張 斌，宋囡囡，劉 浩，李 玲，邱樹磊，郭廣富，武彩紅*

（1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇泰州 225300；2.泰州醫(yī)藥高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)鳳凰畜牧獸醫(yī)站，江蘇泰州 225300）

巴馬香豬遺傳性穩(wěn)定，具有早熟、耐粗飼、抗病力強(qiáng)和產(chǎn)仔多等特點，是我國優(yōu)良的地方豬種，2001年被列入國家種質(zhì)資源保護(hù)計劃（舒黎輝和邢君，2015）。作為優(yōu)良種質(zhì)資源被保護(hù)，同時，因巴馬香豬肉質(zhì)營養(yǎng)豐富和味道鮮美，被作為食品開發(fā)；又因其體重輕，生長慢，作為試驗動物被廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。此外，巴馬香豬因其毛色“兩頭烏”，外形圓潤俊俏，深受寵物市場青睞（玉萍等，2011）。

巴馬香豬因具有獨特的種質(zhì)特性而具有良好的開發(fā)利用前景。在目前疫情頻發(fā)的背景下，對巴馬香豬進(jìn)行高效繁殖研究與開發(fā)顯得尤為緊迫。因此，本研究以巴馬香公豬為研究對象，研究在日糧中添加復(fù)方中草藥對其精液品質(zhì)及免疫的影響，對提高巴馬香豬繁殖和種質(zhì)資源保存具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗動物和分組 試驗將12只健康、成年、性成熟性能相近的巴馬香公豬隨機(jī)分為4組，每組3只，1組為對照組，飼喂基礎(chǔ)日糧；2組為低劑量復(fù)方中草藥組，在基礎(chǔ)日糧中添加1%復(fù)方中草藥；3組為中劑量復(fù)方中草藥組，在基礎(chǔ)日糧中添加2%復(fù)方中草藥；4組為高劑量復(fù)方中草藥組，在基礎(chǔ)日糧中添加3%復(fù)方中草藥。

所有試驗動物每天飼喂2次，1.0 kg/次，自由飲水。分別在試驗開始后第0、7、14和21 d采集精液，檢測精液品質(zhì)；空腹前腔靜脈采集血液，分離血清，-20℃保存，用于測定免疫指標(biāo)。

1.2 復(fù)方中草藥組方及制備 淫羊藿、菟絲子、補(bǔ)骨脂、覆盆子等以一定比例混合后粉碎，然后于溫箱中烘干后分裝備用。

1.3 測定方法

1.3.1 精液采集 手握法無菌采集精液，將精液盛于37℃預(yù)熱的燒杯中，用量筒測量精液體積。

1.3.2 精子活力測定 參照張斌等（2018）方法，精液經(jīng)稀釋后置于預(yù)熱載玻片上，加蓋玻片后顯微鏡下計數(shù)200個精子中直線運動精子所占的百分率，即為精子活力。

1.3.3 精子畸形率 采用吉姆薩染色法，具體方法參照 GB 23238-2009（2009）。精液抹片，干燥后置于中性福爾馬林液中固定15 min，經(jīng)吉姆薩液染色1.5 h，顯微鏡下計數(shù)200個精子中的畸形精子所占百分率，即為精子畸形率。

1.3.4 免疫指標(biāo) 血清中IgA、IgG、IgM含量測定分別按照豬IgA、IgG、IgM ELASA檢測試劑盒說明書操作，利用酶標(biāo)儀在450 nm波長測量各孔的OD值，然后根據(jù)公式換算，得出血清中IgA、IgG、IgM含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理 試驗數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件中ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果分析

2.1 日糧添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液品質(zhì)的影響 由圖1可知，給藥后14 d，中、高劑量組精液量顯著高于對照組（P＜0.05）；而21 d時，所有給藥組精液量均顯著高于對照組（P＜0.05），但以中劑量組增加最為明顯，且顯著高于低、高劑量組（P＜0.05）。給藥后各組的精液量呈增加趨勢，但低劑量組14、21 d時精液量顯著高于0、7d（P ＜ 0.05）；中劑量組 7、14和 21 d精液量均顯著高于0 d（P＜0.05）；在高劑量組中，僅21 d時精液量顯著高于0、7 d（P＜0.05）。

圖1 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液量的影響

由圖2可見，與對照組相比，不同給藥組在同一日齡下，7、14 d時僅中劑量組精子活力顯著高于對照組（P＜0.05），21d時各給藥組精子活力與對照組均存在統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。同一給藥組相比，低劑量組14、21 d時精子活力與0、7 d間存在顯著差異（P＜0.05）；中劑量組在給藥后7、14和21 d時，精子活力與0 d均存在顯著差異（P＜0.05），但14、21 d間差異不顯著（P＞0.05）；在高劑量組中，雖精子活力逐漸升高，但僅21 d時精子明顯高于0、7d（P＜0.05）。

圖2 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精子活力的影響

由圖3可知，中劑量組精子畸形率在14 d和21 d時顯著低于對照組，低、高劑量組精子畸形率在21 d時也顯著低于對照組（P＜0.05）。與同一給藥組相比，隨著給藥時間增加，除高劑量組14 d外，14 d和21 d各給藥組間精子畸形率均明顯降低（P＜0.05）。

圖3 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精子畸形率的影響

2.2 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬免疫指標(biāo)的影響 由表1可知，給藥后0、7d各組IgA、IgG和IgM含量與對照組無明顯變化（P＞0.05）；14 d和21 d中劑量組IgA顯著高于對照組（P＜0.05）。組內(nèi)相比，21 d各給藥組IgA和IgG含量均最高（P＜0.05）。就IgM含量來看，組間和組內(nèi)相比均無顯著差異（P＞0.05）。

表1 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬血清中IgA、IgG、IgM含量的影響 g/L

3 討論

3.1 日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液品質(zhì) 精子是精液的主要成分，精子數(shù)量、活力、畸形率等直接影響精液質(zhì)量（李葉子和劉波，2016）。因此，本試驗主要通過精液量、精子活力和精子畸形率評價日糧中添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬精液品質(zhì)的影響。在動物繁殖方面，中草藥改善公畜精液品質(zhì)也發(fā)揮了積極作用（楊飛來等，2020）。

本試驗復(fù)方中草藥選擇淫羊藿、菟絲子、補(bǔ)骨脂、覆盆子為主藥。其中淫羊藿主要含有黃酮、生物堿、多糖等壯陽類活性成分（黃濤，2017），具有雄激素樣作用。菟絲子主要包含黃酮、多糖、糖苷化學(xué)成分，具有補(bǔ)肝腎、益精髓作用（劉運鎮(zhèn)等，2014）。補(bǔ)骨脂具有補(bǔ)腎助陽，固精縮尿功效（楊闊等，2021）。覆盆子具有補(bǔ)腎益精、補(bǔ)助腎陽功效（曾小艷等，2020）。楊飛來等（2020）研究表明，淫羊藿提取物可顯著改善公豬精液量和精液品質(zhì)。菟絲子黃酮可通過保護(hù)生精細(xì)胞，抑制生精細(xì)胞凋亡，促進(jìn)生精細(xì)胞活性（2021）。嚴(yán)迪華等（2012）研究表明，日糧添加含有一定劑量的補(bǔ)骨脂和覆盆子的中草藥復(fù)方制劑可顯著提高種公豬的精液品質(zhì)。本試驗中，在日糧添加淫羊藿、菟絲子、補(bǔ)骨脂、覆盆子等組成的復(fù)方中草藥在提高巴馬香公豬精液量，增加精子活力，降低精子畸形率方面具有一定作用，特別是中劑量組在給藥14 d和21 d時作用顯著。

3.2 日糧添加復(fù)方中草藥對巴馬香公豬免疫功能的影響 免疫球蛋白是由淋巴細(xì)胞特別是漿細(xì)胞合成的一類具有抗體活性的球蛋白，包括IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中IgA、IgG、IgM常用于評價動物機(jī)體免疫能力。IgA主要存在于外分泌液中，是黏膜細(xì)胞表面的主要免疫活性成分；IgG含量高，持續(xù)時間久，是發(fā)揮免疫功能的主要因子（Allaire等，2018）。本試驗復(fù)方中草藥的主藥淫羊藿、菟絲子、補(bǔ)骨脂、覆盆子均具有提高和改善機(jī)體免疫功效（曾小艷等，2020）。本試驗結(jié)果表明，日糧中添加復(fù)方中草藥可有效提高巴馬香公豬血清中IgA和IgG含量，說明該復(fù)方中草藥可提高巴馬香公豬免疫能力。