體區(qū)域8（DGCR8）組成的微處理器復(fù)合體隨后切割pri?miRNA 以產(chǎn)生前體miRNA（pre?miRNA）；③通過Exportin?5 將pre?miRNA 從細(xì)胞核運輸?shù)郊?xì)胞質(zhì)，隨后Dicer 酶將pre?miRNA 進(jìn)一步切割；④雙鏈RNA 的一條鏈裝載到Argonaute（AGO）蛋白中以形成RNA 誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物（RNA?induced silencing complex，RISC），與RISC 并入的成熟miRNA 能夠通過堿基配對靶向mRNA［4］。miRNA 5’末端中的6 個核苷酸被稱為“種子序列”，可以與靶mRNA 的3’UTR 發(fā)生特異性結(jié)合，將mRNA 靶向降解或翻譯調(diào)控。大多數(shù)miRNA 通過基因沉默機制影響基因表達(dá)，包括通過RISC 的mRNA 切割和翻譯抑制。miRNA 可以抑制mRNA 翻譯，穩(wěn)定或誘導(dǎo)其降解，在細(xì)胞增殖和細(xì)胞穩(wěn)態(tài)過程中發(fā)揮重要作用，可以調(diào)節(jié)遺傳表達(dá)并參與細(xì)胞功能的調(diào)控［5?6］。

2 可能與OLP 發(fā)病相關(guān)的miRNAs

通過研究轉(zhuǎn)錄因子和miRNA 協(xié)同調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子（transcriptional factor，TF）?miRNA 共同調(diào)控的具有功能關(guān)系的相關(guān)基因組在OLP 的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用。某些miRNA 可靶向于趨化因子受體5 基因，通過促進(jìn)CD14 和β?連環(huán)蛋白的 產(chǎn) 生 誘 導(dǎo)OLP 的 發(fā) 生［7］。miRNA 也 可 作 用 于TLR2、絲氨酸?蘇氨酸激酶（AKT1）與雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTORC）、S?特異性周期蛋白?D1 基因（CCND1）及蛋白，通過調(diào)控白細(xì)胞介素（interleukin，IL）、干擾素?γ（interferon?γ，IFN?γ）和腫瘤壞死因子?α（tumor necrosis factor?α，TNF?α）等細(xì)胞因子，誘導(dǎo)Th1 和Th2 的失衡，促進(jìn)OLP 的發(fā)生［8］。

2.1 miRNA?19a

miRNA?19a 是由人類第13 號染色體上的基因轉(zhuǎn)錄而成，Wang 等［9］研究發(fā)現(xiàn)在OLP 組中，miRNA?19a 的表達(dá)顯著升高，且直接靶向TLR2 導(dǎo)致其表達(dá)明顯上調(diào)，增加了TNF?α 和IFN?γ 的產(chǎn)生，同時降低了IL?4、IL?5 和IL?10 的水平。此外，通過協(xié)同誘導(dǎo)Th1 和Th2 之間的失衡，miRNA?19a/TLR2 上調(diào)可能導(dǎo)致OLP 發(fā)病風(fēng)險升高。

2.2 miRNA?122 和miRNA?199

miRNA?122 是由人18 號染色體上的HCR 基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的，該基因包含兩個外顯子和一個內(nèi)含子。miRNA?199 由位于人19 號染色體上的基因轉(zhuǎn)錄而成。Wang 等［9］在對OLP 患者及健康者的外周血樣本進(jìn)行微陣列分析及其qRT?PCR 分析之后，發(fā)現(xiàn)OLP 患者外周血單核細(xì)胞中miRNA?122 及miRNA?199 的表達(dá)水平相對健康對照組均有顯著下降，研究發(fā)現(xiàn)miRNA?122，miRNA?199 直接靶向AKT1 與mTOR，且AKT1 和mTOR 在OLP 患者的外周血單核細(xì)胞中表達(dá)水平較高。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)miRNA?122 與AKT1，miRNA?199 與mTOR 之間存在負(fù)反饋調(diào)節(jié)的關(guān)系。該研究表明miR?199 和miR?122 可能通過調(diào)控mTOR 和AKTI 的表達(dá)參與OLP的發(fā)病機制。

2.3 miRNA?138

miRNA?138 為由Dicer 酶處理后形成的，長度約 為22 個 核 苷 酸 產(chǎn) 物。Ghallab 等［10］研 究 發(fā) 現(xiàn)，OLP 患者組相對于健康組，miRNA?138 呈現(xiàn)低表達(dá)，但靶蛋白G1/CCND1 卻在基因及蛋白水平中呈現(xiàn)過表達(dá)；且在OLP 的亞分組中，miRNA?138 在萎縮型OLP 及糜爛型OLP 中的表達(dá)水平均低于網(wǎng)狀型OLP，萎縮型OLP 患者CCND1 基因及蛋白的表達(dá)水平最高；這提示miRNA?138 及CCND1 在OLP的發(fā)生與發(fā)展中起到重要的作用，miRNA?138 在鑒別OLP 分型中有一定的臨床價值。另外，miRNA?138 的下調(diào)增加了細(xì)胞周期蛋白D1 在OLP 黏膜中的表達(dá)，這可能在疾病發(fā)病中起關(guān)鍵作用。

2.4 miRNA?635 和miRNA?578

Shen等［11］對OLP患者及健康組的組織樣本中的miRNA?635、miRNA?578 和IL?17A 進(jìn)行了qRT?PCR及免疫印跡實驗；結(jié)果顯示，OLP 患者組中IL?17 相對健康對照組的表達(dá)水平明顯降低，且在HEK293細(xì)胞中通過雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)證實miR?NA?635及miRNA?578是IL?17A的靶基因；這提示IL?17A 高表達(dá)及其靶miRNA?635、miRNA?578 低表達(dá)可能對OLP的發(fā)生有一定促進(jìn)作用。

3 可能與OLP 嚴(yán)重程度相關(guān)的miRNAs

研究發(fā)現(xiàn)，某些miRNA 可能靶向作用于FOXP3、ANGPT1、MMP1 基因，從而促進(jìn)OLP 的發(fā)展［7］。另外，某些miRNA 可以通過調(diào)節(jié)固有免疫TLR 信號通路和STAT1/IFN?γ 等信號通路參與調(diào)控調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory cells，Tregs），調(diào)節(jié)CD4+T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子c?Maf 的水平，參與CD4+T 細(xì)胞在Th1/Th2 亞群上的分化過程；通過調(diào)控腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子?6（tumor necrosis factor receptor associated factor 6，TRAF6），調(diào)節(jié)OLP 的進(jìn)程；通過調(diào)控細(xì)胞因子信號傳導(dǎo)抑制因子1（suppressor of cytokine signalling 1，SOCS?1）的基因表達(dá)，影響IFN信號；通過由磷酸激酶及轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的信號通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、趨化因子和轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生，促進(jìn)T 細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫炎性疾病的發(fā)展［11?12］。

3.1 miRNA?125a

Chen 等［13］通過測序發(fā)現(xiàn)與對照組相比，OLP患者的miRNA?125a 表達(dá)存在明顯差異，研究表明OLP 患者外周血單核細(xì)胞的miRNA?125a 表達(dá)下降，并且RAE 評分（reticular：網(wǎng)狀；atrophic：萎縮；erosive lesion：糜爛病變）與miRNA?125a 呈顯著負(fù)相關(guān)，提示外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mono?nuclear cells，PBMCs）中miRNA?125a 可作為評估OLP 嚴(yán)重程度的重要生物標(biāo)記物。

3.2 miRNA?132

陳雪芬等［14］研究發(fā)現(xiàn)OLP 患者miRNA?132 的表達(dá)水平顯著高于對照組，糜爛型OLP 患者miR?NA?132 的相對表達(dá)量明顯高于非糜爛型和對照組，而非糜爛型OLP 患者miR?132 的相對表達(dá)量與對照組無差異。研究結(jié)果表明，miRNA?132 高表達(dá)可能與OLP 的異常免疫反應(yīng)有關(guān)，并且miRNA?132可以作為評估OLP 病情嚴(yán)重程度的輔助指標(biāo)。

3.3 miRNA?146a

miRNA?146a 是第一個被發(fā)現(xiàn)在免疫系統(tǒng)中具有調(diào)節(jié)作用的miRNA，已有研究證實其在固有免疫Toll 樣受體（Toll?like receptor，TLR）及其信號通路中具有負(fù)調(diào)節(jié)作用［12］。miRNA?146a 參與了CD4+T 細(xì)胞在Th1/Th2 亞群上的分化過程［15］。研究表明miRNA?146a 通過STAT1/IFN?γ 信號通路參與調(diào)控Treg 細(xì)胞，且在小鼠細(xì)胞中，miRNA?146a可能具有將幼稚T 細(xì)胞分化為Th1 效應(yīng)細(xì)胞的功能。Anmadi?Motamayel 等［16］研究發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，OLP 組miRNA?146a 水平顯著升高，并推測miRNA?146a 的表達(dá)模式及受調(diào)節(jié)潛在轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可以影響CD4+T 細(xì)胞向Th1 或Th2 的分化。Wang 等［9］發(fā)現(xiàn)miRNA?146a 可通過調(diào)控TRAF6 來調(diào)節(jié)OLP 的進(jìn)程，但由于缺乏對該miRNA 調(diào)節(jié)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的具體分析，其機制仍需要進(jìn)一步的探討。

3.4 miRNA?155

miRNA?155 是一個典型的多功能基因，位于人類21 號染色體上bic（B?cell integration cluster）基因的第三個外顯子內(nèi)［17］，為外顯子中一段138 個核苷酸保守序列編碼miRNA?155 的前體發(fā)夾結(jié)構(gòu)。miRNA?155 表達(dá)譜參與了CD4+T 細(xì)胞在Th1/Th2 亞群上的分化過程。Rodriguez 等［18］的研究表明，miRNA?155 缺陷小鼠的樹突狀細(xì)胞在對抗原的反應(yīng)中未能誘導(dǎo)有效的T 細(xì)胞活化。同時證明bic/miRNA?155 可以調(diào)節(jié)CD4+T 細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子c?Maf的水平，這與體內(nèi)中Th2 細(xì)胞反應(yīng)的衰減有關(guān)。此外，有研究者認(rèn)為通過IFN?γ 信號miRNA?155 有助于CD4+T 細(xì)胞中Th1 細(xì)胞的分化。而且，miRNA?155 可以調(diào)控SOCS1 的基因表達(dá)，該基因是細(xì)胞因子IFN 的負(fù)調(diào)控因子。最近研究表明，miRNA?155影響免疫調(diào)節(jié)，其中包括影響由磷酸激酶及轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的信號通路。另有研究發(fā)現(xiàn)miRNA?155不僅調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、趨化因子和轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生，并且還可以促進(jìn)T 細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫的炎性疾病。研究發(fā)現(xiàn)miRNA?155 在糜爛型OLP 患者血漿和PBMCs 中相對表達(dá)量均高于非糜爛型OLP 患者，提示miRNA?155 可作為預(yù)測OLP 病損嚴(yán)重程度的指標(biāo)［16］。

4 可能與OLP 癌變風(fēng)險相關(guān)的miRNAs

基于具有功能關(guān)系的TF?miRNA 協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的研究顯示，部分基因和一些以癌基因或抑癌基因為靶點的miRNA 與OLP 的癌變密切相關(guān)，且協(xié)同調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在OLP 的癌變中發(fā)揮著重要作用［7］。miRNA 可通過激活大鼠肉瘤（rat sarcoma，RAS）癌基因的表達(dá)促進(jìn)腫瘤的發(fā)生；通過激活Keratin 18（KRT18）基因，促進(jìn)腫瘤分化和轉(zhuǎn)移，促進(jìn)OLP 惡化成口腔鱗狀細(xì)胞癌；可能通過沉默蛋白酪氨酸磷酸酶（phosphate and tension homology deleted on chromsome ten，PTEN）基因，進(jìn)而上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1 的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞生長；可能通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子LIN28A 的表達(dá)，調(diào)控腫瘤干細(xì)胞［7］；可能通過增加口腔角質(zhì)形成細(xì)胞（human oral kera?tinocytes，HOKs）中PLK2（polo like kinase 2，PLK2）的水平來誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，促進(jìn)OLP 癌變［19］。

4.1 miRNA?26a 和miRNA?29a

Roy 等［20］通過研究miRNA 及其靶基因在OLP、白斑和口腔癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)miRNA?26a、miRNA?29a 在OLP 組織中表達(dá)上調(diào)，而在白斑及口腔癌組織中表達(dá)明顯下調(diào)，其靶向的癌癥相關(guān)基因AD?AMTS7、CDK6、EZH2、CPEB3、PI3KR1 等表達(dá)也下調(diào)。研究結(jié)果提示，miRNA?26a、miRNA?29a 和靶基因表達(dá)的改變可能在癌前病變向癌癥的發(fā)展過程中起重要作用，miRNA?26a、miRNA?29a 和AD?AMTS7 等組成的基因表達(dá)譜有助于區(qū)分口腔癌與OLP。

4.2 miRNA?27b

miRNA?27b 是由位于人類第9 號染色體的hsa?miRNA?27b 經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和酶切形成的。目前發(fā)現(xiàn)其在人類結(jié)腸癌細(xì)胞中起到腫瘤抑制作用，降低的miRNA?27b 也會促進(jìn)口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squa?mous cell carcinoma，OSCC）增殖。Aghbari 等［21］發(fā)現(xiàn)OLP 患者組織及唾液中miRNA?27b 明顯低于正常對照組。Chen 等［19］研究發(fā)現(xiàn)OLP 組織中miRNA?27b 表達(dá)量明顯下調(diào)，PLK2 水平顯著提高，并提示PLK2 為miRNA?27b 的潛在靶基因，miRNA?27b 的降低可能通過增加HOKs 中PLK2 的水平來誘導(dǎo)細(xì)胞增殖。

4.3 miRNA?31 和miRNA?200a

Mehdipour 等［22］采集了30 例OLP 患者的唾液樣本，其中15 例被確診為異常增生OLP 患者。另外采集了15 例OSCC 患者及15 位健康對照者的唾液樣本，通過qRT?PCR 檢測其目標(biāo)miRNA 含量。研究結(jié)果表明miRNA?31 只在異常增生OLP 和OS?CC 患者的唾液中表達(dá)水平升高，miRNA?200a 只在OSCC 患者的唾液中表達(dá)水平降低。該研究提示唾液中miRNA?31 及miRNA?200a 水平可作為評估OLP 患者癌變風(fēng)險的指標(biāo)。

4.4 miRNA?137

Aghbari 等［21］研究發(fā)現(xiàn)，在唾液及組織樣本中，OLP 患者的miRNA?137 表達(dá)水平明顯低于健康組；且在組織樣本中，丘疹型OLP 與糜爛型OLP 的miRNA?137 表達(dá)存在差異；在唾液樣本中，丘疹型OLP、萎縮型OLP 均與糜爛型OLP 的miRNA?137 表達(dá)存在差異，這說明miRNA?137 的表達(dá)水平可能會影響OLP 的臨床表現(xiàn)類型。Dang 等［23］發(fā)現(xiàn)OLP患者的組織樣本中僅在上皮細(xì)胞中miRNA?137 及p16 基因存在異常的啟動子甲基化，而在OLP 患者的結(jié)締組織中卻不存在這種現(xiàn)象。以上研究提示miRNA?137 可以成為OLP 疾病活動和惡變傾向的生物標(biāo)志物。

5 總結(jié)與展望

綜上所述，雖然目前OLP 的病因及發(fā)病機制尚不明確，但大量研究表明miRNAs 對OLP 的發(fā)生、嚴(yán)重程度和癌變風(fēng)險具有提示意義，但其具體作用機制尚未闡明，需要進(jìn)一步研究探討。目前關(guān)于miRNAs 與OLP 的研究仍存在不足之處，如許多利用基因芯片篩選差異表達(dá)miRNAs 的研究并沒有根據(jù)OLP 類型或癌變風(fēng)險進(jìn)一步的分組探究。

【Author contributions】Pan YX collected the references，wrote and revised the article. Guo DW collected the references，reviewed the article. Li X collected the references，revised the article. Lu SL reviewed the article. All authors read and approved the final manu?script as submitted.