周世波

（重慶永榮礦業(yè)有限公司總醫(yī)院病理科，重慶 402460）

宮頸上皮內(nèi)病變是一組與子宮頸浸潤(rùn)癌密切相關(guān)的癌前病變。此病的發(fā)生、發(fā)展與患者存在人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）持續(xù)感染有關(guān)。有研究指出，幾乎所有的宮頸上皮內(nèi)病變患者都存在HPV 感染[1-2]。宮頸上皮內(nèi)病變發(fā)展為宮頸癌需要較長(zhǎng)的時(shí)間。有學(xué)者指出，了解宮頸上皮內(nèi)病變患者的HPV 感染情況有助于判斷其病情的進(jìn)展情況。相關(guān)的研究表明，與存在單一HPV 感染的宮頸上皮內(nèi)病變患者相比，存在多重HPV 感染宮頸上皮內(nèi)病變患者的預(yù)后較差[3]。近年來，隨著人們對(duì)女性健康的重視程度越來越高，宮頸上皮內(nèi)病變患者的HPV 感染情況逐漸成為臨床上研究的熱點(diǎn)。本文對(duì)2017 年1 月至2020 年10 月在重慶永榮礦業(yè)有限公司總醫(yī)院就診的100 例宮頸上皮內(nèi)病變患者進(jìn)行研究，旨在分析宮頸上皮內(nèi)病變患者的HPV 感染情況與其臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017 年1 月至2020 年10 月在重慶永榮礦業(yè)有限公司總醫(yī)院就診的100 例宮頸上皮內(nèi)病變患者（病情經(jīng)薄層細(xì)胞學(xué)檢查得到確診）作為研究對(duì)象。其納入標(biāo)準(zhǔn)是：1）臨床資料完整；2）近1 個(gè)月內(nèi)未使用過抗菌藥物；3）性生活史≥3 年；4）其本人及其家屬均知情并同意參與本研究，且均已簽署知情同意書。其排除標(biāo)準(zhǔn)是：1）合并有心、肝、腎功能不全；2）存在血液系統(tǒng)疾病或全身性感染；3）存在嚴(yán)重的精神疾病或認(rèn)知障礙。這些患者的年齡為25 ～70歲，平均年齡（50.34±10.67）歲；其中有未婚的患者15 例，已婚的患者85 例，有未育的患者23 例，已育的患者77 例。本研究經(jīng)重慶永榮礦業(yè)有限公司總醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

對(duì)100 例患者均進(jìn)行HPV DNA 分型檢測(cè)和宮頸組織病理檢查。進(jìn)行HPV DNA 分型檢測(cè)的方法如下：1）告知患者檢查前3 d 內(nèi)禁止進(jìn)行陰道給藥，檢查前24 h 內(nèi)禁止過性生活。在非經(jīng)期對(duì)患者進(jìn)行檢查。在患者進(jìn)入檢查室后，用窺陰器擴(kuò)張其陰道，充分暴露其宮頸。使用干棉簽擦凈宮頸口的分泌物，用HPV 毛刷在宮頸鱗柱的交界處順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5 圈，采集宮頸口、宮頸管上脫落的上皮細(xì)胞。完成采集后，將HPV 毛刷置于專用的HPV 保存液中，并及時(shí)送檢。若未能第一時(shí)間送檢，則需將標(biāo)本置于4℃的環(huán)境中保存待檢。2）取0.5 mL 的宮頸細(xì)胞液樣本，進(jìn)行離心處理（離心速度為14000 rpm，離心時(shí)間為1 min），然后留取上清液。將其加入到400 μL 的溶液Ⅰ中振蕩混勻，置于100℃下加熱15 min，隨后將其加入到400 μL 的溶液Ⅱ中，振蕩混勻，置于室溫下靜置2 min。再次進(jìn)行離心處理（離心速度為14000 rpm，離心時(shí)間為1 min）后留取上清液，室溫下靜置2 min，然后將其加入到60 μL 的溶液Ⅲ中充分溶解。再次進(jìn)行離心處理（離心速度為14000 rpm，離心時(shí)間為1 min），然后取1 ～2 μL 的上清液，并稀釋于無菌蒸餾水中。使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)其OD260-280值。3）將水、DNA 模版、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction,PCR）預(yù)混液和水生棲熱菌（thermus aquaticus，Tap）酶相混合，加入核酸模版5μL，混勻后進(jìn)行擴(kuò)增處理。PCR 擴(kuò)增反應(yīng)條件：在50℃環(huán)境下擴(kuò)增15 min；95℃預(yù)變性10 min；95℃變性20 s；55℃退火90 s；72℃延伸30 s。共循環(huán)40 次，于72℃下延伸5 min。隨后進(jìn)行PCR 產(chǎn)物導(dǎo)流雜交。孵育5 min，重復(fù)2次。加入酶標(biāo)液，于25℃下溫育3.5 min，使用沖洗緩沖液進(jìn)行徹底的沖洗，除去未結(jié)合的酶標(biāo)液，加入化學(xué)發(fā)光底物溶液，于蓋板上顯色3 ～5 min。在膜芯片上對(duì)應(yīng)的HPV亞型探針位點(diǎn)上可見藍(lán)色斑點(diǎn)，提示單一HPV 感染。在膜芯片上可見兩個(gè)或兩個(gè)以上對(duì)應(yīng)HPV 亞型探針位點(diǎn)上的顯色斑點(diǎn)，提示雙重或多重HPV 感染。進(jìn)行宮頸組織病理檢查的方法是：在陰道鏡下觀察患者宮頸處的上皮細(xì)胞和血管。在藍(lán)光下觀察有無異常血管。用3%的冰醋酸棉球浸潤(rùn)宮頸3 min，然后觀察上皮細(xì)胞顏色及形態(tài)的變化情況。隨后在宮頸處涂2%的碘溶液，觀察碘反應(yīng)。對(duì)碘染色異常位置進(jìn)行活檢，采用順時(shí)針錐切法切取組織標(biāo)本（深達(dá)宮頸管黏膜下10 ～15 mm）。完成切取后，進(jìn)行組織病理檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果分為宮頸上皮內(nèi)病變Ⅰ級(jí)（cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ，CIN Ⅰ）、宮頸上皮內(nèi)病變Ⅱ/Ⅲ級(jí)（cervical intraepithelial neoplasia Ⅱ/Ⅲ，CIN Ⅱ/Ⅲ）和宮頸癌。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察100 例患者HPV DNA 分型檢測(cè)和宮頸組織病理檢查的結(jié)果，并比較其中不同臨床病理特征患者的HPV 感染情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對(duì)本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2 檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用F檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 100 例患者HPVDNA 分型檢測(cè)和宮頸組織病理檢查的結(jié)果

100 例患者HPV DNA 分型檢測(cè)的結(jié)果如表1 所示，其宮頸組織病理檢查的結(jié)果如表2 所示。

表1 100 例患者HPV DNA 分型檢測(cè)的結(jié)果

表2 100 例患者宮頸組織病理檢查的結(jié)果

2.2 比較100 例患者中不同臨床病理特征患者的HPV 感染情況

在100 例患者中，宮頸癌患者中存在多重HPV 感染患者的占比高于CIN Ⅰ患者、CIN Ⅱ/ Ⅲ患者，P＜0.05。詳見表3。

表3 比較100 例患者中不同臨床病理特征患者的HPV 感染情況[例(%)]

3 討論

宮頸癌是臨床上常見的一種女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌的發(fā)病率[4]。宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素、多基因、多階段相互作用的過程。臨床研究發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的宮頸癌患者和宮頸上皮內(nèi)病變患者都存在HPV 感染[5-6]。本研究的結(jié)果顯示，在100 例患者中，有CIN Ⅰ患者28 例（占28.00%），CIN Ⅱ/Ⅲ患者52 例（占52.00%），宮頸癌患者20 例（占20.00%）；其中有單一HPV 感染患者41 例（占41.00%），雙重HPV 感染患者30例（占30.00%），多重HPV 感染患者24 例（占24.00%），無HPV 感染的患者5 例（占5.00%）?？梢姡^大多數(shù)的宮頸上皮內(nèi)病變患者都存在HPV 感染。HPV 是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒。大部分女性在感染HPV 后，均能通過自身的免疫功能將其清除，但部分患者會(huì)出現(xiàn)HPV 持續(xù)感染的情況，并逐漸出現(xiàn)宮頸病變[7-8]。本研究的結(jié)果顯示，在100 例患者中，宮頸癌患者中存在多重HPV 感染患者的占比高于CIN Ⅰ患者、CIN Ⅱ/ Ⅲ患者，P＜0.05。這表明，存在多重HPV 感染的宮頸上皮內(nèi)病變患者，其宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較高。這與相關(guān)研究的結(jié)果相符[9-10]。對(duì)于存在多重HPV 感染的宮頸上皮內(nèi)病變患者，臨床上應(yīng)及時(shí)對(duì)其進(jìn)行有針對(duì)性的治療，以降低其宮頸癌的發(fā)生率。

綜上所述，宮頸上皮內(nèi)病變患者的HPV 感染情況與其臨床病理特征的關(guān)系密切。存在多重HPV 感染的宮頸上皮內(nèi)病變患者，其宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)較高。