梁華倫，譚昌成，江秀娟，肖雪妍，徐萬幫,

（1.廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120；2.廣東省藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510163；3.廣州市海珠區(qū)食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 廣州 510100）

近紅外光譜技術(shù)是近年來廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)過程的質(zhì)量監(jiān)控、成品的放行檢驗(yàn)及真?zhèn)舞b別的新型技術(shù)[1-2]。該技術(shù)利用有機(jī)化學(xué)物質(zhì)在近紅外譜區(qū)內(nèi)的光學(xué)特性快速測(cè)定物質(zhì)化學(xué)組分含量，可以直接對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，樣品處理方法簡(jiǎn)單，具有操作簡(jiǎn)便、無損、快速、無需試劑等優(yōu)點(diǎn)，可用于藥品來源的質(zhì)量控制、生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制及上市后監(jiān)控，其應(yīng)用前景廣闊，在藥品監(jiān)控方面發(fā)揮著越來越重要的作用[3-4]。

小柴胡湯源自《傷寒論》，為張仲景的代表方劑。目前，我國(guó)市面有多個(gè)廠家生產(chǎn)的小柴胡顆粒在流通，暫未見小柴胡顆粒的近紅外模型報(bào)道，為更好辨別各廠家的小柴胡顆粒，本研究對(duì)小柴胡顆粒近紅外模型進(jìn)行探索，參考近紅外一致性評(píng)價(jià)的基本原理，根據(jù)不同廠家分別建立一致性檢驗(yàn)?zāi)Ｐ?。選取其中小柴胡顆粒市場(chǎng)抽樣最多的生產(chǎn)廠家的樣品為建?；A(chǔ)，建立小柴胡的近紅外模型?；谛〔窈w粒成分復(fù)雜，特征吸收峰不明顯，故采用漫反射技術(shù)，依據(jù)“一廠一品一規(guī)”的研究思路，通過比較待測(cè)樣品光譜與參考光譜的異同，可判斷是否來自同一廠家。

1 儀器與試藥

1.1 試藥本試驗(yàn)共收集到28個(gè)廠家不同規(guī)格的312批小柴胡顆粒樣品：廣州白云山光華制藥股份有限公司（樣品共24批，分別是無糖型9批次，有糖型15批次，以下簡(jiǎn)稱廣州光華）；四川逢春制藥有限公司（樣品共63批，全部為有糖型，以下簡(jiǎn)稱四川逢春）；云南白藥集團(tuán)股份有限公司（樣品共34批，以下簡(jiǎn)稱云南白藥）及其他廠家小柴胡顆粒。

1.2 主要儀器Matrix-F型傅里葉變換近紅外光譜儀（德國(guó)Bruker公司）；銦鎵砷（InGaAs）檢測(cè)器及漫反射裝置（德國(guó)Bruker公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理每批樣品隨機(jī)取5包，混勻，過2號(hào)藥典標(biāo)準(zhǔn)篩，取適量粉末置于漫反射杯中，均勻平鋪。

2.2 光譜采集與參數(shù)采用積分球漫反射系統(tǒng)，以空氣為參比，采用球積分模式掃描，扣除背景采集近紅外光譜[5]。分辨率：8 cm-1；背景掃描次數(shù)：32次；樣品掃描次數(shù)：32次；掃描范圍：12 000~4 000 cm-1。記錄測(cè)試時(shí)的溫度為23℃，相對(duì)濕度為63%。所采集的原始光譜作為建模光譜及測(cè)試光譜。每個(gè)樣品測(cè)量2次。

2.3 小柴胡顆粒近紅外光譜圖測(cè)定按照“2.1”和“2.2”的實(shí)驗(yàn)步驟，隨機(jī)抽取部分云南白藥生產(chǎn)的小柴胡顆粒為樣品進(jìn)行測(cè)定，典型的近紅外圖譜見圖1。

圖1 小柴胡顆粒（有糖型）近紅外光譜圖（云南白藥）

2.4 小柴胡顆粒一致性評(píng)價(jià)模型建立方法與結(jié)果

2.4.1 建模的參數(shù)與方法 嘗試用OPUS軟件的一致性檢驗(yàn)法建模[6]，用于比較未知光譜與建立的小柴胡顆粒參考光譜是否具有一致性。本研究采用一階導(dǎo)數(shù)+矢量歸一法等方法；選擇波數(shù)范圍：4 246.7~5 002.7 cm-1、5 596.7~6 900.4 cm-1和7 498.2~9 002.5 cm-1。依據(jù)上述參數(shù)，再根據(jù)實(shí)際調(diào)整CI值（Conformity Index），建立小柴胡顆粒一致性模型。

2.4.2 小柴胡顆粒（有糖型）（廣州光華）一致性模型的建立 參照建模的參數(shù)與方法，再根據(jù)實(shí)際調(diào)整CI值，獲得廣州光華生產(chǎn)的小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型。此次國(guó)家評(píng)價(jià)性抽樣所得廣州光華樣品15批，選擇一半作為參考光譜，一半為驗(yàn)證光譜，樣品圖譜經(jīng)過對(duì)CI值調(diào)整，一致性模型中的所有圖譜處理后CI值均落在5.1的范圍內(nèi)。（見圖2）

圖2 廣州光華小柴胡顆粒（有糖型）一致性評(píng)價(jià)模型

2.4.3 四川逢春生產(chǎn)小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型的建立 參照“2.4.1”項(xiàng)建模的參數(shù)與方法，參考廣州光華小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型的參數(shù)和預(yù)處理方式，建立四川逢春小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型。依據(jù)廣州光華小柴胡顆粒（有糖型）建模原理，再根據(jù)實(shí)際調(diào)整CI值，獲得四川逢春小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型。此次國(guó)家評(píng)價(jià)性抽樣所得四川逢春樣品63批，樣品圖譜經(jīng)過對(duì)CI值調(diào)整，并對(duì)所有圖譜處理后CI值均落在4.6的范圍內(nèi)。（見圖3）

圖3 四川逢春小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型

2.4.4 云南白藥小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型的建立 參照“2.4.1”項(xiàng)建模的參數(shù)與方法，參照廣州光華和四川逢春小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型的參數(shù)和預(yù)處理方式，建立云南白藥小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型。依據(jù)廣州光華小柴胡顆粒（有糖型）建模原理，再根據(jù)實(shí)際調(diào)整CI值，獲得云南白藥生產(chǎn)的小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型。此次國(guó)家評(píng)價(jià)性抽樣所得云南白藥樣品34批，樣品圖譜經(jīng)過對(duì)CI值調(diào)整，并對(duì)所有圖譜處理后CI值均落在3.5的范圍內(nèi)。（見圖4）

圖4 云南白藥小柴胡顆粒（有糖型）一致性模型

2.5 一致性驗(yàn)證結(jié)果考察所建立的各個(gè)廠家小柴胡顆粒近紅外一致性評(píng)價(jià)模型與幾個(gè)主流廠家的近紅外光譜的異同，在同樣的實(shí)驗(yàn)條件下掃描其他廠家近紅外圖譜。合并建立一個(gè)一致性模型，采用OPUS軟件的一致性檢驗(yàn)法，并與其他幾個(gè)主流廠家進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證。結(jié)果表明建立的各廠家一致性模型均能有效識(shí)別不同廠家的小柴胡顆粒，區(qū)分度良好。（見圖5~7）

圖5 廣州光華與其主流廠家驗(yàn)證圖

圖6 四川逢春小柴胡顆粒（有糖型）與其主流廠家驗(yàn)證圖

圖7 云南白藥小柴胡顆粒（有糖型）與其主流廠家驗(yàn)證圖

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)小柴胡顆粒近紅外圖譜的特征，在波長(zhǎng)選擇時(shí)避開7 100～7 500 cm-1，5 000～5 500 cm-1波數(shù)處的水峰，在Interactive Region Selection中觀察光譜的差異，選擇光譜差異較大處的譜段作為建模的譜段。

本實(shí)驗(yàn)建立了廣州光華、云南白藥、四川逢春等市場(chǎng)主流廠家小柴胡顆粒的近紅外一致性檢驗(yàn)?zāi)Ｐ停焖勹b別了各廠家生產(chǎn)的小柴胡顆粒，充分發(fā)揮了一致性模型快速檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，將行政監(jiān)督和技術(shù)檢驗(yàn)有機(jī)結(jié)合為一體，并能進(jìn)一步節(jié)約市場(chǎng)監(jiān)管成本，為監(jiān)督管理部門對(duì)小柴胡顆粒真?zhèn)舞b別提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支撐，為我國(guó)多廠家同一品種鑒別提供思路，對(duì)藥品的一致性評(píng)價(jià)有很好的參考意義。

近紅外光譜技術(shù)在藥品檢測(cè)方面廣泛應(yīng)用，涵蓋了從原材料供應(yīng)到生產(chǎn)全過程乃至上市后的監(jiān)督檢驗(yàn)，該技術(shù)具備定性及定量的系統(tǒng)功能，已應(yīng)用于藥監(jiān)系統(tǒng)快檢車的藥品快速檢驗(yàn)。但由于其建模需要樣品量大、影響測(cè)定結(jié)果的關(guān)鍵因素多、靈敏度較低（要求檢測(cè)物質(zhì)的含量＞1%）等因素的影響，近紅外技術(shù)的應(yīng)用受到一定的局限。需要廣大研究機(jī)構(gòu)及人員加大投入，組建行業(yè)建模中心，培養(yǎng)更多的專業(yè)人才；同時(shí)，需要在更高的層面引導(dǎo)更多的藥品生產(chǎn)企業(yè)將技術(shù)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中，相信未來近紅外光譜技術(shù)必將具有更廣闊的應(yīng)用前景[7-10]。

目前，在我國(guó)市面流通的中藥材存在多個(gè)產(chǎn)地、多來源、質(zhì)量參差不齊等現(xiàn)狀，很多中成藥、西藥有著一個(gè)品種多個(gè)廠家的情況，如何引進(jìn)近紅外光譜技術(shù)對(duì)中藥飲片、中成藥、西藥等各同類產(chǎn)品的一致性評(píng)價(jià)，這將有廣闊的應(yīng)用前景[11-15]。

本實(shí)驗(yàn)建立了廣州光華、云南白藥、四川逢春等市場(chǎng)主流廠家小柴胡顆粒的近紅外光譜一致性檢驗(yàn)?zāi)Ｐ停⒖梢詼?zhǔn)確快速地區(qū)別不同廠家生產(chǎn)的小柴胡顆粒，方法具有一定的專屬性。近紅外光譜是一種快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的分析技術(shù)，可用于藥品快速檢測(cè)[7-9]。