傅 超 趙賢寶 馬 云 季倩青 陳 亮

義烏市中心醫(yī)院 浙江 義烏 322000

本文旨在探討清胰利膽方對重癥急性胰腺炎（SAP）大鼠炎癥因子、腸黏膜屏障功能和肺泡巨噬細(xì)胞凋亡的影響。

1 材料

1.1 實驗動物：由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供的60只SPF級健康SD大鼠，體重220±20g，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，自由飲食飲水，控制飼養(yǎng)溫度22～25℃，控制飼養(yǎng)濕度50%～60%，自然晝夜交替。許可證號：SCXK（粵）2008-0002。

1.2 藥物：清胰利膽方，組成包括金銀花、柴胡、牡丹皮各6g，大黃、赤芍、姜黃、牡蠣、醋延胡索各3g。藥材由我院中藥房提供，均經(jīng)中藥房鑒定合格。藥材經(jīng)冷水浸泡120min，水煎，濃縮成含生藥1g/ml的濃縮藥液。

2 方法

2.1 分組：將60只大鼠均分為四組，每組15只，分別編號對照組、模型組、低劑量組、高劑量組。

2.2 模型制備：將模型組、低劑量組、高劑量組三組大鼠均禁食12h，并平臥固定于手術(shù)臺上。行戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉；予上腹部正中部位作切口，暴露胰腺頭部，辨認(rèn)十二指腸乳頭；使用留置針于十二指腸乳頭旁進(jìn)行穿刺，胰膽管沿乳頭方向探入且推入1.5cm，采用微血管鑷加管固定，且以微血管鑷夾閉膽總管。推注3.5%牛黃脫氧膽酸鈉0.1ml/100g，推注速度為0.1ml/min，觀察大鼠胰腺情況。若胰腺出現(xiàn)壞死、點狀出血、皂化斑形成及種植等改變則為造模成功。

2.3 給藥方法：等劑量生理鹽水對對照組、模型組進(jìn)行灌胃，清胰利膽方1ml/kg對低劑量組進(jìn)行灌胃，清胰利膽方4ml/kg對高劑量組進(jìn)行灌胃。

2.4 標(biāo)本采集和檢測方法：分述如下。

2.4.1 標(biāo)本采集：①血清標(biāo)本采集：給藥24h后，抽取大鼠眼眶血，放置于離心機上進(jìn)行分離，取上層血清，并放置于-70℃環(huán)境下儲存待測；②胰腺組織采集：大鼠于給藥24h后，稱取體重，斷頸處死后取胰腺組織，計算胰腺重量指數(shù)；③肺泡巨噬細(xì)胞采集：大鼠于給藥24h后，處死大鼠，摘取左肺，分離肺泡巨噬細(xì)胞。

2.4.2 病理形態(tài)學(xué)：取胰腺組織切片5μm，常規(guī)HE染色觀察胰腺組織形態(tài)學(xué)。取水腫、壞死、炎癥、出血各個評分之和為胰腺病理評分。

2.4.3 炎癥因子水平檢測：取上述適量血清，以ELISA法進(jìn)行白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平的檢測。

2.4.4 腸黏膜屏障功能指標(biāo)的檢測：取上述適量血清，以ELISA雙抗體夾心法進(jìn)行D-乳酸、二胺氧化酶（DAO）水平的檢測。

2.4.5 肺泡巨噬細(xì)胞凋亡測定：取上述肺泡巨噬細(xì)胞，根據(jù)Annexin V FITC/PI凋亡檢測試劑盒說明書標(biāo)準(zhǔn)測定細(xì)胞凋亡率。

3 統(tǒng)計學(xué)方法

4 結(jié)果

4.1 四組胰腺病理損傷評分比較：四組間胰腺病理損傷評分比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且除對照組外，各組間呈劑量依賴性。見表1。

表1 四組胰腺病理損傷評分比較（±s，分)

表1 四組胰腺病理損傷評分比較（±s，分)

注：與對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與低劑量組比較，△P＜0.05。

胰腺病理損傷評分0.18±0.04 6.87±0.73*3.19±0.38*#1.08±0.27*#△分組對照組模型組低劑量組高劑量組例數(shù)15 15 15 15

4.2 四組炎癥因子水平比較：四組間血清IL-6、IL-8、TNF-α水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且除對照組外，各組間呈劑量依賴性。見表2。

表2 四組炎癥因子水平的比較（±s，pg/ml）

表2 四組炎癥因子水平的比較（±s，pg/ml）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與低劑量組比較，△P＜0.05。

TNF-α 58.92±12.12 235.42±37.21*142.32±28.38*#83.21±20.43*#△組別對照組模型組低劑量組高劑量組例數(shù)15 15 15 15 IL-6 137.82±25.42 387.91±47.28*269.42±37.41*#162.32±21.89*#△IL-8 10.37±2.12 45.32±6.56*27.81±4.89*#15.46±3.31*#△

4.3 四組腸黏膜屏障功能指標(biāo)比較：四組間血清D-乳酸、DAO水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且除對照組外，各組間呈劑量依賴性。見表3。

表3 四組腸黏膜屏障功能指標(biāo)的比較（±s，μg/L）

表3 四組腸黏膜屏障功能指標(biāo)的比較（±s，μg/L）

注：與對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與低劑量組比較，△P＜0.05。

DAO 106.42±10.29 212.34±19.84*165.28±15.45*#132.27±13.12*#△分組對照組模型組低劑量組高劑量組例數(shù)15 15 15 15 D-乳酸116.23±15.45 272.12±29.18*208.32±23.27*#132.14±13.45*#△

4.4 四組肺泡巨噬細(xì)胞凋亡率比較：四組間肺泡巨噬細(xì)胞凋亡率比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且除對照組外，各組間呈劑量依賴性。見表4。

表4 四組肺泡巨噬細(xì)胞凋亡率的比較（±s，%)

表4 四組肺泡巨噬細(xì)胞凋亡率的比較（±s，%)

注：與對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與低劑量組比較，△P＜0.05。

肺泡巨噬細(xì)胞凋亡率17.82±3.24 3.25±0.76*6.98±2.14*#13.97±3.87*#△分組對照組模型組低劑量組高劑量組例數(shù)15 15 15 15

5 討論

SAP的發(fā)病機制較為復(fù)雜，目前認(rèn)為胰酶活性、微循環(huán)障礙等多種因素參與該病的發(fā)生與發(fā)展。當(dāng)胰酶內(nèi)消化酶被異?；罨瘯r可發(fā)生SAP，消化酶的活化引起大量炎性細(xì)胞因子分泌，從而導(dǎo)致胰腺組織出現(xiàn)細(xì)胞死亡、水腫、血管損傷和炎癥反應(yīng)等。因此，采取及時有效的治療SAP方法尤為重要。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，SAP可歸屬于“腹痛”“脾心痛”“胰癉”等范疇，《黃帝內(nèi)經(jīng)》提出，SAP發(fā)病時“痛如以錐針刺其心”特點；漢代張仲景《金匱要略》曰：“病者腹?jié)M……痛者為實，可下之?！薄度驑O一病證方論》曰：“脾心痛者，如針錐刺其心腹，蘊蘊然氣滿?！憋嬍巢还?jié)、食肥甘厚味，外邪侵襲，感受濕熱，情志不暢等均是SAP的誘發(fā)因素，致濕熱蘊結(jié)于中焦，使氣滯血瘀，進(jìn)一步發(fā)展為熱毒熾盛，瘀熱內(nèi)阻，故治療應(yīng)以清熱解毒、活血化瘀、通腑瀉熱等為法。清胰利膽顆粒作為一種中藥制劑，組成主要包括柴胡、大黃、姜黃、牡蠣、延胡索、赤芍、金銀花、牡丹皮。該方中大黃為君，瀉熱通腑；柴胡為臣，疏肝行氣；姜黃活血行氣、通經(jīng)止痛，牡蠣平肝固澀、散結(jié)止痛，延胡索活血行氣止痛，赤芍活血祛瘀、清熱涼血，金銀花、牡丹皮清熱解毒，均為使藥。諸藥聯(lián)用，共奏行氣活血、通經(jīng)止痛、清熱解毒、瀉熱通腑之效。

綜上所述，清胰利膽方可減輕SAP大鼠炎癥反應(yīng)，改善大鼠腸黏膜屏障功能，及促進(jìn)肺泡巨噬細(xì)胞凋亡，進(jìn)而發(fā)揮保護(hù)胰腺組織的作用。