馬麗云

（北京卓誠(chéng)惠生生物科技股份有限公司，北京 102206）

纖維蛋白原是一種分子量約為340,000 道爾頓的糖蛋白，在正常血漿中的濃度范圍是2～4g/L (200～400mg/dL)。它在肝臟中合成(1.7～5g/天)。纖維蛋白原的合成受編碼β 鏈合成的基因控制。由于該基因的遺傳多態(tài)性，血漿中的纖維蛋白原水平存在個(gè)體差異。纖維蛋白原的半衰期約為3～5 天。纖維蛋白原由6 條鏈組成：2Aα，2Bβ 和2γ。凝血酶(因子Ⅱa)將纖維蛋白原分子裂解成兩個(gè)纖維蛋白肽A(FPA)片段(從Aα 鏈)和兩個(gè)纖維蛋白肽B(FPB)片段(從Bβ 鏈)。由此產(chǎn)生的纖維蛋白單體聚合形成纖維蛋白，隨后在因子X(jué)IIIa 的作用下成為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)。過(guò)程首先是兩個(gè)纖維蛋白單體的兩條γ 鏈結(jié)合。結(jié)合后的纖維蛋白是為D-二聚體(D-Dimer)的來(lái)源，D-Dimer 是纖維蛋白的特定降解產(chǎn)物。

纖維蛋白原含量增高見(jiàn)于糖尿病、急性心肌梗死、急性傳染病、結(jié)締組織病、急性腎炎、多發(fā)性骨髓瘤、休克、大手術(shù)后、妊高征、急性感染、惡性腫瘤和應(yīng)急狀態(tài)等。降低常見(jiàn)于先天性低或無(wú)FIB 血癥、遺傳性FIB異常、DIC、原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等。此外，纖維蛋白原還可能是心血管血栓性疾病的致病因素。因此纖維蛋白原的測(cè)定在臨床診斷上有很重要的臨床意義。

纖維蛋白原檢測(cè)試劑盒根據(jù)檢測(cè)原理可分為凝固法、免疫比濁法、磁珠攪拌法、Clauss 法等。

其中凝固法的檢測(cè)原理是在過(guò)量的凝血酶存在下，稀釋血漿的凝固時(shí)間可直接反映血漿中纖維蛋白原的水平；免疫比濁法：標(biāo)本中的FDP 與鼠抗FDP 單克隆抗體膠乳粒發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，產(chǎn)生凝聚導(dǎo)致濁度上升。通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定濁度變化率，求出FDP 的濃度。磁珠攪拌法：凝血酶是一種活力強(qiáng)大的，可做用于多種凝血因子的水解酶，其首要功能是使FIB分解生成FM 和兩個(gè)小肽碎片（A 肽和B 肽），A 肽和B 肽在FX Ⅲ及Ca2+作用下可以使一個(gè)分子的ε-賴氨酰基作為供體，以另外一個(gè)單體分子γ-谷氨?；鳛槭荏w進(jìn)行共價(jià)交聯(lián)，形成穩(wěn)定的纖維蛋白，生成的纖維蛋白所用的時(shí)間與纖維蛋白原的含量成反比，通過(guò)光電子法測(cè)定杯內(nèi)鋼球震幅的改變來(lái)測(cè)定凝固時(shí)間。Clauss 法：凝血酶可以將可溶性血漿纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成不溶性的多倍體纖維素，在高濃度凝血酶和低濃度纖維蛋白原的條件下，血漿凝固時(shí)間由纖維日蛋白原的濃度決定，在雙對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上作圖，凝血酶凝固時(shí)間與纖維蛋白原的濃度呈反比的線性關(guān)系。

目前體外診斷試劑的市場(chǎng)上有很多關(guān)于纖維蛋白原測(cè)定的試劑盒。例如：纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（凝固法）、纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（免疫比濁法）、纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（磁珠攪拌法）、纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（Clauss 法）等。但是試劑盒之間也會(huì)存在技術(shù)差異，因此為了更好地判定試劑盒的檢測(cè)能力，以及檢測(cè)結(jié)果與臨床診斷的相關(guān)程度。選取任意兩個(gè)已上市銷(xiāo)售的纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（凝固法）（以下簡(jiǎn)稱試劑A）、纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（免疫比濁法）（以下簡(jiǎn)稱試劑B）/纖維蛋白原測(cè)定試劑盒（磁珠攪拌法）（以下簡(jiǎn)稱試劑C）做了以下研究。

選取醫(yī)院科室日常檢驗(yàn)剩余枸櫞酸鈉血漿110 例，包括檢測(cè)水平正常及異常的樣本。樣本的處理方法為：采集9 份體積的血液于1 份體積0.109M(即濃度3.2%)的枸櫞酸鈉抗凝劑中。2,000-2,500g 離心15 分鐘。于20±5℃下保存不超過(guò)8 小時(shí)。選取的樣本要求：臨床剩余樣本；非嚴(yán)重溶血、混濁的樣本；未被微生物污染的樣本；樣本采集和處理符合標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室處理要求的樣本。數(shù)據(jù)處理的要求：統(tǒng)計(jì)時(shí)剔除超出線性的檢測(cè)樣本。樣本編盲要求：由非盲態(tài)研究者負(fù)責(zé)收集樣本，并將樣本去標(biāo)識(shí)化、符合要求的樣本應(yīng)在檢測(cè)前進(jìn)行編號(hào)，樣本編號(hào)的原則建議根據(jù)樣本納入的先后順序，給予一個(gè)4 位數(shù)的樣本號(hào)（按照入組順序?yàn)?01,002,003 等），如1001,1002 等。并保留樣本原始編號(hào)和新編號(hào)的對(duì)應(yīng)關(guān)系，以便試驗(yàn)數(shù)據(jù)的核查，編號(hào)完畢再由一位盲態(tài)研究者進(jìn)行測(cè)試。

在測(cè)定過(guò)程中，對(duì)樣本分別用受試試劑和對(duì)比試劑進(jìn)行測(cè)定，分別記錄測(cè)量值，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行如下分析。定量分析：根據(jù)試劑A 的測(cè)定結(jié)果與試劑B 的測(cè)定結(jié)果，求出線性回歸方程，計(jì)算樣本濃度范圍、相關(guān)系數(shù)（r）及常數(shù)的95%置信區(qū)間。定性分析：根據(jù)試劑A及試劑B說(shuō)明書(shū)的各自規(guī)定，檢測(cè)結(jié)果在各自參考值范圍內(nèi)的，判斷為陰性；檢測(cè)結(jié)果在各自參考值范圍外的，判斷為陽(yáng)性。如試劑A 和試劑B 的定性分析不符，則用試劑C 作為第三方檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)并判定。以試劑B 檢出結(jié)果作為參照，計(jì)算試劑A 的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率和研究試劑和對(duì)比試劑的一致性kappa值。陽(yáng)性符合率：受試試劑陽(yáng)性樣本占對(duì)比試劑陽(yáng)性樣本的比例。陰性符合率：受試試劑陰性樣本占對(duì)比試劑陰性樣本的比例。總體符合率：檢出結(jié)果一致的樣本占總樣本的比例。kappa 值：受試試劑和對(duì)比試劑的一致性。

本次入組的樣本臨床診斷多為糖尿病、急性心肌梗死、急性傳染病、結(jié)締組織病、急性腎炎、多發(fā)性骨髓瘤、休克、大手術(shù)后、妊高征、急性感染、惡性腫瘤和應(yīng)急狀態(tài)DIC、原發(fā)性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等。根據(jù)此次試劑A 和試劑B 對(duì)入組的110 例樣本的檢測(cè)，其中1 例樣本對(duì)試劑A 和試劑B 均超出檢測(cè)上限，所以在最終統(tǒng)計(jì)中需剔除此樣本的檢測(cè)結(jié)果。因此最終對(duì)109 例樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行定量及定性的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下。

定量統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析：樣本數(shù)量109例，Y截距0.0307，相關(guān)系數(shù)0.9913，斜率0.9481，樣本濃度范圍1.55g/L-7.51g/L。設(shè)試劑B 測(cè)定結(jié)果為X，試劑A 測(cè)定結(jié)果為Y，經(jīng)計(jì)算，N=109 次，r=0.9913，P=0.000（P〈0.001），根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原理，兩組數(shù)據(jù)高度相關(guān)。一元線性回歸方程為：y=0.9481x +0.0307。對(duì)試劑A 和試劑B 的測(cè)定值的進(jìn)行線性回歸分析樣本濃度范圍為1.55g/L-7.51g/L，試劑A 和試劑B 的測(cè)定值的Pearson 相關(guān)系數(shù)（r）為0.9913，P〈0.001。以受試產(chǎn)品測(cè)定值為Y 變量，對(duì)比產(chǎn)品測(cè)定值為X 變量擬合線性回歸方程，y=0.9481x+0.0307，其回歸系數(shù)為0.9481，回歸系數(shù)的95%可信區(qū)間為0.919-0.967，常數(shù)的95%可信區(qū)間為-0.082 -0.130，線性回歸方程具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F 值=6095.451，P〈0.001），說(shuō)明受試產(chǎn)品和對(duì)比產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性良好。

定性統(tǒng)計(jì)結(jié)果分析：根據(jù)試劑A 及試劑B 說(shuō)明書(shū)的各自規(guī)定，試劑A檢測(cè)結(jié)果2g/L-4g/L 為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。試劑B 檢測(cè)結(jié)果2g/L-4g/L 的為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。試劑C 檢測(cè)結(jié)果2g/L-4g/L 為陰性，其余檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。本次試驗(yàn)共檢測(cè)110 例樣本，對(duì)這110 例有效樣本進(jìn)行定性分析（其中在定量分析時(shí)，剔除的5 號(hào)樣本（原因：試劑A和試劑B 檢測(cè)結(jié)果均超出線性上限），有定性意義，故在本次定性分析時(shí)無(wú)需剔除）結(jié)果如下。以試劑B 檢出結(jié)果作為參照，計(jì)算試劑A 的陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率和試劑A 和試劑B 的一致性kappa 值。陽(yáng)性符合率＝(3+42)/(4+48)×100%＝86.54%，陰性符合率＝54/58×100%＝93.10%，總符合率＝(3+42+54)/110×100%＝90.00%，Kappa 值＝0.799。

不符樣本結(jié)果如下描述：樣本1：性別女，年齡33 歲，臨床診斷為乏力，腦血管病（慢性?。?，缺血性腦卒中恢復(fù)期，慢性胃炎，試劑A檢測(cè)結(jié)果4.02g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果3.92 g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果4.05 g/L；樣本2：性別男，年齡53 歲，腦血管?。圆。?，高脂血癥，試劑A 檢測(cè)結(jié)果2.03g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果1.90 g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果2.20g/L；樣本3：性別女，年齡64 歲，高脂血癥，動(dòng)脈硬化，腦血管病（慢性?。?，靜脈曲張，上感，試劑A檢測(cè)結(jié)果3.94g/L，試劑B檢測(cè)結(jié)果4.18g/L，試劑C檢測(cè)結(jié)果3.95g/L；樣本4：性別女，年齡41 歲，呼吸道感染，感冒，支氣管炎，試劑A 檢測(cè)結(jié)果3.70g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果4.21g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果4.55g/L；樣本5：性別女，年齡26 歲，急性播散性腦脊髓炎，肺部感染，血小板減少癥，高血壓（慢性?。?，試劑A 檢測(cè)結(jié)果3.91g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果4.11g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果4.47g/L；樣本6：性別女，年齡79 歲，腰椎間盤(pán)突出，腰椎管狹窄，腰痛，腰椎間盤(pán)突出，試劑A 檢測(cè)結(jié)果3.66g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果4.28 g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果3.98g/L；樣本7：性別男，年齡82 歲，腦血管病（慢性?。蚴Ы?，試劑A檢測(cè)結(jié)果4.10g/L，試劑B檢測(cè)結(jié)果3.98g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果4.47g/L；樣本8：性別男，年齡29 歲，腦血管?。圆。毙阅X梗死（左頂葉皮層及島葉），頸動(dòng)脈狹窄，試劑A 檢測(cè)結(jié)果1.83g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果2.02g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果2.44g/L；樣本9：性別男，年齡77 歲，糖尿?。圆。?，高血壓（慢性?。?，冠心?。圆。?，腦血管病，試劑A 檢測(cè)結(jié)果1.79 g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果2.13g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果2.07g/L；樣本10：性別男，年齡63 歲，冠心?。圆。?，冠心?。圆。悄虿。圆。?，試劑A檢測(cè)結(jié)果3.87g/L，試劑B檢測(cè)結(jié)果4.21g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果3.95g/L；樣本11：性別男，年齡65 歲，腦血管病（慢性?。?，動(dòng)脈粥樣硬化，高脂血癥，周?chē)窠?jīng)病，試劑A 檢測(cè)結(jié)果3.76g/L，試劑B 檢測(cè)結(jié)果4.18g/L，試劑C 檢測(cè)結(jié)果3.40g/L。

分析：本次臨床試驗(yàn)不符的樣本共11 例，其中：4 例樣本試劑B 檢測(cè)結(jié)果在參考值范圍內(nèi)，但試劑A 檢測(cè)結(jié)果在參考值范圍外；7 例樣本試劑B 檢測(cè)結(jié)果在參考值范圍外，但試劑A 檢測(cè)結(jié)果在參考值范圍內(nèi)；結(jié)合試劑C 的檢測(cè)結(jié)果分析：11 例不符的樣本中，有7 例樣本試劑A 檢測(cè)結(jié)果與試劑C 的檢測(cè)結(jié)果相符；4 例樣本試劑B 檢測(cè)結(jié)果與試劑C 的檢測(cè)結(jié)果相符。從測(cè)值來(lái)看，試劑A 與試劑B 兩組測(cè)值相近。且試劑A、試劑B、試劑C 的檢測(cè)結(jié)果三組測(cè)值相近。其中不符的測(cè)值都在參考值附近，不符的原因很可能是因?yàn)橄到y(tǒng)之間的差異造成，另外部分疾病本身對(duì)于測(cè)值也有一定影響，所以三種測(cè)值有可能會(huì)存在一定差異。但是這種差異對(duì)于臨床診斷的判別影響不大，因?yàn)榕R床醫(yī)生不會(huì)僅僅根據(jù)臨床的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行病人診斷，病人診斷的確定是根據(jù)病人針對(duì)性的檢查與臨床觀察和病人描述等多種因素綜合診斷得出。

根據(jù)此次任意選取的三種已上市的常見(jiàn)的纖維蛋白原檢測(cè)試劑盒作為檢測(cè)試劑，對(duì)110 例樣本同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)分析得出，不同的試劑盒對(duì)于同一份樣本的檢測(cè)結(jié)果之間存在差異，但此差異的出現(xiàn)可能是因?yàn)闄z測(cè)系統(tǒng)及樣本本身造成的，此類(lèi)情況在臨床上是可以接受的。