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        枳實(shí)薤白桂枝湯對(duì)家兔心肌缺血氧化應(yīng)激損傷的影響*

        2021-11-21 08:17:24王秀珍牟景龍邸金霖馮月男賈洪濤
        中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2021年5期
        關(guān)鍵詞:薤白桂枝湯枳實(shí)

        趙 楠,王秀珍,牟景龍,潘 娟,邸金霖,馮月男,賈洪濤

        (1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)中心,黑龍江 哈爾濱 150040;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150001;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150040)

        隨著社會(huì)的發(fā)展,人類(lèi)生活水平的提高,飲食、生活方式及工作壓力等多方面因素的影響,冠心病發(fā)病率逐年增高,已經(jīng)成了人類(lèi)健康的危險(xiǎn)因素之一。其中冠狀動(dòng)脈痙攣是引發(fā)多種冠心病的重要因素[1-2]。冠狀動(dòng)脈痙攣引起血管一過(guò)性收縮或閉塞,導(dǎo)致心肌血氧供應(yīng)驟然下降,引起心肌缺血,從而進(jìn)一步損傷心肌細(xì)胞[3]。其中氧化應(yīng)激損傷是導(dǎo)致心臟冠狀動(dòng)脈痙攣的一個(gè)重要因素。氧化應(yīng)激損傷是指機(jī)體出現(xiàn)異常時(shí),氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡,使體內(nèi)的氧自由基和活性氮自由基過(guò)量產(chǎn)出和堆積,機(jī)體無(wú)法有效清除,從而導(dǎo)致組織損傷[4]。枳實(shí)薤白桂枝湯為治療胸痹之常用方,可通陽(yáng)散結(jié),祛痰下氣,對(duì)于胸中痞滿(mǎn),脅氣上逆有良好的療效?,F(xiàn)代常應(yīng)用于冠心病的治療。本實(shí)驗(yàn)探究了家兔冠狀動(dòng)脈痙攣心肌缺血后,枳實(shí)薤白桂枝湯對(duì)其氧化應(yīng)激反應(yīng)的相關(guān)指標(biāo)血清總超氧化物歧化酶(SOD)、血清總抗氧化能力(TAOC)、血清丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)及對(duì)心臟病理?yè)p傷程度的影響。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年CL級(jí)家兔共50只,雌雄各半,體質(zhì)量2.5~3.0 kg,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(黑)2018-003,使用許可證號(hào):SYXK(黑)2018-007。家兔適應(yīng)性正常進(jìn)食進(jìn)水飼養(yǎng)1周后,通過(guò)BL-420F生物技能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)剔除心電圖Ⅱ?qū)?lián)不正常的家兔,正常家兔用于實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)本校倫理委員會(huì)批準(zhǔn),無(wú)虐殺動(dòng)物等現(xiàn)象。

        1.2 藥物 根據(jù)《金匱要略》原文記載[6],枳實(shí)薤白桂枝湯藥物組成:瓜蔞12 g,枳實(shí)12 g,桂枝6 g,厚樸12 g,薤白9 g。以上中藥購(gòu)自安徽天之然藥業(yè)有限公司。通過(guò)水提醇沉法進(jìn)行枳實(shí)薤白桂枝湯藥液的提取制備。

        1.3 試劑 內(nèi)皮素1(EDN1,武漢云科隆科技股份有限公司,批號(hào):L180407190);地爾硫卓(柏雅藥業(yè)有限公司,批號(hào):AZ-0161206);氨基甲酸乙酯(上海山浦化工有限公司,批號(hào):180111);肝素鈉注射液(江蘇萬(wàn)邦生物醫(yī)藥股份有限公司,批號(hào):1712013);GSH分析試劑盒(天津凱通化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):0170411);SOD試劑盒(天津凱通化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):0170331);MDA試劑盒(天津凱通化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):0170421);TAOC測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所,批號(hào):0180411);蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒(北京索萊寶科技有限公司,批號(hào):G1120)。

        1.4 主要儀器LDZ4-1.2型臺(tái)式離心機(jī)(北京醫(yī)用離心機(jī)廠);BL-420F型生物技能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都盟泰科技有限公司);狗兔兩用解剖臺(tái)(張家港生物醫(yī)學(xué)儀器廠);酶標(biāo)儀(上海閃譜生物科技有限公司);CX23型顯微鏡(日本奧林巴斯公司)。

        1.5 造模與分組 將50只家兔隨機(jī)分為模型組、枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組、枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組、枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組、地爾硫卓組,每組10只。造模前各組家兔分別灌胃給藥5 d,進(jìn)行藥物適應(yīng)預(yù)處理,在末次灌胃60 min后造模。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)吳以嶺方法[5],通過(guò)家兔耳緣靜脈注射EDN1誘導(dǎo)家兔發(fā)生心臟冠狀動(dòng)脈痙攣。首先按照家兔的體質(zhì)量比例,給予家兔5 mL/kg氨基甲酸乙酯緩慢推注進(jìn)行藥物麻醉,觀察家兔狀態(tài),當(dāng)家兔出現(xiàn)角膜反射遲鈍,四肢癱軟等相應(yīng)癥狀時(shí),麻醉完成準(zhǔn)備手術(shù)。給予家兔頸部備皮消毒后,剪開(kāi)皮膚組織,暴露頸靜脈后插管,用手術(shù)線(xiàn)結(jié)扎,以備實(shí)驗(yàn)獲取待測(cè)血清。術(shù)前調(diào)試生物技能系統(tǒng),各項(xiàng)參數(shù)設(shè)置完畢后,備用。將調(diào)試好的生物技能系統(tǒng)電極片連接于家兔四肢,記錄家兔Ⅱ?qū)?lián)心電圖,約0.5 h心電圖穩(wěn)定后,按家兔體質(zhì)量比例彈入式注射1.4 nmol/kg EDN1藥液。Ⅱ?qū)?lián)心電圖出現(xiàn)T波高尖,ST段明顯抬高即為造模成功。

        1.6 實(shí)驗(yàn)給藥 經(jīng)參照,漢代1 L換算成現(xiàn)代為200 mL,臨床常用劑量認(rèn)為1劑中藥可煎取約300 mL藥液,內(nèi)含有51 g生藥,人體每次服藥約100 mL,內(nèi)含生藥17 g。按體質(zhì)量為70 kg計(jì)算,人體正常每次服藥劑量為0.24 g/kg。故將提取的藥液濃縮至生藥17 g/100 mL。參照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用藥劑量進(jìn)行換算,實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量分別為0.395、0.790、1.580 g/kg,地爾硫卓劑量為5 mg/kg。各組家兔在制備模型前進(jìn)行灌胃預(yù)處理,3次/d,連續(xù)5 d,枳實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量組和地爾硫卓組家兔灌胃相應(yīng)藥物;模型組灌胃等體積的生理鹽水。

        1.7 觀察指標(biāo)

        1.7.1 血清氧化應(yīng)激水平5組家兔分別進(jìn)行4次采血,每次采血量為5 mL,4次時(shí)間點(diǎn)分別為造模前、造模后0.5 h、造模后2 h、造模后6 h,在采血后進(jìn)行高速離心分離血清,隨后將分離出的血清裝入消毒后的離心管中,低溫保存,待測(cè)備用。嚴(yán)格按照化學(xué)定量檢測(cè)試劑盒和ELISA試劑盒的檢測(cè)方法對(duì)血清中SOD、TAOC、MDA、GSH水平進(jìn)行檢測(cè)。

        1.7.2 心肌組織病理改變情況 在注射EDN1藥液造模6 h時(shí),家兔耳緣靜脈注射肝素鈉防止凝血,3 min后頸動(dòng)脈放血,迅速開(kāi)胸取心,修剪心臟周?chē)狙艿榷嘤嘟M織,僅保留心臟右心室,在4℃的條件下,用含4%的多聚甲醛磷酸緩沖固定液將右心室組織靜置24 h,隨后制作切片用于HE染色,觀察心肌組織病理?yè)p傷的程度。

        1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(±s)表示,組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1 各組家兔血清中SOD活性水平比較 不同注射時(shí)間(0.5、2、6 h)之間家兔血清中SOD活性水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在時(shí)間效應(yīng);模型組和枳實(shí)薤白桂枝湯低、中、高劑量組家兔注射后(0.5、2、6 h)血清中SOD活性水平隨時(shí)間延長(zhǎng)均逐漸降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);地爾硫卓組家兔注射后0.5 h血清中SOD活性水平低于注射前(P<0.05),注射后2、6 h血清中SOD活性水平與注射后0.5 h比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5組家兔血清中SOD活性水平總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在分組效應(yīng);注射前,地爾硫卓組和枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔血清中SOD活性水平高于模型組(P<0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中SOD活性水平與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);注射后,地爾硫卓組和枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔血清中SOD活性水平均高于模型組(P<0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中SOD活性水平與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中SOD活性水平低于地爾硫卓組(P<0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔血清中SOD活性水平與地爾硫卓組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。時(shí)間因素和分組因素間存在交互效應(yīng)(P<0.05)。(見(jiàn)表1、圖1)

        圖1 各組家兔各時(shí)間點(diǎn)血清中SOD活性水平變化趨勢(shì)圖

        表1 各組家兔SOD活性水平的比較(±s,U/mg)

        表1 各組家兔SOD活性水平的比較(±s,U/mg)

        注:F時(shí)間主效應(yīng)=68.399,P時(shí)間主效應(yīng)=0.000;F分組主效應(yīng)=5.622,P分組主效應(yīng)=0.001;F交互效應(yīng)=3.436,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與注射前比較,cP<0.05;與0.5 h比較,dP<0.05;與2 h比較,eP<0.05

        組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(g/kg) 注射前 注射后0.5 h 注射后2 h 注射6 h F P模型組 10 -枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組10 0.395枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組10 0.790枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組10 1.580地爾硫卓組 10 0.005 F 4.157 5.705 5.839 7.234 P 0.006 0.001 0.001 0.000 181.67±65.71 192.73±67.51b 278.10±72.86a 290.13±81.08a 285.33±117.55a 148.17±60.43c 156.25±55.91b c 259.83±69.44a c 261.58±80.94a c 222.54±90.39a c 141.61±53.49c 140.47±54.15b c d 234.33±46.32a c d 249.82±79.99a c d 224.46±98.12a c 126.42±50.75c d e 127.94±52.22b c d e 217.93±46.57a c d e 248.23±73.48a c d 210.56±92.65a c 45.875 0.000 17.042 0.001 12.521 0.003 71.687 0.000 17.474 0.001

        2.2 各組家兔血清中TAOC活性水平比較 不同注射時(shí)間(0.5、2、6 h)之間家兔血清中TAOC活性水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在時(shí)間效應(yīng);模型組家兔注射后(0.5、2、6 h)血清中TAOC活性水平均低于注射前(P<0.05),但注射后(0.5、2、6 h)血清中TAOC活性水平之間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔注射后(0.5、2、6 h)血清中TAOC活性水平隨時(shí)間延長(zhǎng)均逐漸降低,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔注射后0.5 h血清中TAOC活性水平與注射前比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但注射后2、6 h血清中TAOC活性水平逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5組家兔血清中TAOC活性水平總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在分組效應(yīng);注射前,地爾硫卓組和枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔血清中TAOC活性水平均高于模型組(P<0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中TAOC活性水平與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);注射后,枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔在注射后血清中TAOC活性均高于模型組(P<0.05),地爾硫卓組家兔血清中TAOC活性高于模型組(P<0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中TAOC活性水平與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔注射后6 h血清中TAOC活性水平低于地爾硫卓組(P<0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔血清中TAOC活性水平均高于地爾硫卓組(P<0.05)。時(shí)間因素和分組因素間存在交互效應(yīng)(P<0.05)。(見(jiàn)表2、圖2)

        表2 各組家兔TAOC活性水平的比較(±s,U/mg)

        表2 各組家兔TAOC活性水平的比較(±s,U/mg)

        注:F時(shí)間主效應(yīng)=139.890,P時(shí)間主效應(yīng)=0.000;F分組主效應(yīng)=29.093,P分組主效應(yīng)=0.000;F交互效應(yīng)=5.581,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與注射前比較,cP<0.05;與0.5 h比較,dP<0.05;與2 h比較,eP<0.05

        組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(g/kg) 注射前 注射后0.5 h 注射后2 h 注射后6 h F P模型組 10 -枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組10 0.395枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組10 0.790枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組10 1.580地爾硫卓組 10 0.005 F 38.884 30.488 20.879 18.328 P 0.000 0.000 0.000 0.000 11.49±2.35 10.84±3.27b 34.84±11.23ab 47.63±9.98ab 22.39±8.87a 9.16±2.17c 9.23±2.81 27.69±8.30abc 39.36±11.57abc 15.95±8.05ac 8.17±1.68c 7.18±3.03cd 23.25±7.75abcd 30.53±12.30abcd 12.77±4.86cd 5.81±1.77c 6.66±2.48bcd 19.37±7.18abcde 25.57±11.54abcde 9.64±3.36cde 143.556 0.000 76.299 0.000 38.682 0.000 121.031 0.000 75.007 0.000

        圖2 各組家兔各時(shí)間點(diǎn)血清中TAOC活性水平變化趨勢(shì)圖

        2.3 各組家兔血清中MDA含量比較 不同注射時(shí)間(0.5、2、6 h)之間家兔血清中MDA含量比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在時(shí)間效應(yīng);模型組家兔注射后(0.5、2、6 h)血清中MDA含量均高于注射前,且隨時(shí)間延長(zhǎng)均逐漸升高(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組和地爾硫卓組家兔注射后0.5 h血清中MDA含量均高于注射前,注射后2、6 h血清中MDA含量均高于注射前,但低于注射后0.5 h,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組家兔注射后0.5、2、6 h血清中MDA含量均高于注射前(P<0.05),且注射后2 h血清中MDA含量低于注射后0.5 h(P<0.05)。5組家兔血清中MDA含量總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在分組效應(yīng);注射前,5組家兔血清中MDA含量比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組家兔注射后0.5 h血清中MDA含量高于模型組(P<0.05);地爾硫卓組和枳實(shí)薤白桂枝湯低、高劑量組家兔血清中MDA含量與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中MDA含量高于地爾硫卓組(P<0.05);地爾硫卓組和枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組注射后2、6 h家兔血清中MDA含量均明顯低于模型組(P<0.05),且3組間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中MDA含量均明顯高于地爾硫卓組(P<0.05),且與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。時(shí)間因素和分組因素間存在交互效應(yīng)(P<0.05)。(見(jiàn)表3、圖3)

        表3 各組家兔血清中MDA含量比較(±s,nmol/mg)

        表3 各組家兔血清中MDA含量比較(±s,nmol/mg)

        注:F時(shí)間主效應(yīng)=145.011,P時(shí)間主效應(yīng)=0.000;F分組主效應(yīng)=5.677,P分組主效應(yīng)=0.001;F交互效應(yīng)=11.505,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與注射前比較,cP<0.05;與0.5 h比較,dP<0.05;與2 h比較,eP<0.05

        組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(g/kg)注射前 注射后0.5 h注射后2 h 注射后6 h F P模型組 10 -枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組10 0.395枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組10 0.790枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組10 1.580地爾硫卓組 10 0.005 F 1.079 6.477 5.699 10.198 P 0.378 0.000 0.001 0.000 2.87±1.84 3.51±1.84 2.20±0.66 3.27±1.14 3.28±1.93 9.71±3.21c 11.11±3.81b c 5.06±1.02a c 7.11±2.33c 7.62±3.38c 10.70±3.03c d 9.95±3.69b c d 4.60±0.7a c d 6.13±2.24a c d 5.88±3.76a c d 11.36±3.48c d e 9.00±3.86b c d e 4.82±0.52a c 5.59±1.23a c d 6.30±2.68a c d 53.528 0.000 43.498 0.000 59.011 0.000 63.795 0.000 45.492 0.000

        2.4 各組家兔血清中GSH活性水平比較 不同注射時(shí)間(0.5、2、6 h)之間家兔血清中GSH活性水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在時(shí)間效應(yīng);模型組家兔注射后(0.5、2、6 h)血清中GSH活性水平均低于注射前(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔注射后(0.5、2、6 h)血清中GSH活性水平逐漸降低,均低于注射前(P<0.05),且注射后2、6 h血清中GSH活性水平低于注射后0.5 h(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組和地爾硫卓組家兔注射后0.5、2、6 h血清中GSH活性水平均低于注射前(P<0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組家兔注射后血清中GSH活性水平出現(xiàn)先降低后升高再降低趨勢(shì),且各時(shí)間點(diǎn)間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5組家兔血清中GSH活性水平總體比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即存在分組效應(yīng);注射前,枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組和地爾硫卓組家兔血清中GSH活性水平與模型組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組家兔血清中GSH活性水平均高于模型組(P<0.05)。注射后,枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組和地爾硫卓組家兔血清中GSH活性水平均高于模型組(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔注射后0.5、2 h血清中GSH活性水平與模型組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),注射后6 h血清中GSH活性水平低于模型組(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔血清中GSH活性水平低于地爾硫卓組(P<0.05);枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組家兔血清中GSH活性水平高于地爾硫單組(P<0.05)。時(shí)間因素和分組因素間存在交互效應(yīng)(P<0.05)。(見(jiàn)表4、圖4)

        表4 各組血清中家兔GSH活性水平比較(±s,U/mg)

        表4 各組血清中家兔GSH活性水平比較(±s,U/mg)

        注:F時(shí)間效應(yīng)=263.033,P時(shí)間效應(yīng)=0.000;F分組效應(yīng)=22.194,P分組效應(yīng)=0.000;F交互效應(yīng)=9.151,P交互效應(yīng)=0.000;與模型組比較,aP<0.05;與地爾硫卓組比較,bP<0.05;與注射前比較,cP<0.05;與0.5 h比較,dP<0.05;與2 h比較,eP<0.05

        組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(g/kg) 注射前 注射后0.5 h 注射后2 h 注射后6 h F P模型組 10 -枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組10 0.395枳實(shí)薤白桂枝湯中劑量組10 0.790枳實(shí)薤白桂枝湯高劑量組10 1.580地爾硫卓組 10 0.005 F 25.996 19.091 21.957 17.963 P 0.000 0.000 0.000 0.000 727.67±138.84 619.18±153.67 945.88±110.10a b 1 270.38±215.08a b 683.65±185.04 446.86±130.91c 374.17±164.62b c 686.21±119.77a c 859.76±115.56a b c 620.18±161.56a c 431.58±142.23c 334.44±169.31b c d 607.79±94.74a c d 882.50±119.28a b c 570.57±163.54a c d 434.09±133.28c 306.92±171.58a b c d 575.59±93.35a c d e 807.31±111.26a b c d e 501.10±167.90c d e 148.784 0.000 145.202 0.000 112.004 0.000 38.794 0.000 17.505 0.001

        圖4 各組家兔各時(shí)間點(diǎn)血清中GSH活性水平變化趨勢(shì)圖

        2.5 各組家兔心肌組織病理改變情況 模型組家兔心肌組織纖維結(jié)構(gòu)出現(xiàn)排列混亂,間質(zhì)可見(jiàn)水腫,部分纖維組織壞死,伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);枳實(shí)薤白桂枝湯低劑量組家兔心肌組織變化與模型組相似;枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組和地爾硫卓組家兔心肌組織纖維斷裂及排列混亂程度減輕,心肌間質(zhì)水鐘程度減輕,炎癥細(xì)胞明顯減少。(見(jiàn)圖5)

        圖5 各組家兔心肌病理改變情況(HE,×400)

        3 討 論

        “胸痹”首見(jiàn)于《靈樞·本臟》,將胸痹分為“心痹”與“肺痹”兩大類(lèi)[7]。直至漢代張仲景在《金匱要略》中對(duì)“胸痹”的概念、病因病機(jī)及治法證候等有了詳細(xì)論述并創(chuàng)立栝樓薤白類(lèi)方劑治療胸痹心痛[8-9]。其中“胸痹心中痞氣,氣結(jié)在胸,胸滿(mǎn),脅下逆搶心,枳實(shí)薤白桂枝湯主之?!辫讓?shí)薤白桂枝湯治以通陽(yáng)散結(jié),祛痰下氣。此方由枳實(shí)、薤白、桂枝、瓜蔞、厚樸組成,方中瓜蔞味甘性寒,滌痰散結(jié),開(kāi)胸通痹;薤白辛溫,通陽(yáng)散結(jié),化痰散寒,能散胸中凝滯之陰寒、化上焦結(jié)聚之痰濁、宣胸中陽(yáng)氣以寬胸,為療胸痹之要藥,二者共為君藥。枳實(shí)下氣破結(jié),消痞除滿(mǎn);厚樸燥濕化痰,下氣除滿(mǎn),二者可助君藥寬胸散結(jié)、下氣除滿(mǎn)、通陽(yáng)化痰之效,均為臣藥;方中佐以桂枝通散寒,降逆平?jīng)_。本方藥簡(jiǎn)力專(zhuān),為治療冠心病的經(jīng)典方劑。

        近年來(lái),枳實(shí)薤白桂枝湯在治療冠心病的臨床療效中具有一定的優(yōu)勢(shì)。研究表明[10],枳實(shí)薤白桂枝湯加減運(yùn)用對(duì)痰濁內(nèi)阻型冠心病不穩(wěn)定型心絞痛具有一定療效,同時(shí)可降低同型半胱氨酸(Hcy)和C反應(yīng)蛋白(CRP)的水平。枳實(shí)薤白桂枝湯加味聯(lián)合西藥可有效的緩解胸陽(yáng)不振、痰阻心脈患者的臨床癥狀,有效降低患者心絞痛發(fā)作的頻率并改善血脂水平[11]。枳實(shí)薤白桂枝湯聯(lián)合曲美他嗪片對(duì)治療急性心肌梗死患者有顯著效果,且未增加不良反應(yīng)[12]?,F(xiàn)代藥理研究表明,枳實(shí)薤白桂枝湯可使離體家兔左心室舒張末壓(LVEDP)降低,左室收縮壓(LVSP)、+dp/dtmax、-dp/dtmax在等時(shí)間點(diǎn)時(shí)升高,表明枳實(shí)薤白桂枝湯在心肌缺血缺氧時(shí)對(duì)心臟泵血功能障礙具有一定的改善作用[13]。枳實(shí)薤白桂枝湯對(duì)家兔冠狀動(dòng)脈痙攣引起的心肌缺血具有一定的保護(hù)作用[14]。由此可知,枳實(shí)薤白桂枝湯對(duì)心肌缺血誘發(fā)的冠心病具有一定的療效,其具體治療機(jī)制應(yīng)進(jìn)一步研究。

        氧化應(yīng)激反應(yīng)在心肌缺血再灌注損傷中扮演重要的角色,對(duì)心肌細(xì)胞的損傷起到重要的作用。其是指體內(nèi)的抗氧化能力與氧化體系相對(duì)失衡,導(dǎo)致抗氧化能力下降,導(dǎo)致中性粒細(xì)胞炎性浸潤(rùn),氧自由基大量堆積,產(chǎn)生大量的氧化產(chǎn)物。與此同時(shí),導(dǎo)致蓄積的大量活性氧與心肌組織的脂質(zhì)體發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生大量MDA,所以MDA是評(píng)價(jià)氧化損傷和機(jī)體氧化活性的重要指標(biāo)[15]。SOD可有效對(duì)抗氧自由基,避免過(guò)氧化和自由基的損傷,促進(jìn)細(xì)胞組織損傷的修復(fù)。TAOC水平的改變可反映機(jī)體抗氧化損傷的防御能力,是氧化防御體系的重要部分。GSH作為機(jī)體的重要的抗氧化劑和自由基清除劑,其活性的變化具有重要意義。因此,心肌細(xì)胞GSH、SOD、TAOC、MDA水平的改變反映了機(jī)體抗自由基的能力[16]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察各組家兔在注射EDN1前、注射后0.5 h、注射后2 h、注射后6 h血清GSH、SOD、TAOC、MDA水平的改變,以及心臟病理?yè)p傷程度,發(fā)現(xiàn)枳實(shí)薤白桂枝湯可使GSH、SOD、TAOC活性水平提高,MDA水平降低,且枳實(shí)薤白桂枝湯中、高劑量組提升GSH、TAOC能力優(yōu)于地爾硫卓組。

        綜上所述,枳實(shí)薤白桂枝湯可有效干預(yù)氧化應(yīng)激損傷,其對(duì)冠狀動(dòng)脈痙攣引起的心肌缺血具有一定的保護(hù)作用,可有效改善家兔心臟損傷,其抗氧化應(yīng)激損傷機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血管內(nèi)細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,激活氧化應(yīng)激的相關(guān)信號(hào)通路相關(guān),其確切機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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