陳 卓 錢 祥 傅曉璇 馬冠君 張愛琴

證候的生物學(xué)基礎(chǔ)研究是中醫(yī)現(xiàn)代化研究的關(guān)鍵部分，也是闡明中醫(yī)科學(xué)本質(zhì)的核心環(huán)節(jié)。在中醫(yī)傳統(tǒng)理論指導(dǎo)下，利用多組學(xué)技術(shù)可以從不同的層面探討相互作用及調(diào)控關(guān)系[1]。“組學(xué)”強(qiáng)調(diào)從整體角度研究生物體的功能，這與中醫(yī)“整體觀”高度一致。綜合各組學(xué)技術(shù)進(jìn)行中醫(yī)證候研究以獲得該證候的基因表達(dá)譜、蛋白質(zhì)圖譜與代謝群譜，可能會(huì)更全面、更有效地揭示證候的本質(zhì)與規(guī)律[2]。肺癌是目前世界范圍內(nèi)腫瘤發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤[3]，氣陰兩虛證是其常見證候。因此，本研究運(yùn)用16S rDNA和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS 技術(shù)）對非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）氣陰兩虛證進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)和腸道微生態(tài)學(xué)的研究，旨在為NSCLC 中醫(yī)證候的診斷提供生物學(xué)基礎(chǔ)，為今后開展中醫(yī)藥抗癌治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本次研究對象來自2019 年3 月—2019 年9 月浙江省腫瘤醫(yī)院胸部外科門診就診患者13例，擬行肺癌根治術(shù)（入組前未做任何治療），由中醫(yī)科兩名副主任以上中醫(yī)師同時(shí)辨證為氣陰兩虛證，其中男3例，女15例，年齡46～75（59.23±8.67）歲，TNM 分期[4]（惡性腫瘤國際臨床病期分類）：原位癌1例，Ⅰa 期9例，Ⅰb 期1例，Ⅱb 期1例，Ⅲa 期1例。同時(shí)期招募健康志愿者15 名，要求經(jīng)普通體檢及實(shí)驗(yàn)室檢查排除心腦血管、肝腎、內(nèi)分泌等重大疾病且近3 周內(nèi)無感染性疾病、無抗生素治療史。本臨床研究通過浙江省腫瘤醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核（批準(zhǔn)號：IRB-2018-219）。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 經(jīng)組織病理學(xué)和/或細(xì)胞學(xué)證實(shí)為NSCLC[5]。符合《中醫(yī)臨床診療術(shù)語·證候部分》[6]氣陰兩虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)：神疲乏力，口干少飲，舌質(zhì)紅或淡，脈細(xì)弱等為常見癥的證候。

1.3 納入、排除及脫落標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）年齡18～70 歲；（3）無其他惡性腫瘤個(gè)人史；（4）患者本人同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）近3 周內(nèi)使用過抗生素治療；（2）有精神疾病，無完全民事行為能力。脫落標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者依從性差；（2）患者要求終止試驗(yàn)。

1.4 觀察指標(biāo)及方法

1.4.1 腸道微生態(tài)分析 稱取糞便樣本200mg，加入30mL 緩沖溶液，充分振蕩混勻，1000r/min 離心5min 后收集沉淀,以10mL 緩沖液重懸。使用QIAamp Fast DNA Stool Mini Kit（QLAGEN-51604）對糞便微生物DNA 進(jìn)行提取。待提取后，用瓊脂糖凝膠電泳和Thermo NanoDrop 2000 紫外微量分光光度計(jì)進(jìn)行總DNA 質(zhì)檢。將樣本進(jìn)行16S V3-V4區(qū)域擴(kuò)增，引物信息為：上游引物序列為：341F（5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3'；下游引物：805R（5'-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3'（杭州晶佰生物技術(shù)有限公司提供）。將稀釋后的基因組DNA 作為模板，使用Phanta Max Master Mix（Vazyme-P525）高保真酶進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）。PCR 的反應(yīng)條件是：95℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s，重復(fù)25 個(gè)循環(huán)；最后72℃持續(xù)5min。PCR 反 應(yīng) 體 系 為：2 ×Phanta Max Master Mix（Vazyme）25μL，引物（10μm）各為2μL，加入ddH2O至50uL。取PCR 產(chǎn)物1.5μL，使用2%瓊脂糖膠，置于120V 電壓下持續(xù)電泳20min 后使用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行紫外成像拍照。

文庫質(zhì)檢合格后，使用量子位（Qubit）對混合文庫pool 進(jìn)行濃度定量，并依據(jù)每個(gè)樣品的數(shù)據(jù)量要求，進(jìn)行相應(yīng)的比例混合，最后運(yùn)行測序儀（Miseq）測序程序。將序列完全一樣的原始測序數(shù)據(jù)（Clean Reads）根據(jù)其豐度大小進(jìn)行排序，將其中的Singletons 過濾掉，利用Usearch 在0.97 相似度下進(jìn)行聚類，對聚類后的序列進(jìn)行嵌合體過濾，得到用于物種分類的奧圖（OTU），最后將所有Clean Reads 比對到OTU 序列上，將能比對上OTU 的Reads 提取出來，得到最終的比對后數(shù)據(jù)（Mapped Reads）。

1.4.2 蛋白組學(xué)分析 使用抗凝真空采血管收集空腹外周血5mL，靜置20min 后采用3000r/min 離心分離血清。在待測血清樣本中加入裂解液，沸水中水浴15min。使用-20℃低溫高速離心機(jī)14000r/min 離心15min 取上清液。分裝樣品，-20℃低溫保存。鑒定每個(gè)樣本中蛋白，進(jìn)行電泳并定量各蛋白的濃度及總量。取蛋白提取物30μg，加入200μL 的8M 尿素充分混合，在20℃、14000r 離心15min。濃縮液用200μL 的8M 尿素在pH 8.5 的0.1 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（MTris-HCl）中稀釋后進(jìn)行離心。沉淀用100μL 的8M 尿素在pH 8.5 的0.1MTris-HCl 中稀釋后再次離心。濃縮液經(jīng)胰蛋白酶（酶蛋白比為1∶100，50mMABC）在37℃濕室消化12h 后離心并收集消化液，用50μL 的0.5M 氯化鈉沖洗后再離心。將得到的溶液與10%的三氟乙酸結(jié)合并酸化。酸化后用C18TIPS（皮爾斯，Thermo Science entific）脫鹽。根據(jù)制造商的說明進(jìn)行活化、平衡、肽洗和洗脫。TIPS 用50%乙腈2 次漂洗活化，然后用0.1%三氟乙酸水溶液兩次漂洗平衡。將富含多肽的溶液緩慢抽吸并由TIP 分配10 個(gè)循環(huán)。用0.1%三氟乙酸進(jìn)行兩次洗滌脫鹽。脫鹽肽用50μL 50%CAN 洗脫，洗脫產(chǎn)物真空干燥，再懸浮于30μL 的0.1%甲酸（FA）中。含脫鹽肽（3μL）的溶液通過EASY-納米LC 系統(tǒng)進(jìn)行在線納米流動(dòng)液相色譜分離。將LC 連接到內(nèi)徑為100μm的2cm 預(yù)柱上，填充5μm C18 樹脂。柱前反應(yīng)后，用3μm C18 樹脂填充75μm×15cm 毛細(xì)管柱。通過逐步梯度洗脫從柱前和分析柱上洗脫多肽。根據(jù)Maxquant（1.6 版）中的Uniprto 人類蛋白序列數(shù)據(jù)庫搜索所有的原始文件。用Perseus 統(tǒng)計(jì)各亞組的折疊變化。數(shù)據(jù)框中大于2 倍變化（＞2 or＜0.5）的蛋白質(zhì)組被標(biāo)記為顯著改變的蛋白質(zhì)。

1.4.3 代謝組學(xué)分析 使用抗凝真空采血管收集空腹外周血5mL，靜置30min 后采用3000r/min 離心分離血清，-80℃度低溫冰箱保存。取血清樣本200μL，在室溫下冰上解凍，加入預(yù)先冷藏-20℃過夜的甲醇/乙睛（1∶1）600μL，渦旋30s，14000r/min 4℃離心15min，取上清液置離心管中，真空離心濃縮儀干燥。樣本干燥后加入乙腈/甲醇（80/20）-水混合溶液（1∶1）復(fù)溶，渦旋60s，14000r/min 4℃離心15min，取上清液4μL 進(jìn)UPLC-Q/TOF-MS 分析。

待測樣品采用ExionLCAD 超高效液相色譜系統(tǒng)（UHPLC）ACQUITY UPLC HSS T3（100mm×2.1mm，1.8μm）色譜柱進(jìn)行分離；進(jìn)樣盤溫度：4℃；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：4μL；流動(dòng)相組成A：乙腈（含0.1%甲酸），B：水（含0.1%甲酸）；以0.3mL/min 的流速進(jìn)行洗脫，洗脫梯度：0～1min，95%B；1～20min，95%～1%B；20～23min，1%B。樣品經(jīng)UHPLC 分離后用X-500R質(zhì)譜儀（AB SCIEX）進(jìn)行質(zhì)譜分析。通過單、多維統(tǒng)計(jì)分析篩選得到具有顯著性差異的離子（P＜0.05），差異倍數(shù)（FC）＞1.5 且VIP＞1.0，作為潛在生物標(biāo)記物。

1.4.4 腸道微生態(tài)-代謝組學(xué)聯(lián)合分析 本項(xiàng)目通過對代謝組學(xué)篩選得到的差異二級代謝物和16SrDNA 測序分析獲得的顯著性差異屬水平菌群進(jìn)行Spearman 相關(guān)性分析，獲得差異菌群與差異菌群，差異代謝物與差異代謝物，差異代謝物與差異菌群之間的關(guān)系?；谟?jì)算結(jié)果選擇合適的篩選條件，獲得最終的差異代謝物與差異代謝物的相關(guān)關(guān)系及網(wǎng)絡(luò)圖等。

1.4.5 蛋白組學(xué)-代謝組學(xué)聯(lián)合分析 通過京都基因與基因組百科全書（KEGG）通路將代謝組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)聯(lián)合起來，找到參與同一生物進(jìn)程（KEGG Pathway）中發(fā)生顯著性變化的蛋白質(zhì)和代謝物，快速鎖定關(guān)鍵基因。主要分為以下幾步：（1）蛋白質(zhì)組與代謝組通過KEGG 代謝通路進(jìn)行關(guān)聯(lián)；（2）顯著差異數(shù)據(jù)和調(diào)控關(guān)系對數(shù)據(jù)篩選；（3）基因本體論（GO）和KEGG 富集分析；（4）關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)表達(dá)模式聚類；（5）關(guān)聯(lián)數(shù)據(jù)網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 通過秩和檢驗(yàn)找出不同組間有明顯差異的腸道菌群，顯著性篩選的閾值為P＜0.05，同時(shí)對所有的P 值進(jìn)行錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率（fdr）校驗(yàn)。在差異蛋白分析中，生物學(xué)重復(fù)組間比較，符合差異倍數(shù)為1.2倍（上下調(diào)）且P＜0.05 篩選標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)視為差異表達(dá)蛋白質(zhì)，T-test 檢驗(yàn)方式限于有生物學(xué)重復(fù)的樣本兩組之間的比較。在進(jìn)行兩組樣本間的差異代謝物分析時(shí)，利用單變量分析可以直觀地顯示兩樣本間代謝物變化的顯著性，從而幫助我們篩選潛在的標(biāo)志代謝物（通常以FC＞1.5 且P＜0.05 作為篩選標(biāo)準(zhǔn)）。聯(lián)合分析采用斯皮爾曼相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 微生態(tài)組間差異

2.1.1 維恩圖 16SrDNA 測序分析結(jié)果顯示，本研究中28 個(gè)樣品共產(chǎn)生242 個(gè)OTU。兩組樣本有133個(gè)共有OTU，患者組有22 個(gè)獨(dú)有的OTU，健康對照組有87 個(gè)獨(dú)有的OTU。見圖1。

圖1 OTU 韋恩圖

2.1.2 差異物種分析 組間群落差異分析（LDA EffectSize，LEfSe），LEfSe 采用線性判別分析（LDA）來估算每個(gè)組分（物種）豐度對差異效果影響的大小，找出對樣品劃分產(chǎn)生顯著性差異影響的群落或物種。下圖統(tǒng)計(jì)兩組中有顯著作用的微生物類群通過LDA（線性回歸分析）后得到的LDA 分值。通過差異物種分析，兩組之間有顯著差異（P＜0.05）的菌屬，分別是羅斯氏菌、吉米菌、嗜沫凝聚桿菌、Fusicatenibacter、Intestinimonas、拉烏爾菌、克雷伯氏菌、養(yǎng)分缺乏菌、氣球菌、腸桿菌，前5 種菌群在患者組的豐度水平明顯高于健康對照組，后5 種菌群在患者組的豐度水平明顯低于健康對照組。見圖2。

圖2 差異物種LEfSe 分析圖

2.1.3 差異物種Spearman 相關(guān)系數(shù)分析 應(yīng)用LEfSe 在各水平上或秩和檢驗(yàn)在屬水平上（或某一特定水平），選擇豐度Top30 的差異物種，通過R 軟件的corrplot 包繪制物種之間Spearman 相關(guān)性熱圖，并通過該熱圖可以發(fā)現(xiàn)物種之間重要的模式與關(guān)系。通過差異物種Spearman 相關(guān)系數(shù)分析發(fā)現(xiàn)腸桿菌（Enterobacteriaceae）與埃希氏菌屬/志賀桿菌屬（Escherichia/Shigella）、克雷伯氏菌存在正相關(guān)，鏈球菌屬與放線菌屬存在正相關(guān)，普氏菌屬與柯林斯菌屬存在負(fù)相關(guān)。見圖3。

圖3 豐度Top30 的差異物種相關(guān)性系數(shù)分析

2.2 蛋白組學(xué)組間差異

2.2.1 差異蛋白上下調(diào)統(tǒng)計(jì)分析 差異蛋白上下調(diào)頻數(shù)統(tǒng)計(jì)用于判斷不同實(shí)驗(yàn)條件下差異蛋白的個(gè)數(shù)。其中橫坐標(biāo)表示比較組信息，縱坐標(biāo)表示上下調(diào)蛋白的數(shù)目，紅色代表上調(diào)蛋白，藍(lán)色代表下調(diào)蛋白，其中數(shù)字代表上下調(diào)蛋白的數(shù)目。蛋白定量分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與健康對照組相比，患者組有15 個(gè)上調(diào)蛋白和5 個(gè)下調(diào)蛋白，共計(jì)20 個(gè)差異蛋白。見圖4。

圖4 差異蛋白圖

2.2.2 差異蛋白基因功能分析 GO 的基本單位是term（詞條、節(jié)點(diǎn)），每個(gè)term 都對應(yīng)一個(gè)屬性。GO 功能顯著性富集分析首先把所有顯著性差異表達(dá)基因向Gene Ontology 數(shù)據(jù)庫的各term 映射，計(jì)算每個(gè)term 的基因數(shù)目，然后應(yīng)用超幾何檢驗(yàn)，找出與整個(gè)基因組背景相比，在顯著性差異表達(dá)基因中顯著富集的GO 條目。見圖5。

圖5 GO 富集性散點(diǎn)圖

2.2.3 差異蛋白KEGG 通路分析 通路顯著性富集分析以KEGG 通路為單位，應(yīng)用超幾何檢驗(yàn)，找出與整個(gè)基因組背景相比，在顯著性差異表達(dá)基因中顯著性富集的通路。見圖6。

圖6 KEGG 富集性散點(diǎn)圖

2.3 代謝組學(xué)組間差異 本實(shí)驗(yàn)以單變量統(tǒng)計(jì)分析P＜0.05和FC＞1.5 的代謝物，作為具有顯著性差異的代謝物，采用MetDNA和OSI/SMMS 軟件進(jìn)行代謝物結(jié)構(gòu)鑒定，具體鑒定結(jié)果（見表1），差異代謝物強(qiáng)度對比（見圖7）。本項(xiàng)目共鑒定出差異代謝物11 個(gè)，其中負(fù)離子模式下2 個(gè)，正離子模式下9 個(gè)。將得到的差異代謝物提交到Metaboanalyst 4.0 網(wǎng)站，進(jìn)行代謝通路分析。結(jié)果顯示，差異代謝物主要涉及亞油酸代謝、不飽和脂肪酸的生物合成、α-亞麻酸代謝、卟啉和葉綠素代謝、花生四烯酸代謝和色氨酸代謝等代謝通路，見圖8。

圖7 差異代謝物強(qiáng)度對比

圖8 差異代謝物富集代謝通路示意圖

表1 差異代謝物列表

2.4 腸道微生態(tài)-代謝組學(xué)聯(lián)合分析

2.4.1 差異代謝物-差異菌群相關(guān)性分析 通過菌群-代謝物聯(lián)合分析，我們發(fā)現(xiàn)硫酸吲哚氧基與艾克曼菌、梭狀菌存在正相關(guān)，與放線菌存在負(fù)相關(guān)。膽紅素與克雷伯菌存在負(fù)相關(guān)，與酸氨基球菌存在正相關(guān)。見圖9。

圖9 差異代謝物-差異菌群關(guān)聯(lián)熱圖

2.4.2 差異代謝物與菌群網(wǎng)絡(luò)調(diào)控分析 基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP9）、纖連蛋白（fibronectin，F(xiàn)N1）、胰島素樣生長因子Ⅱ受體（cation-independent mannose-6-phosphate receptor，IGF2）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子1 受體（macrophage colony-stimulating factor 1 receptor，CSF1R）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-2，MMP2）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（platelet-derived growth factor receptor beta，PDGFRB）。見圖10。

圖10 差異代謝物與菌群網(wǎng)絡(luò)調(diào)控圖

2.5 蛋白組學(xué)-代謝組學(xué)聯(lián)合分析 通過蛋白組學(xué)-代謝物聯(lián)合分析，患者組差異蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP9）、纖連蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N1）、胰島素樣生長因子Ⅱ受體（Cation-independent mannose-6-phosphate receptor，IGF2）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子1 受體（Macrophage colony-stimulating factor 1 receptor，CSF1R）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-2，MMP2）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體（Platelet-derived growth factor receptor beta，PDGFRB）及下游代謝物雄烯二酮與癌癥通路具有相關(guān)性。見圖11。

圖11 差異蛋白質(zhì)與差異代謝物關(guān)聯(lián)網(wǎng)路圖

3 討論

“組學(xué)”是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，將不同層面的信息進(jìn)行科學(xué)整合得到關(guān)聯(lián)分析結(jié)果，有助于擴(kuò)大視窗角度。氣陰兩虛證是肺癌的常見證候，臨床主要表現(xiàn)為神疲乏力，口干少飲，舌質(zhì)紅或淡，脈細(xì)弱等癥狀[5]。腸道微生物是宿主不可忽視的一部分[7]，中醫(yī)藥與腸道菌群的現(xiàn)代研究拓展了“臟腑學(xué)說”中“肺與大腸相表里”的理論[8]。在本研究中，相較于健康對照人群的腸道微生態(tài)，患者組存在明顯差異，患者組有22 個(gè)獨(dú)有的OTU，健康對照組有87 個(gè)獨(dú)有的OUT。通過差異物種分析發(fā)現(xiàn)，兩組間差異菌屬共有10 種，其中羅斯氏菌、吉米菌、嗜沫凝聚桿菌、Fusicatenibacter、Intestinimonas 在患者組的豐度水平明顯高于對照組，拉烏爾菌、克雷伯氏菌、養(yǎng)分缺乏菌、氣球菌、腸桿菌在患者組的豐度水平明顯低于對照組（P＜0.05）。Intestinimonas 菌種屬于瘤胃菌科，研究發(fā)現(xiàn)瘤胃球菌屬在NSCLC患者腸道微生態(tài)中含量較健康人群高[9]，這與本研究結(jié)果一致，但其與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有待進(jìn)一步探索。本研究組進(jìn)一步通過差異物種Spearman 相關(guān)系數(shù)分析，發(fā)現(xiàn)腸桿菌（Enterobacteriaceae）與埃希氏菌屬/志賀桿菌屬（Escherichia/Shigella）、克雷伯氏菌存在正相關(guān)。本研究推測肺癌的發(fā)生發(fā)展可能與腸道中某些菌群的增加或者減少有關(guān)。我們假設(shè)可通過觀察NSCLC患者氣陰兩虛型在腸道微生態(tài)方面的差異性，并研究NSCLC患者氣陰兩虛型的生物學(xué)基礎(chǔ)，以此來闡釋證候的科學(xué)內(nèi)涵。

本研究采用LC/MS 技術(shù)代謝組學(xué)分析，通過兩組比較共鑒定出差異代謝物11 個(gè)，其中負(fù)離子模式下2 個(gè)，正離子模式下9 個(gè)。差異代謝物主要涉及亞油酸代謝、不飽和脂肪酸的生物合成、α-亞麻酸代謝、卟啉和葉綠素代謝、花生四烯酸代謝和色氨酸代謝等代謝通路。其中色氨酸代謝通過增加腫瘤細(xì)胞的惡性增殖和抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)來促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，在腫瘤的發(fā)生進(jìn)展中扮演重要角色[10]。

與健康對照組比較，患者組有15 個(gè)上調(diào)蛋白和5 個(gè)下調(diào)蛋白，共計(jì)20 個(gè)差異蛋白。通過基因功能分析及KEGG 功能分析，與肺癌相關(guān)的差異蛋白主要涉及在免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)和癌癥轉(zhuǎn)錄失調(diào)通路。其中CSF1R 是腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞中的一個(gè)重要免疫信號通路。CSF1R 在正常組織中可協(xié)助巨噬細(xì)胞抑制受損組織處的免疫反應(yīng)，同時(shí)促進(jìn)血管再生來加速愈合，但是在癌癥中這個(gè)功能卻被用來促進(jìn)腫瘤生長。此外，在小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)CSF1R 抑制劑能夠通過對腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞進(jìn)行重新編程，提高抗原呈現(xiàn)和促進(jìn)抗腫瘤T細(xì)胞反應(yīng)[11]。MMPs 作為目前已知能降解細(xì)胞外基質(zhì)的重要酶類，在介導(dǎo)腫瘤血管新生、轉(zhuǎn)移和侵襲等過程中發(fā)揮重要作用。MMP-2/9 更被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中潛在的生物標(biāo)志物，研究表明MMP-2/9 的表達(dá)與NSCLC、直腸癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、甲狀腺乳頭狀癌等多種疾病進(jìn)展相關(guān)[12]。本研究進(jìn)一步通過蛋白組學(xué)-代謝組學(xué)聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)，其中6 個(gè)差異蛋白及代謝產(chǎn)物雄烯二酮富集在癌癥的相關(guān)通路。基礎(chǔ)研究表明，雄烯二酮對肺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞等具有一定的抑制作用[13]。

多組學(xué)研究是開啟中醫(yī)證候研究之門的鑰匙，本研究在中醫(yī)傳統(tǒng)理論的指導(dǎo)下，通過多組學(xué)聯(lián)合分析發(fā)現(xiàn)氣陰兩虛型NSCLC 具有特異的腸道菌群、蛋白質(zhì)和代謝產(chǎn)物，且與腫瘤的發(fā)生進(jìn)展密切相關(guān)。這有助于幫助我們闡明氣陰兩虛證的科學(xué)本質(zhì)，同時(shí)對肺癌機(jī)理研究、確定致病靶點(diǎn)起到推動(dòng)作用，為中醫(yī)證候研究提供新思路。