高天佐 楊少艷 吳美麗 馬冬 王玉超 許春雨 劉紅祥

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2021.11.035

摘要：通過送檢案例結(jié)合實驗室臨床檢測，常遇到臨床表現(xiàn)關節(jié)腫脹、癱瘓的病禽，關節(jié)剪開后可見大量渾濁液體，進行細菌分離，分離到明顯的葡萄球菌，且多與其它病原繼發(fā)或并發(fā)感染;通過流行病學與試驗數(shù)據(jù)顯示，葡萄球菌存在家禽、水禽多組織臟器中;產(chǎn)蛋下降雞群與一些肝臟壞死、出血、易碎、破裂樣本中也常分離到細菌，葡萄球菌也是其中一部分，對肝臟破裂樣本進行內(nèi)毒素檢測，臨床明顯細菌病雞群的內(nèi)毒素均超標。

關鍵詞：病禽;臨床;解剖;細菌分離;診斷;防治

1 案例分享

1.1 送檢信息

山東某規(guī)?；B(yǎng)殖公司，7個棟舍，其中1個公雞棟舍與1個母雞棟舍從18周齡開始出現(xiàn)癱瘓，前期腿部未發(fā)現(xiàn)明顯病變，現(xiàn)23周，期間陸續(xù)出現(xiàn)單腿跛行，跗關節(jié)腫脹，公雞490～500只/舍，現(xiàn)每棟每日約出現(xiàn)10只左右，約2%，母雞5，500只/舍，每天出2～3只，約0.5%（注：公雞相比母雞體型明顯偏大），明顯癱瘓雞單獨抗生素治療效果不理想，只能淘汰。

1.2 解剖癥狀

公雞與母雞主要表現(xiàn)跗關節(jié)皮下滲出、干酪物，爪墊干酪物。

1.3 實驗室檢測

RT-PCR/PCR：采集關節(jié)組織與棉拭子樣本，將關節(jié)組織進行強烈破碎，使用生理鹽水/PBS按照1：4～1：5的比例混勻（組織占20%～25%）。

細菌分離：采集病變明顯（腫脹）跗關節(jié)，在腫脹明顯位置清潔后碘液作用1～3min，隨后75%酒精脫碘，用無菌眼科剪將腫脹部位剪開，用接種環(huán)采集腫脹部位膿性滲出液，接種到TSA（胰蛋白酶大豆瓊脂）與麥康凱培養(yǎng)基中標準分區(qū)涂菌后放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24h后取出，在TSA培養(yǎng)基中為明顯金黃色、實心菌落，麥康凱培養(yǎng)基中未生長，取TSA中培養(yǎng)好的細菌用接種環(huán)無菌采集單菌落，涂入甘露醇培養(yǎng)基中，放入培養(yǎng)箱12～24h后出現(xiàn)明顯純黃色菌落。

1.4 結(jié)論

送檢關節(jié)組織與棉拭子樣本通過RT-PCR/PCR檢測，均未檢測到病毒性關節(jié)炎與滑液囊支原體的目的性基因條帶。

檢跗關節(jié)通過細菌分離，從病變部位分離到葡萄球菌。

2 流行病學

葡萄球菌廣泛分布在自然界中，可經(jīng)接觸和空氣傳播，是一種條件性疾病，能產(chǎn)生多種毒素和酶，污染嚴重、外傷感染與機體抵抗力低是發(fā)病的主要原因。一年四季均可發(fā)生，夏秋高溫多雨季節(jié)多發(fā);雞胚、0～1日齡雛雞以及數(shù)百日齡蛋/種雞、肉種雞等各個階段雞群都可發(fā)生，雛雞感染后發(fā)病嚴重;該病原不但明顯外傷感染、關節(jié)腫脹可分離到，還可存在于健康雞體表、鼻腔、肝臟、心臟、精液、卵黃、輸卵管等組織器官。

疾病感染、管理不適等應激因素造成雞群抵抗力下降、皮膚黏膜受損、癱瘓等也給本病感染創(chuàng)造了有利條件（表1）。

將近期實驗室葡萄球菌分離情況進行了統(tǒng)計（圖1），數(shù)據(jù)顯示家禽中肉種雞占比最高，其次蛋/種雞、白羽肉雞、黃羽肉雞（相對存欄量較少）;水禽送檢樣本占家禽的19%;數(shù)據(jù)中“其它”樣本包含雞胚、精液、環(huán)境拭子等。

3 臨床與解剖

根據(jù)感染部位不同主要分為關節(jié)炎型、皮膚型、臍炎型、內(nèi)臟型、眼型等。

1）關節(jié)炎型：以30～65日齡肉用型及大日齡體偏重雞群多發(fā)，主要表現(xiàn)喜臥、關節(jié)腫大（如圖2）、站立困難，驅(qū)趕時可勉強行動，腫脹部位剪開后明顯漿液性浸潤（如圖3），病程時間長會形成黃色干酪物、部分出血發(fā)生明顯變性（如圖4）。

2）皮膚型：造成外傷等因素使破潰部位感染葡萄球菌后發(fā)生皮炎，羽毛易脫落;皮膚充血、出血、糜爛、有滲出物，惡臭（如圖5、圖6）。

3）臍炎型：孵化和出雛器中的條件較適合細菌生長，剛出殼雛雞臍孔開張、免疫系統(tǒng)發(fā)育不成熟，雛雞臍帶愈合不良易感染導致死亡或慢性感染;臍孔發(fā)炎腫大，腹部膨脹，皮下充血、出血，有黃色膠凍樣滲出物，俗稱“大肚臍”。

4）內(nèi)臟型：該病肉雞、蛋雞都有，發(fā)病相對較急，肝臟、脾臟及腎臟密集大小不一的黃白色壞死點，腺胃黏膜有彌漫性出血（如圖7）和壞死。

5）眼型：表現(xiàn)為上下眼瞼腫脹，閉眼，有膿性分泌物粘連。眼結(jié)膜紅腫，時間較長雞只雙眼失明。

4 鑒別與診斷

4.1 細菌分離

致病葡萄球菌病原體是金黃色葡萄球菌，革蘭氏陽性菌，顯微鏡下為藍色圓形或卵圓形“實心”球菌（如圖8），常呈葡萄狀排列，不形成芽孢，無鞭毛，無運動性，多數(shù)金黃色葡萄球菌菌株的表面有莢膜多糖抗原的存在;其衰老、死亡或被白細胞吞噬后，以及耐藥的菌株可被染成革蘭氏陰性;需氧或兼性厭氧，少數(shù)專性厭氧，28～38℃均能生長，致病菌最適溫度為37℃，pH為4.5～9.8，最適為7.4;營養(yǎng)要求不高，普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基即可生長（如圖9），麥康凱培養(yǎng)基不生長，在含有血液的培養(yǎng)基上生長效果更好，多數(shù)致病菌株在血液培養(yǎng)基上菌落四周出現(xiàn)溶血環(huán)、在甘露醇培養(yǎng)基上顯黃色。

4.2 生化反應

取分離到的細菌加入生化鑒定管中，放入37℃恒溫箱中作用24h與48h分別進行觀察，根據(jù)生化反應和產(chǎn)生色素不同，可分為金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌三種（表2），其中金黃色葡萄球菌多為致病菌，表皮葡萄球菌偶爾致病，腐生葡萄球菌一般不致病;多數(shù)葡萄球菌能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、產(chǎn)酸不產(chǎn)氣;多數(shù)致病性菌株能分解甘露醇、液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶;過氧化氫酶陽性，可與鏈球菌相區(qū)分。

5 防治措施

5.1 管理

檢查籠具及相關工具，不可有尖銳物體。保持雞舍通風干燥，地面平養(yǎng)要防止墊料潮濕、保持清潔。合理安排飼養(yǎng)密度，光照應當強弱適中，適時斷喙，防止相互啄羽、啄肛，轉(zhuǎn)群時注意輕拿輕放，合理安排飼養(yǎng)密度，科學制定空舍時間，消除一切感染隱患。

5.2 營養(yǎng)

提供營養(yǎng)全價平衡的飼料，特別注意補充維生素和無機鹽，防止維生素、礦物質(zhì)缺乏導致發(fā)育受阻、皮炎、干裂和癱瘓;疾病感染期間飼料中VA加倍使用。

5.3 防止繼發(fā)感染

做好滑液囊支原體、雞痘、傳染性貧血、病毒性關節(jié)炎的防控工作，減少葡萄球菌并發(fā)、繼發(fā)感染。

5.4 清潔與消毒

孵化過程嚴格執(zhí)行清潔消毒制度，發(fā)病雞與帶菌雞是主要傳染源，應隔離發(fā)病雞并對雞舍、用具等使用0.3%的過氧乙酸進行消毒，消毒藥/液應交替使用。

5.5 藥敏試驗

減少抗生素的濫用，對發(fā)病雞采取早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，同時大群做好相關預防措施，選擇治療革蘭氏陽性菌藥物進行藥敏試驗，截至目前實驗室統(tǒng)計敏感藥物依次為磷霉素、頭孢哌酮、頭孢噻肟;當發(fā)生葡萄球菌性眼炎時，可根據(jù)藥敏結(jié)果進行局部治療。

5.6 免疫

藥物防治效果不理想時，可在雛雞20日齡使用葡萄球菌滅活苗進行免疫接種。

5.7 結(jié)語

葡萄球菌為相對于有代表性的細菌性疾病，菌苗、藥物都具有一定的防治效果，耐藥菌株的形成影響藥物治療效果，而且抗生素使用受限;在此情形下建議首先要做好生物安全，養(yǎng)殖場內(nèi)應嚴格把控環(huán)境衛(wèi)生，葡萄球菌仍需以預防為主。